| 缩写词 | 第1-16页 |
| 摘要 | 第16-19页 |
| Abstract | 第19-22页 |
| 前言 | 第22-24页 |
| 1 文献综述 | 第24-36页 |
| 1．1 PCP的研究 | 第24-27页 |
| 1．1．1 PCP的来源 | 第24-25页 |
| 1．1．2 PCP基因家族 | 第25-26页 |
| 1．1．2．1 花粉SI决定因子 | 第25-26页 |
| 1．1．2．2 PCP-A花粉外壁蛋白 | 第26页 |
| 1．1．2．3 PCP-B花粉外壁蛋白 | 第26页 |
| 1．1．3 花粉识别和SI反应的模型 | 第26-27页 |
| 1．2 植物多聚半乳糖醛酸酶的研究 | 第27-36页 |
| 1．2．1 PG的作用方式和组织定位 | 第28页 |
| 1．2．2 不同PG基因家族之间序列的差异性 | 第28-29页 |
| 1．2．3 PG功能的多样性 | 第29-32页 |
| 1．2．3．1 PG与果实成熟 | 第29-30页 |
| 1．2．3．2 PG与器官脱落 | 第30-31页 |
| 1．2．3．3 PG与花粉授粉 | 第31-32页 |
| 1．2．4 PG基因的表达调控及应用 | 第32-36页 |
| 2 白菜花粉外壁蛋白基因BcMF5的克隆及其功能分析 | 第36-72页 |
| 2．1 材料与方法 | 第37-45页 |
| 2．1．1 花粉外壁蛋白基因BcMF5的克隆及序列分析 | 第37-39页 |
| 2．1．1．1 材料与试剂 | 第37页 |
| 2．1．1．2 基因组DNA和总RNA的提取及其反转录 | 第37页 |
| 2．1．1．3 差异片段A10T17、A10T19的RACE扩增 | 第37-38页 |
| 2．1．1．4 BcMF5基因cDNA和DNA序列全长的扩增 | 第38-39页 |
| 2．1．2 BcMF5基因RNAi载体构建 | 第39-41页 |
| 2．1．2．1 菌株与质粒 | 第39页 |
| 2．1．2．2 反义链片段和正义链片段的获得 | 第39-40页 |
| 2．1．2．3 反义片段和正义片段的制备 | 第40页 |
| 2．1．2．4 双元载体pBI121制备 | 第40页 |
| 2．1．2．5 表达质粒的构建过程 | 第40页 |
| 2．1．2．6 冻融法转化农杆菌 | 第40-41页 |
| 2．1．2．7 农杆菌中质粒的鉴定 | 第41页 |
| 2．1．3 BcMF5菜心转基因植株的获得 | 第41-42页 |
| 2．1．3．1 植物材料、菌株及抗生素 | 第41页 |
| 2．1．3．2 培养基 | 第41-42页 |
| 2．1．3．3 预培养 | 第42页 |
| 2．1．3．4 共培养 | 第42页 |
| 2．1．3．5 分化培养 | 第42页 |
| 2．1．3．6 继代及生根 | 第42页 |
| 2．1．3．7 移栽 | 第42页 |
| 2．1．4 BcMF5菜心转基因植株的分子检测及其功能分析 | 第42-44页 |
| 2．1．4．1 植物材料 | 第42-43页 |
| 2．1．4．2 BcMF5菜心转基因植株基因组DNA利总RNA的提取 | 第43-44页 |
| 2．1．4．3 BcMF5菜心转基因植株的PCR检测 | 第44页 |
| 2．1．4．4 BcMF5菜心转基因植株的Southern印迹杂交检测 | 第44页 |
| 2．1．4．5 BcMF5菜心转基因植株的Northern印迹杂交检测 | 第44页 |
| 2．1．5 BcMF5菜心转基因植株的小孢子发育的形态与细胞学观察 | 第44-45页 |
| 2．1．5．1 试验材料 | 第44-45页 |
| 2．1．5．2 BcMF5菜心转基因植株的花粉萌发试验 | 第45页 |
