| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 英文缩略词 | 第10-11页 |
| 第一部分 人泛素结合酶基因hUBC16的克隆与功能研究 | 第11-81页 |
| 第一章 前言 | 第11-14页 |
| 第二章 材料和方法 | 第14-38页 |
| 1.材料与试剂 | 第14-24页 |
| ·实验材料 | 第14页 |
| ·菌株、质粒和细胞株 | 第14-15页 |
| ·试剂盒与常用酶类 | 第15-16页 |
| ·抗体与常用试剂 | 第16-18页 |
| ·主要仪器设备 | 第18-19页 |
| ·常用试剂配制 | 第19-22页 |
| ·计算机软件及数据库 | 第22页 |
| ·引物 | 第22-24页 |
| 2.方法 | 第24-38页 |
| ·cDNA文库的构建、测序以及生物信息学初步分析 | 第24-25页 |
| ·MTC Panel表达谱分析 | 第25页 |
| ·GST-hUBC16融合蛋白的表达和纯化 | 第25-28页 |
| ·GST-hUBC16蛋白体外与泛素的结合实验 | 第28-30页 |
| ·真核细胞的培养和转染 | 第30-31页 |
| ·亚细胞定位 | 第31-33页 |
| ·Western Blot检测GFP-hUBC16体内与泛素的结合 | 第33页 |
| ·酵母双杂交系统筛选与hUBC16相互作用的蛋白 | 第33-35页 |
| ·hUBC16对细胞周期影响的初步检测 | 第35-37页 |
| ·hUBC16对细胞凋亡影响的初步检测 | 第37-38页 |
| 第三章 实验结果 | 第38-65页 |
| 1.hUBC16基因的克隆和信息学分析 | 第38-46页 |
| ·hUBC16基因的克隆和核酸序列分析 | 第38-39页 |
| ·hUBC16基因的染色体定位和基因结构 | 第39-41页 |
| ·hUBC16的保守结构域分析和活性中心预测 | 第41-43页 |
| ·hUBC16的蛋白同源性分析 | 第43-44页 |
| ·hUBC16的亚细胞定位和核定位信号预测 | 第44-45页 |
| ·翻译后泛素化修饰 | 第45-46页 |
| 2.hUBC16基因的表达谱分析 | 第46-51页 |
| ·电子表达谱 | 第46-50页 |
| ·RT-PCR检测表达谱 | 第50-51页 |
| 3.hUBC16原核表达和体外泛素结合实验 | 第51-52页 |
| ·GST融合蛋白的原核表达 | 第51-52页 |
| ·体外泛素化修饰 | 第52页 |
| 4.hUBC16的亚细胞定位与体内泛素结合实验 | 第52-56页 |
| ·hUBC16的亚细胞定位 | 第52-55页 |
| ·体内泛素化修饰 | 第55-56页 |
| 5.酵母双杂交筛选可能与hUBC16相互作用的蛋白 | 第56-60页 |
| ·阳性菌落的初选和PCR筛选 | 第56-58页 |
| ·测序结果分析 | 第58-60页 |
| 6.hUBC16对细胞周期影响的初步检测 | 第60-63页 |
| ·hUBC16上调表达对细胞周期影响的初步测定 | 第60-61页 |
| ·hUBC16下调表达对细胞周期影响的初步测定 | 第61-63页 |
| 7.hUBC16对细胞调亡影响的初步检测 | 第63-65页 |
| 第四章 讨论 | 第65-70页 |
| 1.hUBC16基因编码蛋白的保守结构域 | 第65页 |
| 2.hUBC16活性中心预测以及初步验证 | 第65-66页 |
| 3.hUBC16可能的亚细胞定位机制 | 第66-68页 |
| 4.hUBC16可能参与核内蛋白功能的调控 | 第68-69页 |
| 5.hUBC16可能对细胞周期的影响 | 第69页 |
| 小结 | 第69-70页 |
| 第五章 综述:泛素结合酶研究进展 | 第70-78页 |
| 1.泛素结合酶与多泛素化修饰 | 第70-74页 |
| ·多泛素化修饰又称泛素—蛋白酶途径 | 第70-71页 |
| ·泛素-蛋白酶体降解蛋白的作用机制 | 第71-72页 |
| ·泛素-蛋白酶体途径与p53 | 第72-73页 |
