| 中文摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-35页 |
| ·DNA 疫苗的研究进展 | 第13-25页 |
| ·核酸疫苗的研究历史 | 第13页 |
| ·核酸疫苗的组成结构 | 第13-14页 |
| ·DNA 疫苗的免疫机制 | 第14-16页 |
| ·核酸疫苗的优点及其不足 | 第16-18页 |
| ·核酸疫苗的优点 | 第16-18页 |
| ·核酸疫苗的不足 | 第18页 |
| ·影响DNA 免疫效果的主要因素 | 第18-19页 |
| ·目的基因的选择 | 第18页 |
| ·载体及启动子的选择 | 第18-19页 |
| ·增强剂和佐剂的应用 | 第19页 |
| ·接种途径和剂量 | 第19页 |
| ·接种前动物组织的预处理 | 第19页 |
| ·增强DNA 疫苗免疫效果的策略 | 第19-25页 |
| ·细胞因子基因佐剂 | 第19-21页 |
| ·共刺激分子 | 第21-22页 |
| ·补体佐剂 | 第22页 |
| ·免疫刺激序列（immunostimulation sequence，ISS） | 第22-23页 |
| ·霍乱毒素（choleratoxin，CT）和大肠杆菌不耐热肠毒素（heat-labile enterotoxin，LT） | 第23页 |
| ·蛋白转换域（protein transduction domains，PTD） | 第23页 |
| ·模拟或增强MHC 作用 | 第23-24页 |
| ·提高APC 存活时间和捕捉处理抗原的能力 | 第24页 |
| ·提高抗原处理能力 | 第24-25页 |
| ·双作用子的应用 | 第25页 |
| ·补体C3d 研究进展 | 第25-30页 |
| ·C3d 的分子结构 | 第26页 |
| ·C3d 的分子佐剂作用 | 第26-28页 |
| ·C3d 分子佐剂作用的可能机制 | 第28-30页 |
| ·PRRSV 及其GP5 基因 | 第30-34页 |
| ·PRRSV 的病原学特征 | 第31-32页 |
| ·基因组特征 | 第32-33页 |
| ·GP5 | 第33-34页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第34-35页 |
| 2 材料和方法 | 第35-51页 |
| ·材料 | 第35-37页 |
| ·菌株和毒株 | 第35页 |
| ·载体 | 第35页 |
| ·试剂 | 第35页 |
| ·试验动物 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| ·试验所用溶液及其配制 | 第35-36页 |
| ·RT-RCR 试验所用物品的准备和处理 | 第36-37页 |
| ·方法 | 第37-51页 |
| ·猪C3d 基因的克隆及鉴定 | 第37-41页 |
| ·猪的免疫刺激 | 第37页 |
| ·猪肝脏总RNA 提取 | 第37-38页 |
| ·引物设计 | 第38页 |
| ·RT-PCR 扩增C3dcDNA | 第38-39页 |
| ·目的条带回收 | 第39页 |
| ·制作感受态细胞 | 第39-40页 |
| ·PCR 产物与pMD18-T 的连接及转化 | 第40页 |
| ·阳性克隆鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的构建 | 第41-45页 |
| ·P28 串联体的构建 | 第41-45页 |
| ·PRRSV GP5 基因的RT-PCR 扩增 | 第45页 |
| ·插入抗原基因 | 第45-46页 |
| ·重组质粒的大量提取 | 第46-47页 |
| ·重组质粒在Marc-145 细胞的表达 | 第47-48页 |
| ·Marc-145 细胞的制备 | 第47页 |
| ·pcDNA-GP5-P28.6 阳性重组质粒转染Marc145 细胞 | 第47-48页 |
| ·间接免疫荧光观察转染细胞 | 第48页 |
| ·重组质粒免疫效果的检测 | 第48-51页 |
| ·LSI ELISA 试剂盒检测 PRRSV GP5 特异性抗体 | 第49页 |
| ·操作步骤 | 第49页 |
| ·试验结果的判定 | 第49页 |
| ·小鼠血清中IL-4 的检测 | 第49-50页 |
| ·小鼠血清中IFN-γ的检测 | 第50-51页 |
| 3 结果 | 第51-60页 |
| ·猪C3d 的克隆及鉴定结果 | 第51-54页 |
| ·RT-PCR 扩增猪C3dcDNA 及酶切鉴定结果 | 第51-52页 |
| ·猪C3d cDNA 的测序结果 | 第52-54页 |
| ·猪C3d 基因序列 | 第52-53页 |
| ·猪C3d 基因序列分析 | 第53-54页 |
| ·构建P28 串联体 | 第54-55页 |
| ·P28 基因的克隆 | 第54页 |
| ·P28 串联体的构建 | 第54-55页 |
| ·RT-PCR 扩增PRRSV GP5 基因 | 第55-56页 |
| ·pCDNA-GP5-P28.n（2、4、6）重组质粒的构建 | 第56页 |
| ·重组质粒pCDNA-GP5-P28.n（2、4、6）的效果研究 | 第56-60页 |
| ·重组质粒在细胞内的表达 | 第56-57页 |
| ·重组质粒对小鼠的免疫效果 | 第57-60页 |
| ·对小鼠体液免疫（抗体水平）增强结果 | 第57-58页 |
| ·对小鼠细胞免疫（IL-4 和IFN-γ的含量）增强结果 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-63页 |
| ·C3d 分子佐剂研究 | 第60页 |
| ·C3d 基因的克隆及序列分析 | 第60-61页 |
| ·pcDNA3.1-GP5-p28.n 重组质粒的构建 | 第61-62页 |
| ·影响细胞转染的因素 | 第62页 |
| ·重组质粒免疫效果的检测 | 第62-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 6 参考文献 | 第64-76页 |
| 7 致谢 | 第76-77页 |
| 8 攻读学位期间发表论文情况 | 第77-78页 |
| 硕士学位论文内容简介及自评 | 第78页 |
