| 前言 | 第1-13页 |
| 第一部分 灵芝免疫调节蛋白基因的克隆 | 第13-33页 |
| 1 文献综述 | 第13-14页 |
| 2 材料方法 | 第14-19页 |
| ·材料及试剂 | 第14-15页 |
| ·材料 | 第14-15页 |
| ·试剂 | 第15页 |
| ·质粒及菌种 | 第15页 |
| ·引物的设计及合成 | 第15页 |
| ·方法 | 第15-19页 |
| ·灵芝菌丝的培养 | 第15页 |
| ·灵芝总DNA的提取 | 第15-16页 |
| ·PCR扩增 | 第16页 |
| ·PCR产物的回收及纯化 | 第16-17页 |
| ·PCR片段的连接与转化 | 第17-18页 |
| ·连接 | 第17页 |
| ·转化 | 第17-18页 |
| ·E. coli DH-5α感受态的制备 | 第17页 |
| ·感受态鉴定 | 第17-18页 |
| ·重组质粒的转化 | 第18页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第18-19页 |
| ·质粒提取 | 第18页 |
| ·酶切鉴定 | 第18-19页 |
| ·PCR鉴定 | 第19页 |
| ·DNA序列测定 | 第19页 |
| ·序列分析 | 第19页 |
| 3 结果与分析 | 第19-28页 |
| ·基因组DNA提取结果 | 第19-20页 |
| ·基因组PCR结果 | 第20-21页 |
| ·质粒鉴定结果 | 第21页 |
| ·测序结果 | 第21页 |
| ·序列分析结果 | 第21-28页 |
| ·核酸同源性析 | 第21-23页 |
| ·LY32 BLASTn分析 | 第22-23页 |
| ·其余三条序列的分析 | 第23页 |
| ·cds的BLASTx分析 | 第23-26页 |
| ·LY32的cds区BLASTx分析 | 第23-26页 |
| ·LY35，LY36，LY37的cds区域分析 | 第26页 |
| ·dnassist2.0分析 | 第26-28页 |
| ·结论 | 第28页 |
| 4 讨论 | 第28-33页 |
| ·dnassist2.0分析 | 第28-31页 |
| ·4条片段同时比较 | 第28-30页 |
| ·LY32、LY35、LY37序列比较 | 第30-31页 |
| ·在线进化树分析 | 第31-32页 |
| ·结论 | 第32-33页 |
| 第二部分 灵芝β-1，3-Glucan合酶基因的克隆 | 第33-41页 |
| 1 文献综述 | 第33-34页 |
| ·β-1，3-Glucan合酶介绍 | 第33页 |
| ·灵芝多糖研究进展 | 第33-34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-37页 |
| ·材料及试剂 | 第34-35页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·试剂 | 第34页 |
| ·质粒及菌种 | 第34-35页 |
| ·引物的设计及合成 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-37页 |
| ·灵芝菌丝的培养 | 第35页 |
| ·灵芝总DNA的提取 | 第35页 |
| ·基因组PCR扩增 | 第35页 |
| ·PCR产物的回收及纯化 | 第35-36页 |
| ·PCR片段的连接与转化 | 第36页 |
| ·连接 | 第36页 |
| ·转化 | 第36页 |
| ·E. coli DH-5α感受态的制备 | 第36页 |
| ·感受态鉴定 | 第36页 |
| ·重组质粒的转化 | 第36页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第36-37页 |
| ·质粒提取 | 第36页 |
| ·酶切鉴定 | 第36页 |
| ·PCR鉴定 | 第36-37页 |
| ·DNA序列测定 | 第37页 |
| ·序列分析 | 第37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-38页 |
| ·基因组提取结果 | 第37页 |
| ·基因组PCR结果 | 第37-38页 |
| ·酶切鉴定 | 第38页 |
| ·测序结果及结果分析 | 第38页 |
| ·核酸同源性分析 | 第38页 |
| ·编码区预测 | 第38页 |
| 4 讨论 | 第38-41页 |
| 第三部分 灵芝酪氨酸酶基因的克隆 | 第41-59页 |
| 1 文献综述 | 第41-47页 |
| ·酪氨酸酶在黑色素研究中的意义 | 第41页 |
| ·酪氨酸酶基因家族与皮肤黑素生成 | 第41-42页 |
| ·担子菌来源酪氨酸酶研究进展 | 第42-47页 |
| ·蘑菇酪氨酸酶的生物化学特征 | 第42-43页 |
| ·蘑菇酪氨酸酶抑制剂研究进展 | 第43-45页 |
| ·蘑菇酪氨酸酶临床医学研究进展 | 第45-47页 |
| 2 材料与方法 | 第47-52页 |
