| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 缩略语表 | 第13-14页 |
| 第一章 微生物细胞表面展示及S-层蛋白在活菌疫苗研制应用中的研究概况 | 第14-34页 |
| 1 微生物细胞表面展示(MCSD)及其应用 | 第14-17页 |
| 2 S-层蛋白及其在疫苗研制中的应用 | 第17-23页 |
| ·S-层蛋白的定位 | 第17-19页 |
| ·S-层蛋白的锚定 | 第19-21页 |
| ·革兰氏阳性细菌的S-层蛋白在次生细胞壁多聚物上的锚定 | 第19页 |
| ·革兰氏阴性细菌的S-层蛋白在脂多糖(LPS)上的锚定 | 第19-20页 |
| ·无硬质细胞壁的古细菌的S-层蛋白的锚定 | 第20页 |
| ·csaAB操纵元(Operon)与S-层蛋白的锚定相关 | 第20-21页 |
| ·S-层的功能 | 第21页 |
| ·S-层蛋白在疫苗研制中的应用 | 第21-23页 |
| 3 蜡样芽胞杆菌群(Bacillus cereus group)的S-层蛋白 | 第23-24页 |
| 4 苏云金芽胞杆菌CTC菌株的S-层蛋白 | 第24-26页 |
| 5 苏云金芽胞杆菌S-层蛋白CTC表面展示系统 | 第26页 |
| 6 禽流感病毒核衣壳蛋白NP和血凝素蛋白HA及禽流感基因工程疫苗研究概况 | 第26-32页 |
| ·禽流感病毒简介 | 第26-27页 |
| ·核衣壳蛋白NP | 第27-28页 |
| ·血凝素蛋白HA | 第28-29页 |
| ·禽流感基因工程疫苗研究概况 | 第29-32页 |
| 7 鸡毒霉形体粘附素蛋白pMGA | 第32页 |
| 8 研究目的和意义 | 第32-34页 |
| 第二章 苏云金芽胞杆菌无晶体突变株对小鼠和雏鸡的安全性及其在鸡肠道中的存留时间 | 第34-44页 |
| 1 材料与方法 | 第34-37页 |
| ·实验菌株和质粒 | 第34-35页 |
| ·实验动物 | 第35页 |
| ·苏云金芽胞杆菌BMB304对小鼠的安全性试验 | 第35-36页 |
| ·急性毒性试验 | 第35页 |
| ·长期毒性试验 | 第35-36页 |
| ·苏云金芽胞杆菌BMB304对雏鸡的安全性试验 | 第36页 |
| ·急性毒性试验 | 第36页 |
| ·长期毒性试验 | 第36页 |
| ·BMB304在雏鸡肠道中的存留情况试验 | 第36页 |
| ·数据处理 | 第36-37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-42页 |
| ·苏云金芽胞杆菌BMB304对小鼠的安全性试验结果 | 第37-39页 |
| ·急性毒性试验结果 | 第37页 |
| ·长期毒性试验结果 | 第37-39页 |
| ·苏云金芽胞杆菌BMB304对雏鸡的安全性试验结果 | 第39-42页 |
| ·急性毒性试验结果 | 第39页 |
| ·长期毒性试验结果 | 第39-40页 |
| ·受试菌株BMB304在雏鸡肠道中的存留情况 | 第40-42页 |
| 3 讨论 | 第42-43页 |
| 4 结论 | 第43-44页 |
| 第三章 利用S-层蛋白在苏云金芽胞杆菌细胞表面展示禽类病原体抗原 | 第44-79页 |
| 1 材料与方法 | 第44-54页 |
| ·技术路线 | 第44页 |
| ·质粒与菌株 | 第44-49页 |
| ·PCR扩增外源抗原基因 | 第49-50页 |
| ·DNA操作 | 第50页 |
| ·质粒电脉冲转化苏云金芽胞杆菌 | 第50页 |
| ·展示NP蛋白的重组菌株BN、BCN、C-S、BCCN和CN的玻片凝集试验 | 第50-51页 |
| ·凝集素的来源 | 第50页 |
