| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-17页 |
| ·葡聚糖的发现及应用研究 | 第11-14页 |
| ·右旋糖苷的结构与性质 | 第12-13页 |
| ·右旋糖酐在医药上的应用 | 第13页 |
| ·右旋糖酐的其它用途 | 第13-14页 |
| ·右旋糖酐制备技术的现状及发展趋势 | 第14-17页 |
| ·发酵法 | 第15-16页 |
| ·直接发酵法 | 第15-16页 |
| ·定向发酵法 | 第16页 |
| ·游离酶制备右旋糖酐 | 第16-17页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第17页 |
| 第二章 葡聚糖蔗糖酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达 | 第17-40页 |
| ·实验材料 | 第18-19页 |
| ·菌株与质粒 | 第18页 |
| ·酶与试剂 | 第18-19页 |
| ·主要仪器设备 | 第19页 |
| ·方法与步骤 | 第19-28页 |
| ·Leuconostoc mesenteroides subsp dextranixum的复苏培养 | 第19页 |
| ·菌种的保存 | 第19-20页 |
| ·L.mesenteroides基因组总DNA的制备 | 第20页 |
| ·葡聚糖蔗糖酶基因(dsrD)的引物设计和PCR扩增 | 第20-21页 |
| ·PCR引物的设计 | 第20页 |
| ·PCR扩增 | 第20-21页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第21-22页 |
| ·质粒DNA的大量制备 | 第22页 |
| ·质粒DNA的小量制备 | 第22-23页 |
| ·DNA的酶切与连接 | 第23页 |
| ·连接产物化学转化大肠杆菌感受态细胞 | 第23页 |
| ·阳性克隆的筛选和酶切验证 | 第23-24页 |
| ·重组子质粒PCR验证 | 第24页 |
| ·L.mesenteroides葡聚糖蔗糖酶基因序列分析 | 第24页 |
| ·外源片段在大肠杆菌中的诱导表达 | 第24-25页 |
| ·表达产物的SDS—PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第25页 |
| ·葡聚糖蔗糖酶粗酶液的制备 | 第25页 |
| ·葡聚糖蔗糖酶粗酶液的酶活力检测 | 第25-27页 |
| ·DSRD活力单位定义 | 第25-26页 |
| ·测定原理 | 第26页 |
| ·果糖标准曲线的制作 | 第26-27页 |
| ·葡聚糖蔗糖酶活力测定方法 | 第27页 |
| ·葡聚糖蔗糖酶(DSRD)粗酶液特性研究 | 第27-28页 |
| ·温度对DSRD活力的影响 | 第27-28页 |
| ·pH值对DSRD活力的影响 | 第28页 |
| ·葡聚糖的酶合成及转化收率的计算方法 | 第28页 |
| ·结果和分析 | 第28-40页 |
| ·L.mesenteroide总DNA的制备 | 第28-29页 |
| ·葡聚糖蔗糖酶(dsrD)表达质粒的构建 | 第29-33页 |
| ·dsrD基因的克隆 | 第30页 |
| ·葡聚糖蔗糖酶(dsrD)与pET-30(a)载体的连接 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的酶切验证 | 第31-33页 |
| ·L.mesenteroides葡聚糖蔗糖酶基因序列分析 | 第33-34页 |
| ·诱导时间与酶活力 | 第34页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第34-35页 |
| ·重组酶粗酶液的酶活力及性质分析 | 第35-37页 |
| ·重组酶半衰期的测定 | 第37页 |
| ·重组酶Tm值测定 | 第37-38页 |
| ·葡聚糖的沉淀分离 | 第38-40页 |
| 第三章 讨论 | 第40-42页 |
| 第四章 结论与展望 | 第42-44页 |
| 1 结论 | 第42页 |
| 2 展望 | 第42-44页 |
| 参考文献 | 第44-50页 |
| 附录 | 第50-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第56页 |