| 2．1．5．3 BcMF5菜心转基因植株花粉生活力及扫描电镜观察 | 第45页 |
| 2．1．5．4 BcMF5菜心转基因植株授粉柱头的苯胺蓝染色观察 | 第45页 |
| 2．2 结果与分析 | 第45-67页 |
| 2．2．1 花粉外壁蛋白基因BcMF5的克隆及序列分析 | 第45-57页 |
| 2．2．1．1 mmc野生型差异片段A10T17、A10T19与SLRI-BP、PCP-A2的序列比较 | 第45页 |
| 2．2．1．2 A10T19的5’RACE扩增 | 第45-47页 |
| 2．2．1．3 A10T19的5’RACE测序分析 | 第47-48页 |
| 2．2．1．4 A10T17和A10T19的3’RACE测序分析及3’-UTR不同长度转录本的分离 | 第48-49页 |
| 2．2．1．5 A10T17和A10T19的3’RACE的序列分析 | 第49-51页 |
| 2．2．1．6 A10T17和A10T19各cDNA拼接全长的序列分析 | 第51-54页 |
| 2．2．1．7 BcMF5基因cDNA和DNA序列全长的获得 | 第54-56页 |
| 2．2．1．8 BcMF5基因cDNA利DNA全长序列分析 | 第56-57页 |
| 2．2．2 BcMF5基因RNAi载体构建 | 第57-61页 |
| 2．2．2．1 BcMF5正义片段和反义片段的获得 | 第57-58页 |
| 2．2．2．2 BcMF5的35s-pBI121干涉载体的构建 | 第58-59页 |
| 2．2．2．3 BcMF5的A9-pBI121干涉载体的构建 | 第59页 |
| 2．2．2．4 BcMF5的BcA9-pBI121干涉载体的构建 | 第59-60页 |
| 2．2．2．5 农杆菌中质粒的鉴定 | 第60-61页 |
| 2．2．3 BcMF5基因菜心转基因植株的获得 | 第61-62页 |
| 2．2．4 BcMF5菜心转基因植株的的分子检测及其功能分析 | 第62-64页 |
| 2．2．4．1 BcMF5菜心转基因植株的基因组DNA和总RNA的提取 | 第62页 |
| 2．2．4．2 BcMF5菜心转基因植株的PCR检测 | 第62页 |
| 2．2．4．3 BcMF5菜心转基因植株Southern印迹杂交检测 | 第62-63页 |
| 2．2．4．4 BcMF5菜心转基因植株的Northern印迹杂交检测 | 第63-64页 |
| 2．2．5 BcMF5菜心转基因植株的花粉发育的形态与细胞学观察 | 第64-67页 |
| 2．2．5．1 BcMF5菜心转基因植株的花粉萌发试验 | 第64-65页 |
| 2．2．5．2 BcMF5菜心转基因植株花粉生活力及扫描电镜观察 | 第65-67页 |
| 2．2．5．3 BcMF5菜心转基因植株授粉柱头的苯胺蓝染色观察 | 第67页 |
| 2．3 讨论 | 第67-72页 |
| 2．3．1 BcMF5，一个新的PCP基因 | 第67-69页 |
| 2．3．2 含有内含子剪切的hpRNA载体能产生高效的RNAi效应 | 第69页 |
| 2．3．3 BcMF5的可能功能 | 第69-70页 |
| 2．3．4 CaMV35S启动子在菜心花粉中的表达 | 第70-72页 |
| 3 BcMF5基因3’-UTR不同长度转录本的时空表达分析 | 第72-78页 |
| 3．1 材料与方法 | 第72-73页 |
| 3．1．1 植物材料与试剂 | 第72-73页 |
| 3．1．2 BcMF5基因3’-UTR不同转录本的RT-PCR分析 | 第73页 |
| 3．1．3 3’-UTR不同转录本的PCR-Southern和Northern杂交检测 | 第73页 |
| 3．2 结果与分析 | 第73-76页 |