| ·泛素-蛋白酶体途径与p27、cyclin | 第73-74页 |
| 2.泛素结合酶与单泛素化修饰 | 第74-75页 |
| ·单泛素化修饰参与的生理功能 | 第74页 |
| ·单泛素化修饰也是泛素结合酶进行自身调节的一种机制 | 第74-75页 |
| 3.泛素结合酶(E2)与泛素连接酶(E3)的相互作用机制 | 第75-76页 |
| 4.泛素化修饰是一种信号 | 第76页 |
| 5.泛素化修饰在肿瘤耐药性研究方面的应用 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-81页 |
| 第二部分 人谷胱甘肽过氧化物酶基因GPx7的克隆与功能研究 | 第81-117页 |
| 第一章 前言 | 第81-83页 |
| 第二章 材料和方法 | 第83-87页 |
| 1.材料与试剂 | 第83-84页 |
| ·材料 | 第83页 |
| ·菌株、质粒和细胞株 | 第83页 |
| ·试剂盒和常用酶类 | 第83页 |
| ·抗体和常用试剂 | 第83页 |
| ·主要仪器设备 | 第83页 |
| ·常用试剂配制 | 第83页 |
| ·计算机软件及数据库 | 第83页 |
| ·引物 | 第83-84页 |
| 2.方法 | 第84-87页 |
| ·cDNA文库的构建、测序以及生物信息学初步分析 | 第84页 |
| ·MTC Panel表达谱分析 | 第84-85页 |
| ·GPx7的原核诱导表达 | 第85页 |
| ·真核细胞的培养和转染 | 第85页 |
| ·亚细胞定位 | 第85-86页 |
| ·酵母双杂交系统筛选与GPx7相互作用的蛋白 | 第86页 |
| ·细胞周期及凋亡检测 | 第86-87页 |
| 第三章 实验结果 | 第87-105页 |
| 1.GPx7基因的克隆和信息学分析 | 第87-93页 |
| ·GPx7基因的克隆和核酸序列分析 | 第87-88页 |
| ·GPx7的保守结构域分析 | 第88-89页 |
| ·GPx7基因的染色体定位和基因结构 | 第89-91页 |
| ·GPx7的蛋白同源性分析 | 第91页 |
| ·GPx家族蛋白进化树分析 | 第91-92页 |
| ·亚细胞定位预测 | 第92-93页 |
| 2.GPx7基因的表达谱分析 | 第93-95页 |
| ·EST分析 | 第93-94页 |
| ·RT-PCR检测表达谱 | 第94-95页 |
| 3.GPx7原核表达 | 第95-97页 |
| ·His-GPx7融合蛋白的原核表达 | 第95-96页 |
| ·GST-GPx7融合蛋白的原核表达 | 第96-97页 |
| 4.GPx7的亚细胞定位 | 第97-98页 |
| 5.酵母双杂交筛选可能与GPx7相互作用的蛋自 | 第98-101页 |
| ·阳性菌落初筛 | 第98-99页 |
| ·PCR检测阳性克隆 | 第99-100页 |
| ·测序结果的分析 | 第100-101页 |
| 6.GPx7对细胞周期影响的初步检测 | 第101-103页 |
| 7.GPx7对细胞调亡影响的初步检测 | 第103-105页 |
| 第四章 讨论 | 第105-108页 |
| 小结 | 第107-108页 |
| 第五章 综述:谷胱甘肽过氧化物酶研究进展 | 第108-113页 |
| 1.谷胱甘肽过氧化物酶的反应机制 | 第108-109页 |
| 2.谷胱甘肽过氧化物酶对信号通路的影响 | 第109页 |
| 3.谷胱甘肽过氧化物酶对细胞周期的影响 | 第109页 |
| 4.谷胱甘肽过氧化物酶对细胞调亡的影响 | 第109-110页 |
| 5.谷胱甘肽过氧化物酶的生理功能 | 第110-111页 |
| ·谷胱甘肽过氧化物酶对线粒体的保护 | 第110-111页 |
| ·谷胱甘肽过氧化物酶对大脑膜系统的保护 | 第111页 |
| 6.谷胱甘肽过氧化物酶与人类疾病 | 第111-113页 |
| 参考文献 | 第113-117页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第117-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
