| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 前言 | 第12-34页 |
| 1.苏云金芽孢杆菌概论 | 第12-13页 |
| 2.苏云金芽孢杆菌毒素 | 第13页 |
| 3.苏云金芽孢杆菌ICPs基因 | 第13-19页 |
| ·ICPs基因的定位 | 第13-14页 |
| ·ICPs基因的命名与分类研究 | 第14-16页 |
| ·ICPs基因的表达调控 | 第16-19页 |
| 4.ICPs的结构和功能 | 第19-23页 |
| ·ICPs的结构 | 第19-20页 |
| ·ICPs的功能 | 第20-22页 |
| ·ICPs结构与功能的关系 | 第22-23页 |
| 5.苏云金芽孢杆菌的应用研究 | 第23页 |
| 6.定点突变技术的应用研究 | 第23-27页 |
| ·寡核苷酸引物介导的定点突变 | 第24-25页 |
| ·PCR介导的定点突变法——大引物突变法 | 第25-26页 |
| ·盒式突变法 | 第26-27页 |
| 7.ICPs的定点突变研究 | 第27-31页 |
| ·结构域Ⅰ的突变 | 第27-28页 |
| ·结构域Ⅱ的突变 | 第28-30页 |
| ·结构域Ⅲ的突变 | 第30-31页 |
| 8.立题依据和意义 | 第31-34页 |
| 材料与方法 | 第34-46页 |
| 1.材料 | 第34-39页 |
| ·菌株与质粒 | 第34-35页 |
| ·培养基和抗生素 | 第35页 |
| ·试剂和引物 | 第35-39页 |
| ·仪器设备 | 第39页 |
| 2.方法 | 第39-46页 |
| ·苏云金芽孢杆菌4.0718菌株质粒的提取 | 第39-40页 |
| ·PCR扩增 | 第40页 |
| ·cry1Aa基因的克隆 | 第40-42页 |
| ·重组质粒UAaHT35的构建 | 第42页 |
| ·质粒在无晶体突变株中的表达 | 第42-43页 |
| ·杀虫活性的测定 | 第43页 |
| ·定点突变 | 第43-44页 |
| ·DeepView/Swiss-PdbViewer软件分析 | 第44-46页 |
| 结果与分析 | 第46-66页 |
| 1.Bt4.0178菌株质粒的提取及cry1Aa基因的鉴定 | 第46页 |
| 2.全长序列的cry1Aa基因的PCR扩增 | 第46-48页 |
| 3.中间重组质粒pUAaH19的构建 | 第48-51页 |
| 4.表达载体pUAaH35的构建 | 第51页 |
| 5.表达载体pUAaH35电转化无晶体突变株cry~-B和鉴定 | 第51-52页 |
| 6.SDS-PAGE检测 | 第52-53页 |
| 7.cry1Aa基因的定点突变 | 第53-55页 |
| 8.突变株表达载体的构建 | 第55-57页 |
| 9.突变子在cry~-B宿主菌中的表达和SDS—PAGE检测 | 第57页 |
| 10.Cry1Aa及其突变株伴孢晶体观察 | 第57-59页 |
| 11.软件分析比较突变前后蛋白质结构的变化 | 第59-63页 |
| 12.Cry1Aa及突变株生物活性测定结果分析 | 第63-66页 |
| 讨论 | 第66-74页 |
| 1.定点突变效果探讨 | 第66-68页 |
| 2.突变目的基因及目标位点的选择 | 第68-70页 |
| 3.cry1Aa基因的克隆策略 | 第70-71页 |
| 4.突变技术的选择及技术路线 | 第71-74页 |
| 结语 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-92页 |
| 附录 | 第92-94页 |
| 致谢 | 第94-96页 |