| 3．2．1 BcMF5基因的3’-UTR各转录本序列的比较 | 第73页 |
| 3．2．2 BcMF5的3’-UTR各转录本的RT-PCR分析 | 第73-75页 |
| 3．2．3 BcMF5的3’-UTR转录本的PCR-Southern杂交和Northern杂交检测 | 第75-76页 |
| 3．3 讨论 | 第76-78页 |
| 4 BcMF5基因启动子的克隆及其功能的初步分析 | 第78-94页 |
| 4．1 材料与方法 | 第78-83页 |
| 4．1．1 BcMF5基因启动子的克隆 | 第78-80页 |
| 4．1．1．1 菌株与质粒 | 第78-79页 |
| 4．1．1．2 DNA提取及启动子序列扩增 | 第79页 |
| 4．1．1．3 启动子序列分析 | 第79-80页 |
| 4．1．2 BcMF5基因启动子缺失表达载体的构建 | 第80-82页 |
| 4．1．2．1 菌株与质粒 | 第80页 |
| 4．1．2．2 启动子片段的获得 | 第80-81页 |
| 4．1．2．3 双元载体pBI121制备 | 第81页 |
| 4．1．2．4 启动子片段的制备 | 第81页 |
| 4．1．2．5 表达质粒的构建过程 | 第81-82页 |
| 4．1．2．6 冻融法转化农杆菌 | 第82页 |
| 4．1．2．7 农杆菌中质粒的鉴定 | 第82页 |
| 4．1．3 BcMF5启动子菜心转化植株的获得 | 第82页 |
| 4．1．4 BcMF5启动子功能分析 | 第82-83页 |
| 4．1．4．1 植物材料 | 第82页 |
| 4．1．4．2 BcMF5启动子菜心转化植株Southern杂交检测 | 第82页 |
| 4．1．4．3 BcMF5启动子菜心转化植株花粉的GUS染色观察 | 第82页 |
| 4．1．4．4 BcMF5启动子菜心转化植株的测交 | 第82-83页 |
| 4．2 结果与分析 | 第83-90页 |
| 4．2．1 BcMF5启动子的克隆 | 第83-85页 |
| 4．2．1．1 BcMF5启动子序列扩增 | 第83页 |
| 4．2．1．2 BcMF5基因启动子序列组成分析 | 第83-84页 |
| 4．2．1．3 BcMF5启动子序列元件分析 | 第84-85页 |
| 4．2．2 BcMF5基因启动子缺失表达载体构建 | 第85-90页 |
| 4．2．2．1 BcMF5基因启动子片段扩增 | 第85-86页 |
| 4．2．2．2 BcMF5基因启动子片段的序列分析 | 第86-88页 |
| 4．2．2．3 BcMF5基因启动子缺失表达载体的构建 | 第88-89页 |
| 4．2．2．4 BcMF5启动子缺失表达载体的验证 | 第89-90页 |
| 4．2．3 BcMF5启动子功能的初步分析 | 第90页 |
| 4．3 讨论 | 第90-94页 |
| 4．3．1 BcMF5启动子的克隆 | 第90-91页 |
| 4．3．2 BcMF5启动子功能分析 | 第91-94页 |
| 5 白菜多聚半乳糖醛酸酶基因BcMF6的克隆及功能分析 | 第94-116页 |
| 5．1 材料与方法 | 第94-99页 |
| 5．1．1 白菜多聚半乳糖醛酸酶基因BcMF6的克隆及序列分析 | 第94-95页 |
| 5．1．1．1 植物材料与试剂 | 第94页 |
| 5．1．1．2 BcMF6 cDNA和DNA全长的获得 | 第94-95页 |
| 5．1．1．3 BcMF6核苷酸序列分析 | 第95页 |
| 5．1．2 白菜多聚半乳糖醛酸酶基因BcMF6的反义RNA载体构建 | 第95-97页 |
| 5．1．2．1 菌株与质粒 | 第95页 |
| 5．1．2．2 反义片段的获得 | 第95-97页 |
