| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要（abstract） | 第5-11页 |
| 1 前言 | 第11-25页 |
| ·虫生真菌的研究历程 | 第11-12页 |
| ·我国虫生真菌资源及利用 | 第12页 |
| ·椰心叶甲的发生与危害 | 第12-14页 |
| ·椰心叶甲的防治现状 | 第14-15页 |
| ·物理防治 | 第14页 |
| ·化学防治 | 第14-15页 |
| ·生物防治 | 第15页 |
| ·绿僵菌 | 第15-23页 |
| ·绿僵菌对害虫的控制 | 第15-16页 |
| ·利用绿僵菌对害虫的控制 | 第16-17页 |
| ·绿僵菌的毒力研究 | 第17-18页 |
| ·绿僵菌对昆虫的侵染机理 | 第18-21页 |
| ·绿僵菌入侵过程中相关基因的研究 | 第21-23页 |
| ·目前国内外对绿僵菌的研究技术发展趋势 | 第23页 |
| ·本论文的研究意义及主要内容 | 第23-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-41页 |
| ·绿僵菌菌株的分离及鉴定 | 第25页 |
| ·椰心叶甲僵虫的采集 | 第25页 |
| ·土样的采集 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·菌株的分离与纯化 | 第25页 |
| ·菌株的鉴定 | 第25页 |
| ·绿僵菌菌株对椰心叶甲致病力的室内毒力测定 | 第25-26页 |
| ·菌株来源 | 第25-26页 |
| ·供试昆虫 | 第26页 |
| ·测定方法 | 第26页 |
| ·初步的室内毒力测定方法 | 第26页 |
| ·高毒力菌株的进一步筛选 | 第26页 |
| ·MA4 菌株的 ITS 序列测定 | 第26-30页 |
| ·材料与试剂 | 第26-27页 |
| ·方法 | 第27-30页 |
| ·基因组DNA 提取 | 第27页 |
| ·ITS 的 PCR 扩增 | 第27-28页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第28页 |
| ·回收产物的连接 | 第28页 |
| ·大肠杆菌E.coli JM109 感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·连接产物转化至大肠杆菌E.coli JM109 感受态细胞 | 第29页 |
| ·克隆载体质粒DNA 的提取 | 第29-30页 |
| ·重组质粒PCR 检测鉴定 | 第30页 |
| ·绿僵菌的蛋白酶活性及其与毒力间的关系 | 第30-32页 |
| ·供试菌株 | 第30-31页 |
| ·试剂 | 第31页 |
| ·明胶、虫尸粉培养基的制备及蛋白酶活性的测定 | 第31页 |
| ·孢子液的制备 | 第31页 |
| ·虫尸粉培养基的制备 | 第31页 |
| ·明胶液体培养基的制备 | 第31页 |
| ·蛋白酶活性的测定 | 第31页 |
| ·明胶-琼脂平板分析法 | 第31-32页 |
| ·MA4 菌株的表皮降解蛋白酶基因 Pr1A 的克隆及表达 | 第32-37页 |
| ·材料及试剂 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-37页 |
| ·引物的设计 | 第32页 |
| ·MA4 菌株总 RNA 的提取 | 第32-33页 |
| ·cDNA 的合成 | 第33页 |
| ·PCR 扩增 | 第33-34页 |
| ·回收片段的克隆 | 第34页 |
| ·Pr1A 基因的表达 | 第34-36页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 电泳 | 第36-37页 |
| ·Pr1A 重组蛋白的抗血清研究 | 第37-41页 |
| ·抗原的制备 | 第37-38页 |
| ·免疫程序 | 第38页 |
| ·血液处理及保存 | 第38页 |
| ·抗血清的ELISA 效价 | 第38-39页 |
| ·Pr1A 重组蛋白的 Western-blotting 分析 | 第39-40页 |
| ·蛋白酶液的免疫斑点杂交检测 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-55页 |
| ·绿僵菌菌株的分离及鉴定 | 第41-42页 |
| ·菌株的培养特征 | 第41页 |
| ·分生孢子的形状及大小 | 第41-42页 |
| ·绿僵菌菌株对椰心叶甲致病力的室内毒力测定 | 第42-45页 |
| ·发病症状 | 第42页 |
| ·初步的室内毒力测定结果 | 第42-44页 |
| ·高毒力菌株进一步筛选的结果 | 第44-45页 |
| ·MA4 菌株的 ITS 序列测定 | 第45-47页 |
| ·MA4 菌株基因组 DNA 的提取 | 第45页 |
| ·ITS 的 PCR 扩增结果 | 第45-46页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定 | 第46页 |
| ·ITS 序列结果分析 | 第46-47页 |
| ·绿僵菌的蛋白酶活性及其与毒力间的关系 | 第47-49页 |
| ·两株绿僵菌菌株的产酶水平结果与分析 | 第47页 |
| ·两株绿僵菌菌株蛋白酶产量的测定 | 第47-49页 |
| ·MA4 菌株的表皮降解蛋白酶基因 Pr1A 的克隆与表达 | 第49-52页 |
| ·Pr1A 基因克隆与鉴定 | 第49-50页 |
| ·表达载体的构建及酶切鉴定 | 第50-51页 |
| ·Pr1A 基因的序列分析 | 第51页 |
| ·Pr1A 基因在大肠杆菌中的表达分析 | 第51-52页 |
| ·Pr1A 重组蛋白的抗血清研究 | 第52-55页 |
| ·抗血清制备 | 第52页 |
| ·抗血清的ELISA 效价 | 第52-53页 |
| ·Pr1A 重组蛋白的 Western-blotting 分析 | 第53页 |
| ·蛋白酶液的免疫斑点杂交检测 | 第53-55页 |
| 4 讨论 | 第55-58页 |
| ·绿僵菌高毒力菌株的筛选 | 第55页 |
| ·MA4 菌株的 ITS 序列的测定 | 第55页 |
| ·绿僵菌的蛋白酶活性及其与毒力间的关系 | 第55-56页 |
| ·MA4 菌株的表皮降解蛋白酶基因 Pr1A 的克隆与表达 | 第56-57页 |
| ·Pr1A 重组蛋白的抗血清研究 | 第57-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-70页 |
| 附录 就读期间公开发表的论文 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
