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葡萄花发育相关基因的克隆与表达特性研究

摘要第1-12页
ABSTRACT第12-16页
缩略词第16-19页
第一章 文献综述第19-40页
 1 开花决定第19-22页
   ·光周期诱导途径第19-21页
   ·春化作用途径第21页
   ·自主途径第21页
   ·赤霉素(GA)诱导途径第21页
   ·开花抑制基因第21-22页
 2 花的发端第22页
 3 花器官的发育第22-31页
   ·花发育的ABC模型及其发展第23-26页
     ·花发育的ABC模型第23页
     ·花发育的ABCD模型第23-24页
     ·花发育的ABCDE模型第24-25页
     ·花发育的四重奏模型第25-26页
   ·MADS-box基因研究进展第26-31页
     ·MADS-box基因的类型及其结构特点第26-27页
     ·MADS-box基因的重复及其功能的多样性第27-31页
       ·AP1/FRUITFULL(FUL)-like亚家族(A类)第28-29页
       ·AP3/PI-like(DEF/GLO)亚家族(B类)第29页
       ·AG-like 家族(C/D类)第29-30页
       ·SEP-like亚家族(E类)第30-31页
 4 葡萄花发育的分子生物学研究进展第31-38页
   ·葡萄的开花过程第31-32页
   ·卷须和花序是相关的结构第32-33页
   ·葡萄的花序起始和发育第33-35页
     ·葡萄的开花转变第33-34页
     ·赤霉素和基因VvGAI1对葡萄开花的影响第34页
     ·分生组织决定基因第34-35页
   ·葡萄的花和果实发育第35-38页
     ·花和果实的器官决定基因第35-36页
     ·葡萄的MADS-box基因第36-38页
       ·VvMADS1:一个推定的C类基因第36-37页
       ·VvMADS2和VvMADS4:推定的SEPALLATA基因第37页
       ·VvMADS3和VvMADS5:未知功能的MADS-box基因第37-38页
       ·VvMADS8:SOC1的同源基因第38页
       ·VvMADS9:一个B类MADS-box基因第38页
 5 小结与展望第38-40页
第二章 葡萄MADS-box家族基因保守片段的克隆与序列分析第40-48页
 1 材料与方法第41-43页
   ·试验材料第41页
   ·总RNA的提取及检测第41-42页
   ·cDNA第一链的合成第42页
   ·RT-PCR第42-43页
   ·序列及系统发育分析第43页
 2 结果与分析第43-47页
   ·总RNA提取第43-44页
   ·RT-PCR扩增葡萄MADS-box基因保守片段第44页
   ·序列及系统发育分析第44-47页
 3 讨论第47-48页
第三章 葡萄LEAFY基因启动子的克隆与序列分析第48-58页
 1 材料与方法第49-51页
   ·材料第49页
     ·植物材料第49页
     ·主要试剂第49页
   ·方法第49-51页
     ·总DNA提取第49页
     ·LFY基因克隆第49-50页
     ·LEAFY基因5′上游序列的克隆第50-51页
       ·接头、引物设计与合成第50页
       ·基因组步移文库的构建第50页
       ·PCR反应第50-51页
     ·启动子序列分析第51页
 2 结果与分析第51-56页
   ·LFY基因克隆与序列分析第51页
   ·LFY基因5′侧翼区域的克隆与序列分析第51-56页
     ·引物设计第51页
     ·基因组DNA的酶切、接头连接第51-52页
     ·Touch-Down PCR第52-53页
     ·序列分析及顺式元件预测第53-55页
     ·不同物种FLO/LFY同源基因启动子序列的比较第55-56页
 3 讨论第56-58页
第四章 葡萄AGAMOUS-like MADS-box基因的克隆与表达特性研究第58-72页
 1 材料和方法第59-64页
   ·试验材料第59-60页
   ·总RNA的提取第60页
   ·cDNA第一链的合成第60页
   ·3′RACE及VvAG编码区全长cDNA的扩增第60页
   ·VvAG序列多比对及系统发育树的构建第60-61页
   ·半定量RT-PCR检测VvAG在不同葡萄组织中的表达第61页
   ·VvAG基因结构分析第61页
   ·VvAG双元表达载体的构建及鉴定第61页
   ·农杆菌介导VvAG转化烟草第61-62页
   ·转VvAG基因烟草的分子检测第62-64页
     ·烟草总DNA的提取第62页
     ·烟草总RNA的提取第62-63页
     ·总RNA中DNA的消化第63页
     ·PCR及RT-PCR反应第63-64页
