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人补体调节蛋白基因的克隆、共表达及功能研究

中文摘要第1-6页
英文摘要第6-11页
第一章 异种器管移植的研究进展第11-40页
   ·异种器官移植的概况第11-14页
   ·异种器官移植的主要障碍:超急性排斥反应第14-30页
     ·内皮细胞是一个功能复杂的效应器第15-16页
     ·自然抗体可以识别异种抗原而激活补体第16-17页
     ·异种抗原的去除可以避免或减轻超急性排斥反应第17-18页
     ·补体在超急性排斥反应中起关键性作用第18-30页
   ·克服超急性排斥反应的主要策略第30-37页
     ·培育表达人源补体调节蛋白的转基因动物第31-35页
     ·利用基因工程技术产生α1,3GT缺陷的转基因动物第35-36页
     ·异种器官移植研究问题与展望第36-37页
   ·本论文研究背景及目标第37-40页
第二章 人衰变加速因子DAF的cDNA克隆及序列分析第40-53页
 0 引言第40-41页
 1 材料和方法第41-46页
   ·材料与试剂第41-42页
   ·引物的设计与合成第42页
   ·方法第42-46页
 2 结果和讨论(Results and Discussion)第46-53页
   ·胚胎组织总RNA的提取第46-47页
   ·mRNA的分离及定量第47页
   ·cDNA第一链的合成以及DAFcDNA的扩增第47-48页
   ·PCR产物的纯化回收及与T-载体的连接、转化第48页
   ·DAF cDNA重组子的PCR鉴定第48页
   ·DAF cDNA的核苷酸序列及翻译蛋白质序列的特征分析第48-50页
   ·DAF基因的序列和结构分析第50-53页
第三章 人衰变加速因子DAF的真核表达及功能研究第53-74页
 0 引言第53-56页
 1 材料和方法第56-65页
   ·材料与试剂第56-59页
   ·方法第59-65页
 2 实验结果与讨论第65-74页
   ·重组真核表达载体pcDNA3-DAF的构建及鉴定第65-66页
   ·G418最适作用浓度的选择第66-67页
   ·稳定细胞系pcDNA3-DAF NIH/3T3的建立第67-68页
   ·NIH/3T3 pcDNA3和NIH/3T3 pcDNA3-DAF两种转化细胞的特性第68-69页
   ·稳定表达的人DAF分子保护NIH/3T3细胞免受人补体溶破作用第69-74页
第四章 人补体调节蛋白MCP、CD59在NIH/3T3细胞中的共表达及功能研究第74-102页
 0 引言第74-75页
 1 材料与方法第75-90页
   ·材料与试剂第75-76页
   ·实验方法第76-90页
 2 实验结果第90-99页
   ·pcDNA3-MCPCD59-DP和pcDNA3-MCPIRESCD59重组真核表达载体的构建及鉴定第90-93页
   ·NIH/3T3 pcDNA3、NIH/3T3 pcDNA3-MCPCD59-DP和NIH/3T3 pcDNA3-MCPIRESCD59三种转化细胞的特性第93-94页
   ·稳定表达的人补体调节蛋白CD59和MCP共同保护NIH/3T3细胞免受人补体溶破作用第94-99页
 3 讨论第99-102页
第五章 人补体调节蛋白DAF、CD59在NIH/3T3细胞中的共表达及功能研究第102-128页
 0 引言第102-103页
 1 材料与方法第103-117页
   ·实验材料第103-105页
   ·实验方法第105-117页
 2 实验结果第117-126页
   ·重组表达载体pcDNA3-DAFCD59-DP和pcDNA3-CD591RESDAF的构建及鉴定第117-120页
   ·人DAF和CD59 cDNA在转化的NIH/3T3细胞基因组上的整合第120-121页
   ·人补体调节蛋白基因DAF和CD59在mRNA水平上的共表达第121-122页
   ·人补体调节蛋白基因DAF和CD59在蛋白质水平上的共表达第122-124页
   ·人补体调节蛋白DAF和CD59共表达增强NIH/3T3细胞抵抗人补体攻击的能力第124-126页
 3 讨论第126-128页
第六章 人补体调节蛋白DAF、MCP在NIH/3T3细胞中的共表达及协同作用研究第128-148页
 0 引言第128-129页
 1 材料与方法第129-138页
   ·实验材料第129-131页
   ·实验方法第131-138页
 2 实验结果第138-146页
   ·pcDNA3-DAFMCP-DP和pcDNA3-MCPIRESDAF重组真核表达载体的构建及鉴定第138-141页
   ·人DAF和MCP cDNA在转化的NIH/3T3细胞基因组上的整合第141-142页
   ·人补体调节蛋白基因DAF和MCP在mRNA水平上的共表达第142-143页
   ·人补体调节蛋白基因DAF和MCP在蛋白质水平的共表达第143-145页
   ·共同表达的人补体调节蛋白DAF和MCP保护NIH/3T3细胞免遭人补体的攻击第145-146页
 3 讨论第146-148页
研究总结第148-149页
参考文献第149-194页
博士研究生期间发表的论文第194-195页
致谢第195页

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