| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 符号说明 | 第13-14页 |
| 主要仪器与药品 | 第14-17页 |
| 综述 | 第17-22页 |
| 1.BMSCs 的生物学特性 | 第17-18页 |
| 2.BMSCs 的分离、培养 | 第18-19页 |
| ·BMSCs 的分离 | 第18页 |
| ·BMSCs 的培养 | 第18-19页 |
| 3.BMSCs 定向分化为软骨细胞和成骨细胞 | 第19-20页 |
| ·BMSCs 定向分化为软骨细胞 | 第19页 |
| ·BMSCs 定向分化为成骨细胞 | 第19-20页 |
| 4.Hedgehog 信号通路 | 第20-21页 |
| 5.小结 | 第21-22页 |
| 实验研究 | 第22-50页 |
| 第一部分 大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及初步鉴定 | 第22-28页 |
| 前言 | 第22页 |
| 1、实验前的准备工作 | 第22-23页 |
| ·使用器械及玻璃制品的灭菌 | 第22页 |
| ·培养用液的配制 | 第22-23页 |
| 2、实验材料和实验方法 | 第23-24页 |
| ·实验动物 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-24页 |
| ·骨髓间充质干细胞的分离 | 第23页 |
| ·骨髓间充质干细胞的原代和传代培养 | 第23-24页 |
| ·骨髓间充质干细胞的鉴定 | 第24页 |
| ·细胞形态学观察 | 第24页 |
| ·流式细胞术检测 | 第24页 |
| 3、实验结果 | 第24-26页 |
| ·骨髓间充质干细胞的形态学观察 | 第24-25页 |
| ·流式细胞术检测 | 第25-26页 |
| 4、讨论 | 第26-28页 |
| 第二部分 Hedgehog 信号分子在骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞中的作用 | 第28-41页 |
| 前言 | 第28页 |
| 1、诱导大鼠BMSCs 向成骨细胞分化 | 第28-29页 |
| ·配制实验诱导试剂 | 第28-29页 |
| ·诱导细胞分化 | 第29页 |
| 2.BMSCs 分化为成骨细胞过程中I 型胶原、SHH 及IHH 的检测 | 第29-33页 |
| ·免疫细胞化学检测I 型胶原的表达 | 第29-30页 |
| ·细胞爬片培养 | 第29页 |
| ·细胞固定 | 第29页 |
| ·细胞破膜 | 第29页 |
| ·阻断内源性酶的活性 | 第29页 |
| ·封闭处理 | 第29页 |
| ·一抗处理 | 第29页 |
| ·免疫组织化学试剂盒处理 | 第29-30页 |
| ·DAB 显色 | 第30页 |
| ·复染和封片 | 第30页 |
| ·显微照相 | 第30页 |
| ·Western Blotting 检测SHH 及IHH 的表达 | 第30-32页 |
| ·溶液的配制 | 第30页 |
| ·提取培养细胞的总蛋白 | 第30-31页 |
| ·灌制SDS-PAGE 凝胶 | 第31页 |
| ·蛋白样品电泳 | 第31页 |
| ·转膜 | 第31-32页 |
| ·抗体孵育 | 第32页 |
| ·显色 | 第32页 |
| ·照相并分析 | 第32页 |
| ·RT-PCR 检测Shh 及Ihh 的表达 | 第32-33页 |
| ·提取总RNA | 第32页 |
| ·第一链cDNA 的合成 | 第32页 |
| ·PCR 反应 | 第32-33页 |
| 3、主要观察指标 | 第33页 |
| 4、统计学分析 | 第33页 |
| 5、实验结果 | 第33-39页 |
| ·BMSCs 诱导成成骨细胞的形态变化 | 第33-34页 |
| ·Ⅰ型胶原的免疫组化表达情况 | 第34-35页 |
| ·SHH 蛋白和IHH 蛋白在诱导BMSCs 成成骨细胞过程中的表达 | 第35-37页 |
| ·Shh 和Ihh 在BMSCs 诱导成成骨细胞过程中的基因表达 | 第37-39页 |
| 6、讨论 | 第39-41页 |
| 第三部分 Hedgehog 信号分子在骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞中的作用 | 第41-50页 |
| 前言 | 第41页 |
| 1、诱导大鼠BMSCs 向软骨细胞分化 | 第41-42页 |
| ·配制实验诱导试剂 | 第41-42页 |
| ·诱导细胞分化 | 第42页 |
| 2.BMSCs 分化为软骨细胞过程中I 型胶原、SHH 及IHH 的检测 | 第42页 |
| ·免疫细胞化学检测Ⅱ型胶原的表达 | 第42页 |
| ·Western Blotting 检测SHH 及IHH 的表达 | 第42页 |
| ·RT-PCR 检测Shh 及Ihh 的表达 | 第42页 |
| 3、主要观测指标 | 第42页 |
| 4、统计学分析 | 第42-43页 |
| 5、实验结果 | 第43-48页 |
| ·BMSCs 诱导成软骨细胞时的形态变化 | 第43页 |
| ·Ⅱ型胶原的免疫组化表达情况 | 第43-44页 |
| ·SHH 蛋白和IHH 蛋白在BMSCs 诱导成软骨细胞过程中的表达 | 第44-46页 |
| ·Shh 和Ihh 在BMSCs 诱导成软骨细胞过程中的基因表达 | 第46-48页 |
| 6、讨论 | 第48-50页 |
| 小结 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 攻读学位期间发表的学术论著 | 第58页 |
