烟草主要病毒的分子鉴定与检测技术
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 引言 | 第9-30页 |
| 1 烟草主要病毒病发生概况 | 第9-10页 |
| 2 烟草主要病毒研究概况 | 第10-15页 |
| ·烟草花叶病毒 | 第10-11页 |
| ·TMV的基因组 | 第10-11页 |
| ·黄瓜花叶病毒 | 第11-12页 |
| ·CMV的基因组 | 第11-12页 |
| ·CMV亚组核酸性质的研究 | 第12页 |
| ·马铃薯Y病毒 | 第12-15页 |
| ·PVY的基因组 | 第12-14页 |
| ·PVY各株系核酸性质的研究 | 第14-15页 |
| 3 植物病毒的检测方法 | 第15-27页 |
| ·免疫学检测方法 | 第16-20页 |
| ·酶联免疫吸附法 | 第16-19页 |
| ·基本原理 | 第16页 |
| ·双抗体夹心法 | 第16-17页 |
| ·斑点酶联免疫吸附法 | 第17-18页 |
| ·快速酶联免疫吸附法 | 第18页 |
| ·异体动物双抗体夹心法 | 第18页 |
| ·生物素抗生物素酶联法 | 第18页 |
| ·A蛋白酶联免疫吸附法 | 第18-19页 |
| ·其他以抗体为基础的免疫学方法 | 第19-20页 |
| ·直接组织斑点免疫测定 | 第19页 |
| ·免疫电镜技术 | 第19页 |
| ·IgG指示试纸法 | 第19-20页 |
| ·快速免疫滤纸测定法 | 第20页 |
| ·分子检测技术 | 第20-27页 |
| ·RT-PCR检测技术 | 第20-23页 |
| ·常规RT-PCR检测技术 | 第20-21页 |
| ·多元-RT-PCR检测技术 | 第21-22页 |
| ·荧光竞争-RT-PCR检测技术 | 第22页 |
| ·实时荧光RT-PCR检测技术 | 第22-23页 |
| ·免疫捕获RT-PCR检测技术 | 第23页 |
| ·免疫捕获巢式PCR检测技术 | 第23页 |
| ·核酸序列扩增检测技术 | 第23-25页 |
| ·常规核酸序列扩增法 | 第23-24页 |
| ·分子信标-核酸序列扩增法 | 第24-25页 |
| ·核酸杂交检测技术 | 第25-27页 |
| ·核酸斑点杂交技术 | 第26-27页 |
| ·PCR微量板杂交检测技术 | 第27页 |
| 4 植物病毒检测技术总述及本研究的立题意义 | 第27-30页 |
| ·植物病毒检测技术总述 | 第27-29页 |
| ·本研究的立题目的与意义 | 第29-30页 |
| 第二章 材料与方法 | 第30-39页 |
| 1 材料 | 第30-31页 |
| ·植物材料 | 第30页 |
| ·抗血清 | 第30页 |
| ·质粒与菌株 | 第30页 |
| ·引物 | 第30页 |
| ·试剂及酶类 | 第30-31页 |
| 2 方法 | 第31-39页 |
| ·烟草主要病毒的采集、检测与繁殖 | 第31-32页 |
| ·烟草病毒的采集 | 第31页 |
| ·烟草病毒的生物学鉴定和繁殖 | 第31页 |
| ·血清学检测 | 第31-32页 |
| ·间接-ELISA法 | 第31-32页 |
| ·双抗夹心-ELISA法 | 第32页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第32-33页 |
| ·烟草花叶病毒RNA的提取 | 第32-33页 |
| ·TRIzol法提取植物总RNA | 第33页 |
| ·提取的RNA含量测定 | 第33页 |
| ·反转录-聚合酶链式反应 | 第33-34页 |
| ·反转录 | 第33页 |
| ·聚合酶链式反应 | 第33-34页 |
| ·一步RT-PCR法 | 第34页 |
| ·目的基因转化大肠杆菌 | 第34-36页 |
| ·DNA片段的纯化 | 第34-35页 |
