缩写表 | 第1-7页 |
中文摘要 | 第7-9页 |
英文摘要 | 第9-11页 |
1. 前言 | 第11-23页 |
1.1 过氧化氢酶 | 第11-18页 |
1.1.1 过氧化氢酶的结构和功能 | 第11-12页 |
1.1.2 植物过氧化氢酶的分子进化及分类 | 第12-14页 |
1.1.3 拟南芥过氧化氢酶 | 第14-16页 |
1.1.4 植物中过氧化氢酶基因功能的研究 | 第16页 |
1.1.5 SA对过氧化氢酶的影响 | 第16-18页 |
1.2 研究基因功能的方法 | 第18-21页 |
1.2.1 正向和反向遗传学 | 第18-19页 |
1.2.2 RNAi现象及其机制 | 第19页 |
1.2.3 RNAi技术用于基因功能研究的优点及其在植物中的应用 | 第19-21页 |
1.3 论文的选题意义及依据 | 第21-23页 |
2. 材料与方法 | 第23-34页 |
2.1 实验材料和试剂 | 第23-24页 |
2.2 实验方法 | 第24-32页 |
2.2.1 拟南芥(Arabidopsis thaliana)野生型材料的种植方法 | 第24页 |
2.2.2 CTAB法制备拟南芥基因组DNA | 第24-25页 |
2.2.3 PCR扩增 | 第25页 |
2.2.4 DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第25-26页 |
2.2.5 从低熔点琼脂糖中回收目的DNA片段 | 第26页 |
2.2.6 核酸的定量 | 第26页 |
2.2.7 DNA的限制性内切酶消化 | 第26-27页 |
2.2.8 酶切产物的连接 | 第27页 |
2.2.9 大肠杆菌(E.coli)质粒提取 | 第27-28页 |
2.2.10 大肠杆菌(E.coli)感受态细胞的制备和转化 | 第28页 |
2.2.11 DNA末端的去磷酸化 | 第28-29页 |
2.2.12 农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)质粒提取 | 第29页 |
2.2.13 农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)感受态的制备及转化 | 第29页 |
2.2.14 农杆菌介导拟南芥转化(Floraldip) | 第29-30页 |
2.2.15 潜在转化株系的筛选 | 第30页 |
2.2.16 Trizol法提取拟南芥总RNA | 第30页 |
2.2.17 RNA的甲醛变性琼脂糖凝胶电泳 | 第30-31页 |
2.2.18 反转录制备拟南芥cNDA | 第31页 |
2.2.19 从cDNA中扩增目的基因 | 第31-32页 |
2.3 实验溶液 | 第32-34页 |
2.3.1 常用溶液 | 第32页 |
2.3.2 抗生素 | 第32页 |
2.3.3 培养基 | 第32-34页 |
3. 实验步骤及结果 | 第34-52页 |
3.1 生物信息学分析结果 | 第34-35页 |
3.1.1 植物几种过氧化氢酶间的同源性分析结果 | 第34页 |
3.1.2 拟南芥Cat3启动子区域结构分析 | 第34-35页 |
3.2 拟南芥Cat3基因片段的克隆: | 第35-39页 |
3.2.1 引物设计 | 第35-37页 |
3.2.2 基因扩增 | 第37页 |
3.2.3 目的基因扩增产物的测序 | 第37-39页 |
3.3 质粒构建: | 第39-48页 |
3.3.1 质粒构建方案: | 第39-42页 |
3.3.1.1 质粒pFGC5941cat3as的构建方案 | 第39-40页 |
3.3.1.2 质粒pMD18T-cat3的构建方案 | 第40-41页 |
3.3.1.3 质粒pFGC5941cat3ds的构建方案 | 第41-42页 |
3.3.2 质粒构建步骤及结果 | 第42-48页 |
3.3.2.1 质粒pFGC5941cat3as的构建 | 第42-44页 |
3.3.2.2 质粒pMD18T-cat3的构建 | 第44-46页 |
3.3.3.3 质粒pFGCcat3ds的构建 | 第46-48页 |
3.4 重组pFGCcat3ds质粒对农杆菌的转化: | 第48-49页 |
3.5 农杆菌介导的拟南芥转化 | 第49页 |
3.6 潜在转化株的筛选 | 第49-50页 |
3.7 不同处理对Cat3基因转录水平的影响 | 第50-52页 |
4. 讨论 | 第52-57页 |
5. 结论 | 第57-58页 |
6. 参考文献 | 第58-63页 |
致谢 | 第63页 |