| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 综述 | 第8-23页 |
| 一、常用的目的基因克隆技术 | 第8-10页 |
| 1.通过已知基因产物的分析和鉴定 | 第8页 |
| 2.通过遗传表型分析 | 第8-9页 |
| 3.以图谱为基础的定位克隆技术 | 第9-10页 |
| 二、大片段DNA克隆载体的发展 | 第10-14页 |
| 1.质粒载体 | 第10-11页 |
| 2.λ噬菌体载体 | 第11页 |
| 3.粘粒载体 | 第11页 |
| 4.酵母人工染色体(YAC)载体 | 第11-12页 |
| 5.细菌人工染色体(BAC)载体 | 第12-13页 |
| 6.双元细菌人工染色体(BIBAC)载体 | 第13页 |
| 7.P1克隆系统和源于P1的人工染色体(PAC)载体 | 第13-14页 |
| 8.可转化人工染色体(TAC)载体 | 第14页 |
| 三、可转化人工染色体(TAC)载体的发展 | 第14-20页 |
| 四、多枝赖草的研究现状 | 第20-21页 |
| 五、本论文立题依据、研究内容、技术路线 | 第21-23页 |
| 1.立题依据 | 第21页 |
| 2.研究内容 | 第21-22页 |
| 3.技术路线 | 第22-23页 |
| 材料与方法 | 第23-41页 |
| 一、实验材料 | 第23-24页 |
| 1.pYLTAC17和pYLTAC747H质粒载体 | 第23页 |
| 2.大肠杆菌电转化感受态细胞 | 第23-24页 |
| 二、实验方法 | 第24-41页 |
| 1.TAC质粒载体的分离、纯化和浓度估测 | 第24-27页 |
| 2.电击转化大肠杆菌感受态细胞检测TAC质粒载体 | 第27-28页 |
| 3.TAC载体DNA不同酶用量梯度的酶切和脱磷 | 第28-32页 |
| 4.线性TAC载体DNA脱磷效果的自连检测 | 第32-35页 |
| 5.TAC载体DNA与lambda DNA／Hind Ⅲ连接能力的检测 | 第35-38页 |
| 6.用潮霉素筛选pYLTAC747H载体DNA与lambda DNA／Hind Ⅲ连接产物转化克隆 | 第38-41页 |
| 结果与分析 | 第41-51页 |
| 一、TAC质粒载体的分离、纯化和浓度估测 | 第41-43页 |
| 二、电击转化大肠杆菌感受态细胞检测TAC质粒载体 | 第43-44页 |
| 三、闭环TAC载体DNA不同酶用量梯度的酶切 | 第44-45页 |
| 四、线性TAC载体DNA脱磷效果检测 | 第45-47页 |
| 五、TAC载体DNA与lambda DNA／HindⅢ连接能力的分析 | 第47-49页 |
| 六、用潮霉素筛选pYLTAC747H载体DNA与Lambda DNA／HindⅢ连接产物转化克隆 | 第49-51页 |
| 讨论 | 第51-56页 |
| 一、TAC载体的选择 | 第51页 |
| 二、可转化人工染色体文库(TAC)载体的制备 | 第51-56页 |
| 1.电泳条件对质粒载体DNA的影响 | 第51-53页 |
| 2.质粒检测的重要性 | 第53页 |
| 3.载体酶切脱磷条件的优化 | 第53-54页 |
| 4.连接条件的优化 | 第54页 |
| 5.电击转化效率的优化 | 第54-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 个人简历 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