| ·PCR产物与pGEM-Teasy载体的连接 | 第35页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第35-36页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 | 第36页 |
| ·重组克隆的酶切鉴定 | 第36页 |
| ·序列测定与分析 | 第36-37页 |
| ·DNA序列测定 | 第36页 |
| ·序列测定结果的计算机分析与比较 | 第36-37页 |
| ·DNA探针的制备及应用 | 第37-38页 |
| ·地高辛标记的DNA探针制备 | 第37页 |
| ·DIG探针核酸点杂交 | 第37-38页 |
| ·烟草病毒检测试剂盒的研制 | 第38-39页 |
| 第三章 烟草花叶病毒的分子鉴定与检测 | 第39-46页 |
| 1 样品的鉴定和毒源的获得 | 第39-40页 |
| ·样品的采集和血清学鉴定 | 第39-40页 |
| ·TMV的生物学鉴定及毒源的繁殖 | 第40页 |
| 2 TMV CP基因的克隆与序列分析 | 第40-42页 |
| ·TMV CP基因的RT-PCR扩增及克隆 | 第40-41页 |
| ·TMV CP基因序列测定 | 第41页 |
| ·TMV不同分离物CP基因核苷酸序列差异分析 | 第41-42页 |
| 3 TRIzol法提取病叶总RNA及其测定 | 第42-43页 |
| 4 TMV RT-PCR检测技术 | 第43页 |
| 5 TMV核酸杂交检测技术 | 第43-46页 |
| ·地高辛探针的获得 | 第43-44页 |
| ·TMV核酸斑点杂交检测 | 第44-46页 |
| 第四章 黄瓜花叶病毒的分子鉴定与检测 | 第46-53页 |
| 1 样品的鉴定和毒源的获得 | 第46页 |
| ·样品的采集和血清学鉴定 | 第46页 |
| ·CMV的生物学鉴定及毒源的繁殖 | 第46页 |
| 2 CMV CP基因的克隆与序列分析 | 第46-51页 |
| ·TRIzol法提取病叶总RNA及其测定 | 第46-47页 |
| ·CMV CP基因的RT-PCR扩增及克隆 | 第47页 |
| ·CMV CP基因序列测定 | 第47-48页 |
| ·CMV CP基因序列分析 | 第48-51页 |
| 3 CMV RT-PCR检测技术 | 第51页 |
| 4 CMV核酸杂交检测技术 | 第51-53页 |
| ·地高辛探针的获得 | 第51-52页 |
| ·CMV核酸斑点杂交检测 | 第52-53页 |
| 第五章 马铃薯Y病毒的分子鉴定与检测 | 第53-61页 |
| 1 样品的鉴定和毒源的获得 | 第53页 |
| ·样品的采集和血清学鉴定 | 第53页 |
| ·PVY的生物学鉴定及毒源的繁殖 | 第53页 |
| 2 PVY CP基因的克隆与序列分析 | 第53-59页 |
| ·TRIzol法提取病叶总RNA及其测定 | 第53-54页 |
| ·PVY CP基因的RT-PCR扩增及克隆 | 第54页 |
| ·PVY CP基因序列测定 | 第54-56页 |
| ·PVY CP基因序列分析 | 第56-59页 |
| 3 PVY RT-PCR检测技术 | 第59页 |
| 4 PVY核酸杂交检测技术 | 第59-61页 |
| ·地高辛探针的获得 | 第59-60页 |
| ·PVY核酸斑点杂交检测 | 第60-61页 |
| 第六章 烟草病毒核酸杂交检测试剂盒的研制 | 第61-64页 |
| 1 试剂组成及配方 | 第61页 |
| ·试剂组成 | 第61页 |
| ·试剂配方: | 第61页 |
| 2 操作方法 | 第61-63页 |
| ·DIG探针核酸点杂交 | 第61-62页 |
| ·DIG探针杂交免疫检测 | 第62-63页 |
| 3 注意事项 | 第63页 |
| 4 检测试剂盒的应用 | 第63-64页 |
| 结论与讨论 | 第64-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
