| 摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-16页 |
| 第1章 文献综述 | 第16-36页 |
| ·肥胖基因的研究进展 | 第16-36页 |
| ·肥胖基因的基本结构 | 第16-18页 |
| ·小鼠肥胖基因的结构 | 第16页 |
| ·人ob基因的结构 | 第16-17页 |
| ·猪ob基因的结构 | 第17页 |
| ·鸡的ob基因结构 | 第17-18页 |
| ·ob基因的突变 | 第18页 |
| ·肥胖基因受体 | 第18-20页 |
| ·ob受体基因的结构和功能 | 第18-19页 |
| ·ob-R基因的表达 | 第19页 |
| ·leptin受体的信号传导机制 | 第19-20页 |
| ·肥胖基因的表达 | 第20-21页 |
| ·肥胖基因的分布 | 第20-21页 |
| ·肥胖基因表达的节律性变化 | 第21页 |
| ·肥胖基因表达的调控 | 第21-25页 |
| ·内分泌对Leptin分泌的影响 | 第21-23页 |
| ·胰岛素对leptin表达的影响 | 第21-22页 |
| ·糖皮质激素对leptin表达的影响 | 第22页 |
| ·生长激素对leptin表达的影响 | 第22-23页 |
| ·性激素对leptin的影响 | 第23页 |
| ·摄食对leptin基因表达的影响 | 第23-24页 |
| ·膳食结构对leptin基因表达的影响 | 第24页 |
| ·运动对leptin基因表达的影响 | 第24页 |
| ·其他因素对leptin表达的影响 | 第24-25页 |
| ·leptin调节的中枢与外周作用 | 第25-26页 |
| ·leptin调节的中枢作用 | 第25页 |
| ·leptin调节的外周作用 | 第25-26页 |
| ·leptin的生物学功能 | 第26-33页 |
| ·leptin与能量代谢 | 第27-28页 |
| ·leptin与生殖发育 | 第28-29页 |
| ·leptin与免疫功能 | 第29页 |
| ·lepti与细胞因子 | 第29-30页 |
| ·leptin与妊娠和胎儿的发育 | 第30-31页 |
| ·leptin与造血功能 | 第31页 |
| ·leptin对组织器官的作用 | 第31-33页 |
| ·leptin对胰腺的作用 | 第31页 |
| ·leptin对肝脏的作用 | 第31-32页 |
| ·leptin对骨代谢的影响 | 第32页 |
| ·leptin对其他组织的其他作用 | 第32-33页 |
| ·leptin抵抗现象 | 第33页 |
| ·leptin在肥胖治疗上的应用 | 第33-35页 |
| ·leptin在畜牧养殖上的应用前景 | 第35-36页 |
| 第2章 几种不同鱼类肥胖基因的克隆 | 第36-54页 |
| ·研究目的和意义 | 第36页 |
| ·材料与方法 | 第36-42页 |
| ·材料 | 第36-38页 |
| ·质粒与菌株 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36页 |
| ·酶、Marker及试剂盒 | 第36-37页 |
| ·引物 | 第37页 |
| ·主要试剂及溶液的配制 | 第37-38页 |
| ·方法 | 第38-42页 |
| ·不同摄食习性鱼类脂肪组织总RNA的提取 | 第38页 |
| ·不同摄食习性鱼类脂肪组织总RNA的纯化 | 第38-39页 |
| ·ob片段的扩增 | 第39页 |
| ·RT-PCR产物的电泳检测 | 第39页 |
| ·RT-PCR产物的回收与纯化 | 第39页 |
| ·RT-PCR产物的克隆 | 第39-40页 |
| ·感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第40页 |
| ·连接产物的转化 | 第40页 |
| ·重组质粒的快速鉴定 | 第40页 |
| ·质粒的提取 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第41页 |
| ·鱼类ob的测序 | 第41-42页 |
| ·鱼类ob与其他动物ob的同源性分析 | 第42页 |
| ·结果与分析 | 第42-50页 |
| ·肠系膜脂肪组织总RNA的提取 | 第42页 |
| ·不同鱼类ob基因的RT-PCR扩增 | 第42-44页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第44-45页 |
| ·重组质粒的序列测定 | 第45-49页 |
| ·鱼类肥胖基因的序列分析 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-53页 |
| ·小结 | 第53-54页 |
| 第3章 鲤肥胖基因在不同组织和不同胚胎发育阶段的表达 | 第54-60页 |
| ·研究目的和意义 | 第54页 |
| ·材料与方法 | 第54-56页 |
| ·材料 | 第54-55页 |
| ·试验动物 | 第54页 |
| ·主要试剂 | 第54-55页 |
| ·引物 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-56页 |
| ·鲤不同组织、不同胚胎发育阶段总RNA的提取 | 第55页 |
| ·鲤不同组织、不同胚胎发育阶段总RNA的纯化 | 第55页 |
| ·鲤ob基因在不同组织和不同胚胎发育阶段的表达 | 第55-56页 |
| ·RT-PCR产物的电泳检测 | 第56页 |
| ·结果与分析 | 第56-58页 |
| ·鲤不同组织中ob基因的表达 | 第56页 |
| ·鲤ob在不同胚胎发育阶段中的表达 | 第56-58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| 第4章 鲤肥胖基因的表达节律及不同生理条件对肥胖基因表达的影响 | 第60-69页 |