| 5．1．2．3 反义片段的制备 | 第97页 |
| 5．1．2．3 双元载体pBI121制备 | 第97页 |
| 5．1．2．5 表达质粒的构建 | 第97页 |
| 5．1．2．6 冻融法转化农杆菌 | 第97页 |
| 5．1．2．7 农杆菌中质粒的鉴定 | 第97页 |
| 5．1．3 BcMF6菜心转基因植株的获得 | 第97页 |
| 5．1．4 BcMF6菜心转基因植株的分子检测及其功能分析 | 第97-98页 |
| 5．1．4．1 植物材料 | 第97页 |
| 5．1．4．2 BcMF6菜心转基因植株基因组DNA和总RNA的提取 | 第97-98页 |
| 5．1．4．3 BcMF6菜心转基因植株的PCR检测 | 第98页 |
| 5．1．4．4 BcMF6菜心转基因植株的Southern印迹杂交检测 | 第98页 |
| 5．1．4．5 BcMF6菜心转基因植株的Northern印迹杂交检测 | 第98页 |
| 5．1．5 BcMF6菜心转基因植株的花粉发育的形态与细胞学观察 | 第98-99页 |
| 5．1．5．1 试验材料 | 第98页 |
| 5．1．5．2 BcMF6菜心转基因植株的花粉萌发试验 | 第98-99页 |
| 5．1．5．3 BcMF6菜心转基因植株花粉的生活力及扫描电镜观察 | 第99页 |
| 5．2 结果与分析 | 第99-114页 |
| 5．2．1 白菜多聚半乳糖醛酸酶基因BcMF6的克隆及序列分析 | 第99-103页 |
| 5．2．1．1 RACE获得BcMF6的3’-UTR和5’-UTR序列 | 第99页 |
| 5．2．1．2 BcMF6基因DNA和cDNA全长的获得 | 第99-100页 |
| 5．2．1．3 BcMF6核苷酸序列分析 | 第100页 |
| 5．2．1．4 BcMF6基因的同源比对与系统树构建 | 第100-103页 |
| 5．2．2 BcMF6基因反义RNA载体的构建 | 第103-107页 |
| 5．2．2．1 BcMF6基因反义片段的获得 | 第103-104页 |
| 5．2．2．2 BcMF6基因35S-PBI121反义表达载体的构建 | 第104-106页 |
| 5．2．2．2 BcMF6基因A9-PBI121反义表达载体的构建 | 第106页 |
| 5．2．2．3 BcMF6基因BcA9-PBI121反义表达载体的构建 | 第106页 |
| 5．2．2．4 BcMF6基因反义表达载体农杆菌中质粒的鉴定 | 第106-107页 |
| 5．2．3 BcMF6菜心转基因植株的获得 | 第107-108页 |
| 5．2．4 BcMF6菜心转基因植株的分子检测及其功能分析 | 第108-111页 |
| 5．2．4．1 BcMF6菜心转基因植株的总DNA和RNA提取 | 第108页 |
| 5．2．4．2 BcMF6菜心转基因植株的PCR检测 | 第108-110页 |
| 5．2．4．3 BcMF6菜心转基因植株的Sourthern杂交检测 | 第110页 |
| 5．2．4．4 BcMF6菜心转基因植株的Northern杂交检测 | 第110-111页 |
| 5．2．5 BcMF6菜心转基因植株花粉发育的形态与细胞学观察 | 第111-114页 |
| 5．2．5．1 BcMF6菜心转基因植株的花粉萌发试验 | 第111-112页 |
| 5．2．5．2 BcMF6菜心转基因植株花粉的生活力及扫描电镜观察 | 第112-114页 |
| 5．3 讨论 | 第114-116页 |
| 5．3．1 BcMF6，一个新的花粉表达的PG基因 | 第114页 |
| 5．3．2 BcMF6在白菜花粉发育过程中的可能功能 | 第114-116页 |
| 结论 | 第116-118页 |
| 参考文献 | 第118-127页 |