 2 结果与分析第64-71页
   ·VvAG基因的克隆第64页
   ·VvAG基因的序列分析第64-67页
   ·VvAG在不同葡萄组织中的表达分析第67-68页
   ·VvAG基因的基因组结构第68页
   ·VvAG双元表达载体的构建及鉴定第68-70页
   ·转VvAG基因烟草的PCR检测第70页
   ·转VvAG基因烟草的RT-PCR检测第70-71页
 3 讨论第71-72页
第五章 葡萄APETALA3(AP3)同源基因的克隆与表达特性研究第72-83页
 1 材料和方法第73-74页
   ·试验材料第73页
   ·总RNA的提取第73页
   ·cDNA第一链的合成第73页
   ·VvAP3 cDNA编码区全长的克隆与序列测定第73-74页
   ·VvAP3 cDNA序列对比及系统发育分析第74页
   ·VvAP3基因mRNA组织表达的RT-PCR分析第74页
   ·VvAP3基因组结构分析第74页
   ·VvAP3基因双元表达载体的构建及鉴定第74页
   ·VvAP3基因转化烟草及分子检测第74页
 2 结果与分析第74-82页
   ·VvAP3 cDNA全长的克隆与序列分析第74-76页
   ·VvAP3基因的系统发育分析第76-78页
   ·VvAP3基因在不同葡萄组织中的表达分析第78-79页
   ·VvAP3基因组结构分析第79页
   ·VvAP3双元表达载体的构建及鉴定第79-81页
   ·转VvAP3基因烟草的PCR检测第81页
   ·转VvAP3基因烟草的RT-PCR分析第81-82页
 3 讨论第82-83页
第六章 葡萄FLOWERING LOCUSC(FLC)类MADS-box基因的克隆与表达特性研究第83-93页
 1 材料和方法第84-85页
   ·试验材料第84页
   ·总RNA的提取第84页
   ·cDNA第一链的合成第84页
   ·VvFLC cDNA克隆与序列测定第84-85页
   ·VvFLC cDNA序列对比分析及系统发育树的构建第85页
   ·VvFLC基因mRNA组织表达的RT-PCR分析第85页
   ·VvFLC基因组结构分析第85页
   ·VvFLC基因双元表达载体的构建及鉴定第85页
   ·VvFLC基因转化烟草及分子检测第85页
 2 结果与分析第85-92页
   ·VvFLC cDNA全长的克隆与序列分析第85-87页
   ·VvFLC基因的系统发育分析第87-89页
   ·VvFLC基因在葡萄不同组织器官的表达分析第89页
   ·VvFLC基因组结构分析第89-90页
   ·VvFLC双元表达载体的构建及鉴定第90-91页
   ·转VvFLC基因烟草的PCR检测第91页
   ·转VvFLC基因烟草的RT-PCR检测第91-92页
 3 讨论第92-93页
第七章 葡萄FLOWERING LOCUST(FT)基因的克隆、表达及功能研究第93-107页
 1 材料和方法第95-96页
   ·试验材料第95页
   ·总RNA的提取第95页
   ·cDNA第一链的合成第95页
   ·VvFT cDNA克隆与序列测定第95页
   ·VvFT cDNA序列分析第95页
   ·VvFT基因mRNA组织表达的RT-PCR分析第95-96页
   ·VvFT基因组全长的克隆及基因结构分析第96页
   ·VvFT基因的二级及三级结构预测第96页
   ·VvFT基因正义表达载体的构建及鉴定第96页
   ·农杆菌介导VvFT转化烟草第96页
   ·转VvFT基因烟草的分子检测第96页
   ·转VvFT基因烟草的表型观察第96页
 2 结果与分析第96-105页
   ·葡萄FT基因编码区全长cDNA的克隆与序列分析第96-98页
   ·VvFT基因组全长的克隆及基因结构分析第98-99页
   ·VvFTmRNA在不同葡萄组织中的表达分析第99-100页
   ·VvFT的二级和三级结构预测第100-101页
   ·VvFT超表达载体的构建及鉴定第101-103页
   ·转VvFT基因烟草的PCR检测第103-104页
   ·转VvFT基因烟草的RT-PCR检测第104页
   ·转VvFT基因烟草表型观察第104-105页
 3 讨论第105-107页
全文讨论第107-112页
 1 葡萄中的MADS-box家族基因第107页
 2 葡萄中C/D类MADS-box基因的基因重复及表达模式第107-108页
 3 葡萄中B类基因的重复及表达模式的多样性第108-110页
 4 葡萄FLC亚家族基因的克隆及表达第110页
 5 VvFT基因的功能及其应用前景第110-111页
 6 葡萄LFY基因启动子序列特征及其在基因表达调控中的作用第111-112页
全文结论第112-114页
创新点第114-115页
参考文献第115-125页
附录第125-132页
攻读博士期间发表论文第132-133页
致谢第133页

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