| ·凝集原的制备 | 第50页 |
| ·方法 | 第50-51页 |
| ·展示HA1蛋白的重组菌株BCCH、CH和展示pMGA蛋白的重组菌株BCCG、CG的血凝和血凝抑制试验 | 第51-52页 |
| ·菌悬液的制备 | 第51页 |
| ·阳性血清的来源 | 第51页 |
| ·血凝(HA，haemagglutination)试验方法 | 第51页 |
| ·血凝抑制(HI，haemagglutination inhibition)试验方法 | 第51-52页 |
| ·展示NP、HA1和pMGA蛋白的所有重组菌株免疫小鼠实验 | 第52-53页 |
| ·实验动物 | 第52页 |
| ·免疫抗原的制备 | 第52页 |
| ·免疫程序 | 第52页 |
| ·ELISA测定 | 第52-53页 |
| ·展示HA1蛋白的重组菌株BCCH、CH和展示pMGA蛋白的重组菌株BCCG、CG免疫鸡实验 | 第53-54页 |
| ·实验动物 | 第53页 |
| ·免疫抗原的制备 | 第53页 |
| ·免疫程序 | 第53页 |
| ·血清抗体效价测定 | 第53-54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-74页 |
| ·S-层融合基因的构建 | 第54-59页 |
| ·np和npp融合基因的构建 | 第56-57页 |
| ·ha1p融合基因的构建 | 第57-58页 |
| ·pmga1.2p融合基因的构建 | 第58-59页 |
| ·重组菌株的构建 | 第59-61页 |
| ·S-层融合蛋白活性的检测 | 第61-68页 |
| ·展示NP蛋白的重组菌株BN、BCN、C-S、BCCN和CN的玻片凝集试验 | 第61-62页 |
| ·展示HA1蛋白的重组菌株BCCH和CH的血凝和血凝抑制试验 | 第62-65页 |
| ·展示pMGA蛋白的重组菌株BCCG和CG的血凝和血凝抑制试验 | 第65-68页 |
| ·重组菌株免疫小鼠实验结果 | 第68-72页 |
| ·展示NP蛋白的重组菌株BN、BCN、C-S、BCCN和CN免疫小鼠实验结果 | 第68-69页 |
| ·展示HA1蛋白的重组菌株BCCH和CH免疫小鼠实验结果 | 第69-70页 |
| ·展示pMGA蛋白的重组菌株BCCG和CG免疫小鼠实验结果 | 第70-72页 |
| ·重组菌株对商品代肉雏鸡的免疫效果及其安全性考察 | 第72-74页 |
| ·展示HA1蛋白的重组菌株BCCH和CH对商品代肉雏鸡的免疫效果 | 第72-73页 |
| ·展示pMGA蛋白的重组菌株BCCG和CG对商品代肉雏鸡的免疫效果 | 第73页 |
| ·展示HA1蛋白的重组菌株BCCH、CH和展示pMGA蛋白的重组菌株BCCG、CG对商品代肉雏鸡的安全性考察 | 第73-74页 |
| 3 讨论 | 第74-78页 |
| ·csaAB操纵元与ctc基因 | 第74页 |
| ·重组菌株菌落形态的变异 | 第74-75页 |
| ·两种融合基因的构建方式 | 第75页 |
| ·非全长外源抗原基因的表达效果 | 第75-76页 |
| ·不含csaAB操纵元的重组菌株BN的展示效果 | 第76页 |
| ·重组菌株对鸡的免疫效力问题 | 第76页 |
| ·重组菌株中存在抗性基因的问题 | 第76-77页 |
| ·本研究与炭疽芽胞杆菌S-层蛋白表面展示外源抗原的研究比较 | 第77-78页 |
| 4 结论 | 第78-79页 |
| 总结 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-88页 |
| 读博期间已发表文章和待发表文章 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