| ·材料及试剂 | 第47页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·质粒及菌种 | 第47页 |
| ·引物的设计及合成 | 第47页 |
| ·方法 | 第47-52页 |
| ·灵芝菌丝的培养 | 第47页 |
| ·灵芝总DNA的提取 | 第47页 |
| ·基因组PCR扩增 | 第47-49页 |
| ·PCR产物的回收及纯化 | 第49页 |
| ·PCR片段的连接与转化 | 第49-50页 |
| ·连接 | 第49-50页 |
| ·转化 | 第50页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第50-52页 |
| ·质粒提取 | 第50页 |
| ·酶切鉴定 | 第50页 |
| ·PCR鉴定 | 第50-52页 |
| ·DNA序列测定 | 第52页 |
| ·序列分析 | 第52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-55页 |
| ·基因组PCR扩增结果 | 第52-53页 |
| ·鉴定结果 | 第53页 |
| ·序列分析结果 | 第53-55页 |
| ·核酸同源性分析 | 第53页 |
| ·氨基酸序列同源性分析 | 第53-55页 |
| 4 讨论 | 第55-59页 |
| 第四部分 灵芝gpd启动子与ras启动子的克隆及检测 | 第59-76页 |
| 1 文献综述 | 第59-63页 |
| ·启动子的概念及其分类 | 第59页 |
| ·启动子克隆的意义及其克隆方法 | 第59-61页 |
| ·启动子克隆的意义 | 第59页 |
| ·启动子克隆的方法 | 第59-61页 |
| ·利用启动子探针质粒载体筛选启动子 | 第59-60页 |
| ·利用PCR技术克隆启动子 | 第60-61页 |
| ·食用真菌启动子研究现状 | 第61-63页 |
| ·食用真菌启动子克隆现状 | 第61页 |
| ·ras及gpd启动子研究 | 第61-63页 |
| ·真菌原生质体电转化研究 | 第63页 |
| ·大型担子菌细胞壁结构及脱壁酶 | 第63页 |
| ·电激法转化大型担子菌研究现状 | 第63页 |
| ·技术路线 | 第63页 |
| 2 材料与方法 | 第63-65页 |
| ·材料及试剂 | 第63-64页 |
| ·材料 | 第63-64页 |
| ·试剂 | 第64页 |
| ·质粒及菌种 | 第64页 |
| ·引物的设计及合成 | 第64页 |
| ·方法 | 第64-65页 |
| ·灵芝菌丝的培养 | 第64页 |
| ·灵芝总DNA的提取 | 第64页 |
| ·PCR扩增 | 第64-65页 |
| ·PCR产物的回收及纯化 | 第65页 |
| ·PCR片段的连接与转化 | 第65页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第65页 |
| ·DNA序列测定 | 第65页 |
| ·序列分析 | 第65页 |
| 3 启动子克隆结果与分析 | 第65-68页 |
| ·灵芝菌丝总DNA提取结果 | 第65页 |
| ·PCR扩增结果 | 第65-66页 |
| ·克隆载体鉴定结果 | 第66-67页 |
| ·序列分析 | 第67-68页 |
| ·核酸同源性分析 | 第67页 |
| ·用启动子分析软件进行序列分析 | 第67-68页 |
| ·用Proscan:Version 1.7进行分析 | 第67-68页 |
| ·用Promoter 2.0 Prediction进行分析 | 第68页 |
| 4 假定启动子活性片段的活性检测 | 第68-73页 |
| ·材料与方法 | 第68-69页 |
| ·材料 | 第69页 |
| ·宿主菌 | 第69页 |
| ·载体 | 第69页 |
| ·培养基 | 第69页 |
| ·试剂 | 第69页 |
| ·方法 | 第69-72页 |
| ·表达载体的构建 | 第69-71页 |
| ·表达载体的鉴定 | 第71页 |
| ·菌丝培养及原生质体的制备 | 第71页 |
| ·原生质体转化 | 第71-72页 |
| ·电转化缓冲溶液 | 第71页 |
| ·电转化仪参数设置 | 第71页 |
| ·转化方法 | 第71-72页 |
| ·拟转化子筛选 | 第72页 |
| ·结果与分析 | 第72-73页 |
| ·表达载体酶切鉴定结果 | 第72-73页 |
| ·拟转化子GUS组织化学分析结果 | 第73页 |
| ·活性检测结论 | 第73页 |
| 5 结论 | 第73页 |
| 6 讨论 | 第73-76页 |
| 参考文献 | 第76-87页 |
| 附录1 LY33测序峰图及部分序列 | 第87-88页 |
| 附录2. LY35测序峰图及部分序列 | 第88-89页 |
| 附录3. LY36测序峰图及部分序列 | 第89-90页 |
| 附录4. LY37测序峰图及部分序列 | 第90-91页 |
| 附录5. LY31测序峰图及部分序列 | 第91-92页 |
| 附录6 LY19.3测序峰图和序列 | 第92-93页 |
| 附录7 所有克隆序列BLASTn分析结果总结 | 第93-94页 |