| ·研究目的和意义 | 第60页 |
| ·材料与方法 | 第60-61页 |
| ·材料 | 第60页 |
| ·试验动物 | 第60页 |
| ·主要试剂与试剂盒 | 第60页 |
| ·方法 | 第60-61页 |
| ·鲤高脂饲料的配制 | 第60-61页 |
| ·不同摄食状态下鲤leptin的表达 | 第61页 |
| ·鲤leptin的昼夜分泌规律 | 第61页 |
| ·血清中血糖、总胆固醇、甘油三酯的测定 | 第61页 |
| ·血清中Leptin、胰岛素的测定 | 第61页 |
| ·数据处理 | 第61页 |
| ·结果与分析 | 第61-66页 |
| ·不同生理条件下鲤leptin的表达 | 第61-65页 |
| ·鲤leptin的昼夜分泌表达规律 | 第65-66页 |
| ·讨论 | 第66-68页 |
| ·小结 | 第68-69页 |
| 第5章 鲤肥胖基因在大肠杆菌中的表达及生物学活性分析 | 第69-87页 |
| ·研究目的和意义 | 第69页 |
| ·材料与方法 | 第69-75页 |
| ·材料 | 第69-71页 |
| ·试验动物及饲料 | 第69页 |
| ·质粒与菌株 | 第69页 |
| ·培养基 | 第69-70页 |
| ·酶、Marke及试剂盒 | 第70页 |
| ·SDS-PAGE相关溶液 | 第70-71页 |
| ·Western-blot相关溶液 | 第71页 |
| ·包涵体提取相关溶液 | 第71页 |
| ·方法 | 第71-75页 |
| ·原核表达质粒的构建 | 第71-72页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第72页 |
| ·SDS-PAGE检测 | 第72-73页 |
| ·Western-blot分析 | 第73-74页 |
| ·包涵体的提取 | 第74页 |
| ·包涵体的纯化与复性 | 第74页 |
| ·小鼠肥胖模型的制备 | 第74页 |
| ·重组leptin对小鼠的影响 | 第74页 |
| ·血清中血糖、总胆固醇、甘油三酯的测定 | 第74-75页 |
| ·血清胰岛素的测定 | 第75页 |
| ·数据处理 | 第75页 |
| ·结果与分析 | 第75-83页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第75页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第75-76页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE检测 | 第76-77页 |
| ·表达产物的Westernblot分析和包涵体的提取 | 第77页 |
| ·小鼠肥胖模型的建立 | 第77-78页 |
| ·leptin对小鼠摄食量的影响 | 第78-79页 |
| ·leptin对小鼠体重的影响 | 第79-80页 |
| ·leptin对小鼠血清相关生化指标和体脂的影响 | 第80-83页 |
| ·讨论 | 第83-86页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第83页 |
| ·鲤ob基因表达包涵体的提取与纯化 | 第83-85页 |
| ·重组鲤leptin的生物学活性 | 第85-86页 |
| ·小结 | 第86-87页 |
| 第6章 鲤肥胖基因在巴斯德毕赤酵母中的表达 | 第87-100页 |
| ·研究的目的及意义 | 第87页 |
| ·材料与方法 | 第87-94页 |
| ·材料 | 第87-90页 |
| ·质粒与株 | 第87页 |
| ·主要试剂 | 第87-88页 |
| ·贮存液 | 第88-89页 |
| ·培养基 | 第89页 |
| ·SDS-PAGE相关溶液 | 第89-90页 |
| ·Western-blot相关溶液 | 第90页 |
| ·蛋白质银染相关溶液 | 第90页 |
| ·本研究所用的引物 | 第90页 |
| ·方法 | 第90-94页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第90-91页 |
| ·重组表达载体的线化 | 第91-92页 |
| ·酵母菌感受态细胞的制备 | 第92页 |
| ·酵母菌的转化 | 第92页 |
| ·酵母细胞DNA的提取 | 第92-93页 |
| ·酵母阳性重组子筛选 | 第93页 |
| ·阳性转化子Mut表型鉴定 | 第93页 |
| ·多拷贝酵母重组子的筛选 | 第93页 |
| ·重组酵母的小量诱导表达 | 第93页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE电泳检测 | 第93页 |
| ·Western-blot分析 | 第93-94页 |
| ·结果与分析 | 第94-96页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第94页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第94-95页 |
| ·重组酵母的转化及鉴定 | 第95页 |
| ·Mut表型鉴定 | 第95-96页 |
| ·诱导产物的SDS-PAGE电泳及其Western-blot分析 | 第96页 |
| ·讨论 | 第96-99页 |
| ·酵母表达重组质粒的构建、表型定 | 第96-97页 |
| ·高拷贝菌株的筛选 | 第97-98页 |
| ·酵母的诱导表达 | 第98-99页 |
| ·小结 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-116页 |
| 缩略词 | 第116-118页 |
| 附录1 | 第118-119页 |
| 附录2 | 第119-120页 |
| 致谢 | 第120页 |
