| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-10页 |
| 1 前言 | 第10-25页 |
| ·漆酶的研究概况 | 第10-17页 |
| ·漆酶的理化性质 | 第10-12页 |
| ·漆酶分子生物学研究进展 | 第12-17页 |
| ·漆酶的应用 | 第17页 |
| ·国内外漆酶及其技术的研究进展 | 第17页 |
| ·简并引物PCR技术及其在基因克隆中的应用 | 第17-19页 |
| ·简并引物PCR技术 | 第17-18页 |
| ·应用简并引物PCR获得全长基因的方法 | 第18页 |
| ·简并引物PCR技术的应用范围 | 第18页 |
| ·简并引物PCR在基因克隆中的应用 | 第18-19页 |
| ·cDNA末端快速扩增技术(RACE)研究进展 | 第19-21页 |
| ·RACE技术原理 | 第19页 |
| ·RACE技术的局限性 | 第19页 |
| ·RACE技术的改进与优化 | 第19-21页 |
| ·RACE在基因克隆上的技术优势及其前景 | 第21页 |
| ·生物信息学的应用 | 第21-24页 |
| ·数据库查询和数据库搜索 | 第21-23页 |
| ·生物信息学的主要应用领域 | 第23-24页 |
| ·白腐菌漆酶基因克隆方法的确定 | 第24页 |
| ·研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 2 扁芝菌(Elfvngia applanata)mRNA无Poly(A)尾的验证 | 第25-33页 |
| ·材料与方法 | 第25-29页 |
| ·供试菌种 | 第25页 |
| ·培养基及培养条件 | 第25页 |
| ·菌丝收集 | 第25-26页 |
| ·酶及生化试剂 | 第26页 |
| ·扁芝菌总RNA的制备 | 第26-27页 |
| ·mRNA的分离纯化 | 第27页 |
| ·RT-PCR体系的建立 | 第27-28页 |
| ·变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 | 第28-29页 |
| ·阳性材料对照实验 | 第29页 |
| ·结果与分析 | 第29-31页 |
| ·扁芝菌总RNA分离结果 | 第29-30页 |
| ·mRNA的分离纯化结果 | 第30页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 | 第30-31页 |
| ·结论与讨论 | 第31-33页 |
| 3 各菌种漆酶基因片段的克隆与序列分析 | 第33-48页 |
| ·材料与方法 | 第33-38页 |
| ·菌种、菌株、质粒与试剂 | 第33页 |
| ·菌种培养及菌丝体收集 | 第33页 |
| ·漆酶活性的检测 | 第33-34页 |
| ·丝状真菌DNA的提取 | 第34页 |
| ·简并引物的设计 | 第34-35页 |
| ·PCR体系的建立 | 第35页 |
| ·PCR反应条件的优化 | 第35页 |
| ·扩增片段的克隆 | 第35-38页 |
| ·序列测定和同源性比较 | 第38页 |
| ·结果与分析 | 第38-45页 |
| ·丁香醛连氮法测定Laccase活性 | 第38页 |
| ·各菌种基因组DNA的提取 | 第38-39页 |
| ·PCR反应条件的优化 | 第39页 |
| ·各菌种漆酶基因片段的扩增 | 第39-40页 |
| ·阳性克隆的初步筛选 | 第40页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第40-41页 |
| ·各菌种阳性重组体的测序结果 | 第41-44页 |
| ·各菌种测序结果的同源性检索分析 | 第44-45页 |
| ·漆酶基因片段结构分析和组织分析及氨基酸序列的推导 | 第45页 |
| ·各菌种漆酶基因片段核苷酸序列和推导的氨基酸序列同源性分析 | 第45页 |
| ·序列提交 | 第45页 |
| ·结论与讨论 | 第45-48页 |
| ·漆酶活性测定 | 第45-46页 |
| ·丝状真菌DNA的提取 | 第46页 |
| ·简并引物与梯度PCR的协同使用 | 第46-47页 |
| ·漆酶基因片段克隆和序列分析 | 第47-48页 |
| 4 血红密孔菌漆酶全长基因的克隆 | 第48-67页 |
| ·实验材料与试剂 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-51页 |
| ·血红密孔菌RNA的提取 | 第48页 |
| ·RACE获得基因 | 第48-50页 |
| ·血红密孔菌漆酶全长cDNA的扩增 | 第50-51页 |
| ·血红密孔菌漆酶基因的DNA序列扩增 | 第51页 |
| ·扩增产物的克隆和序列测定 | 第51页 |
| ·序列分析 | 第51页 |
| ·结果与分析 | 第51-65页 |
| ·血红密孔菌漆酶全长cDNA的克隆和结构分析 | 第51-61页 |
| ·血红密孔菌漆酶内含子的克隆和序列分析 | 第61-65页 |
| ·结论与讨论 | 第65-67页 |
| ·SMART RACE在血红密孔菌漆酶基因克隆上的应用 | 第65页 |
| ·血红密孔菌漆酶基因结构分析 | 第65-67页 |
| 5 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 附录 | 第75-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
