| 第一部分 文献综述 | 第1-24页 |
| 综述一. 基因打靶技术研究进展 | 第7-17页 |
| 1 基因打靶的研究历史 | 第7-8页 |
| 2 基因打靶的原理 | 第8-9页 |
| 3 基因打靶的方法 | 第9-12页 |
| ·基因打靶载体 | 第9-10页 |
| ·靶位基因的选择 | 第10页 |
| ·打靶细胞类型 | 第10页 |
| ·中靶细胞筛选和鉴定 | 第10-12页 |
| ·重组酶系统 | 第12页 |
| 4 影响基因打靶的因素 | 第12-14页 |
| ·打靶载体 | 第12-13页 |
| ·外源DNA导入方式 | 第13页 |
| ·靶位基因 | 第13页 |
| ·调控元件 | 第13-14页 |
| 5 基因打靶技术的应用前景 | 第14-17页 |
| ·基因打靶技术是研究基因功能的一个重要手段 | 第14-15页 |
| ·基因打靶在基因治疗中的应用 | 第15页 |
| ·体细胞基因打靶在转基因大动物中的应用 | 第15-17页 |
| 综述二. TPO基因研究进展 | 第17-24页 |
| 1 TPO的发现 | 第17-18页 |
| 2 TPO的结构 | 第18-20页 |
| ·TPO的基因结构 | 第18-19页 |
| ·TPO的蛋白质结构 | 第19-20页 |
| 3 TPO的受体及TPO作用的分子机理 | 第20-22页 |
| ·TPO受体的结构 | 第20-21页 |
| ·TPO信号传导与细胞凋亡 | 第21-22页 |
| 4 TPO研究意义及应用前景 | 第22-24页 |
| 第二部分 实验研究 人TPO基因牛体细胞定点整合载体构建与细胞转染研究 | 第24-45页 |
| 1 材料与方法 | 第25-35页 |
| ·实验材料 | 第25-27页 |
| ·实验方法 | 第27-32页 |
| ·主要溶液配制 | 第27-28页 |
| ·哺乳动物组织基因组DNA的提取 | 第28页 |
| ·高效化学法制备感受态细胞及其效价测定 | 第28-29页 |
| ·PCR反应 | 第29页 |
| ·酶切反应 | 第29页 |
| ·切胶回收目的片段 | 第29-30页 |
| ·连接反应 | 第30页 |
| ·Cracking法快速鉴定重组质粒 | 第30页 |
| ·质粒DNA小量制备 | 第30-31页 |
| ·细胞转染质粒DNA准备 | 第31页 |
| ·阳性脂质体法细胞转染外源DNA片段 | 第31-32页 |
| ·打靶载体构建路线与细胞筛选路线 | 第32-35页 |
| ·人TPO基因打靶载体构建路线 | 第32-35页 |
| ·中靶细胞筛选路线 | 第35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-40页 |
| ·水牛和绵羊β-酪蛋白5′调控区的克隆 | 第35-36页 |
| ·水牛β-酪蛋白5′调控区分析 | 第36-38页 |
| ·重组质粒ploxp-6.0K-BβCN-TPO-1.78K的鉴定 | 第38页 |
| ·打靶载体ploxp-6.0K-BβCN-TPO-1.78K的鉴定 | 第38-39页 |
| ·打靶载体ploxp-6.0K-SβCN-TPO-1.78K的鉴定 | 第39页 |
| ·抗性细胞筛选培养 | 第39-40页 |
| 3 讨论 | 第40-45页 |
| ·绵羊和水牛β-酪蛋白5′调控区的克隆与分析 | 第40-41页 |
| ·LA-PCR在打靶载体构建中的应用 | 第41页 |
| ·打靶载体设计思路 | 第41-43页 |
| ·打靶载体各DNA片段的连接 | 第43页 |
| ·阳离子脂质体转染外源DNA | 第43-44页 |
| ·G418与GNAC筛选 | 第44-45页 |
| 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
