| 目录 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-8页 |
| 文献综述 | 第8-24页 |
| 1 食品中常见致病菌及常规的检测技术 | 第8-12页 |
| ·食源性致病菌危害的严重性 | 第8-9页 |
| ·常见的食源性致病菌 | 第9-10页 |
| ·食源性致病菌检测技术应用的现状 | 第10-11页 |
| ·上述检测技术应用的不足 | 第11-12页 |
| 2 基因芯片技术简介 | 第12-20页 |
| ·基因芯片技术的原理 | 第12页 |
| ·基因芯片技术的种类 | 第12-16页 |
| ·按载体材料分类 | 第12-13页 |
| ·按点样方式分类 | 第13-14页 |
| ·按探针种类分类 | 第14页 |
| ·按用途分类 | 第14-16页 |
| ·基因芯片的应用范围及现状 | 第16-19页 |
| ·基因芯片在微生物方面的应用 | 第16-18页 |
| ·基因芯片在其他方面的应用 | 第18-19页 |
| ·基因芯片的发展前景 | 第19-20页 |
| 3 基因芯片技术检测肠道致病菌 | 第20-24页 |
| ·检测肠道致病菌的毒力因子 | 第20-21页 |
| ·通用引物结合基因芯片检测肠道致病菌 | 第21-22页 |
| ·通用引物扩增16S rDNA基因、16S-23S rDNA、23S rDNA基因 | 第21页 |
| ·基因芯片直接检测致病菌的16S rRNA基因 | 第21-22页 |
| ·基因芯片直接检测致病菌的DNA | 第22页 |
| ·基因芯片用于细菌分型 | 第22-23页 |
| ·基因芯片在肠道致病菌检测方面的前景 | 第23-24页 |
| 材料和方法 | 第24-36页 |
| 1 材料 | 第24-26页 |
| ·实验菌株 | 第24-25页 |
| ·实验试剂 | 第25页 |
| ·细菌培养基 | 第25页 |
| ·细菌基因组DNA提取试剂 | 第25页 |
| ·PCR试剂 | 第25页 |
| ·实验仪器 | 第25-26页 |
| ·PCR仪 | 第25页 |
| ·基因芯片相关仪器 | 第25页 |
| ·其他仪器 | 第25-26页 |
| 2 实验方法 | 第26-36页 |
| ·运用寡核苷酸芯片技术检测食源性致病菌的研究 | 第26页 |
| ·运用寡核苷酸芯片技术检测的九种食源性致病菌 | 第26-27页 |
| ·寡核苷酸芯片检测使用的引物和探针 | 第27页 |
| ·寡核苷酸芯片的制备 | 第27-29页 |
| ·引物和氨基化探针的制备 | 第28页 |
| ·芯片点样及后处理 | 第28-29页 |
| ·芯片的质量验证 | 第29页 |
| ·细菌培养及模板DNA的提取 | 第29-31页 |
| ·细菌基因组DNA提取 | 第29-30页 |
| ·细菌基因组DNA提取结果检测 | 第30-31页 |
| ·PCR扩增反应及产物标记 | 第31-32页 |
| ·PCR反应 | 第31页 |
| ·PCR产物的精制及定量 | 第31-32页 |
| ·精制后标记 | 第32页 |
| ·芯片的杂交及扫描 | 第32页 |
| ·杂交过程 | 第32页 |
| ·扫描检测并分析结果 | 第32页 |
| ·寡核苷酸芯片杂交条件的优化 | 第32页 |
| ·不同杂交温度的比较 | 第32页 |
| ·不同杂交液的选择 | 第32页 |
| ·寡核苷酸芯片特异性实验 | 第32页 |
| ·寡核苷酸芯片灵敏度实验 | 第32-33页 |
| ·模拟污染实验 | 第33页 |
| ·多重PCR反应实验 | 第33页 |
| ·多重PCR反应体系的筛选 | 第33页 |
| ·多重PCR反应参数的优化 | 第33页 |
| ·四重PCR扩增反应及芯片检测 | 第33页 |
| ·三重PCR扩增反应及芯片检测 | 第33页 |
| ·细菌DNA的几种不同提取方式的比较试验 | 第33-36页 |
| ·实时荧光PCR检测用引物的设计与优化 | 第33-34页 |
| ·实时荧光PCR反应条件 | 第34-35页 |
| ·不同方法提取的模板进行实时荧光PCR检测比较 | 第35页 |
| ·以煮沸沙门氏菌落的水溶液做为模板时所需的最短煮沸时间的摸索 | 第35-36页 |
| 结果与分析 | 第36-61页 |
| 1 PCR扩增反应结果 | 第36-37页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检查DNA提取结果 | 第36页 |
| ·九种细菌的PCR检测 | 第36页 |
| ·九种细菌基因组DNA分光光度计检测结果 | 第36-37页 |
| 2 引物和探针的研究设计 | 第37-40页 |
| ·引物和探针的设计过程 | 第37-40页 |
| ·九种致病菌引物和特异性探针位点的选择 | 第37-40页 |
| 3 寡核苷酸芯片检测结果 | 第40-50页 |
| ·杂交结果判定标准 | 第40页 |
| ·有效的杂交结果判定标准的确定 | 第40页 |
| ·非特异性信号的判定标准的确定 | 第40页 |
| ·重复实验的判定标准的确定 | 第40页 |
| ·寡核苷酸芯片杂交条件优化结果 | 第40-44页 |
| ·杂交温度优化结果 | 第40-43页 |
| ·不同杂交液的选择结果 | 第43-44页 |
| ·九种致病菌寡核苷酸芯片特异性实验结果 | 第44-48页 |
| ·副溶血性弧菌芯片检测结果 | 第45页 |
| ·霍乱弧菌芯片检测结果 | 第45页 |
| ·肠出血性E.coli 0157：H7芯片检测结果 | 第45-46页 |
| ·空肠弯曲菌芯片检测结果 | 第46页 |
| ·耶尔森氏菌芯片检测结果 | 第46页 |
| ·单增李斯特氏菌芯片检测结果 | 第46-47页 |
| ·鼠伤寒沙门氏菌芯片检测结果 | 第47页 |
| ·弗氏志贺氏菌芯片检测结果 | 第47页 |
| ·金黄色葡萄球菌芯片检测结果 | 第47-48页 |
| ·寡核苷酸芯片检测的重复性和稳定性实验结果 | 第48页 |
| ·寡核苷酸芯片灵敏度实验结果 | 第48-50页 |
| ·平板计数结果 | 第48页 |
| ·不同浓度菌液的PCR产物电泳结果 | 第48-49页 |
| ·芯片检测结果 | 第49-50页 |
| ·模拟污染实验结果 | 第50页 |
| 4 多重PCR实验结果 | 第50-55页 |
| ·四重PCR实验结果 | 第51-53页 |
| ·三重PCR实验结果 | 第53-55页 |
| 5 模板DNA的几种不同提取方式的比较试验结果 | 第55-59页 |
| ·不同方法提取的模板进行实时荧光PCR检测比较的结果 | 第55-56页 |
| ·以煮沸沙门氏菌落的水溶液做模板时所需的最短煮沸时间摸索结果 | 第56-59页 |
| 6 使用荧光标记试剂盒时出现的问题 | 第59-61页 |
| 讨论 | 第61-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 英文摘要 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 学位论文独创性声明 | 第79页 |
| 学位论文版权的使用授权书 | 第79页 |
