| 第一章 基因工程控制植物育性的研究综述 | 第1-29页 |
| 1 人工控制植物育性的遗传基础 | 第13-17页 |
| 1．1 核育性因子 | 第14-15页 |
| 1．2 质育性因子 | 第15-17页 |
| 2 基因工程控制植物育性 | 第17-22页 |
| 2．1 特异启动子及特殊基因的分离 | 第18-19页 |
| 2．2 人工创建三系策略的完善 | 第19-22页 |
| 2．2．1 特异启动子表达特殊基因控制育性的策略 | 第19-20页 |
| 2．2．2 反义RNA策略控制植物育性 | 第20-21页 |
| 2．2．3 其它育性控制途径 | 第21-22页 |
| 3 结语 | 第22-23页 |
| 参考文献 | 第23-29页 |
| 第二章 转基因雄性不育烟草的获得和温度敏感性研究 | 第29-43页 |
| 1 材料和方法 | 第29-33页 |
| 1．1 植物材料 | 第29-30页 |
| 1．2 PCR引物 | 第30页 |
| 1．3 A6、A9启动子的克隆 | 第30页 |
| 1．4 A6-Barnase和A9-Barnase嵌合基因载体的构建 | 第30-31页 |
| 1．5 雄性不育基因植物表达载体的改造 | 第31页 |
| 1．6 烟草的遗传转化与再生 | 第31-32页 |
| 1．7 Southern杂交 | 第32页 |
| 1．8 抗除草剂检测 | 第32页 |
| 1．9 育性检测 | 第32页 |
| 1．10 温度敏感性实验 | 第32-33页 |
| 2 结果与分析 | 第33-39页 |
| 2．1 A6，A9启动子的克隆及序列分析 | 第33-34页 |
| 2．2 雄性不育植物表达载体的获得 | 第34-35页 |
| 2．3 转基因雄性不育烟草的获得 | 第35-38页 |
| 2．4 Barnase基因在花药中的特异表达 | 第38-39页 |
| 2．5 Barnase嵌合基因表达的高温不稳定性 | 第39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| 参考文献： | 第41-43页 |
| 第三章 棉花花粉特异基因5'调控区的功能研究 | 第43-56页 |
| 1 材料与方法 | 第43-47页 |
| 1．1 菌株和载体 | 第43-44页 |
| 1．2 材料 | 第44页 |
| 1．3 PCR引物 | 第44页 |
| 1．4 启动子的克隆与表达载体构建 | 第44-45页 |
| 1．5 GUS基因瞬时表达活性的检测 | 第45-46页 |
| 1．6 烟草的遗传转化 | 第46页 |
| 1．7 转化子的分子生物学鉴定 | 第46页 |
| 1．8 转基因烟草的生物学鉴定 | 第46-47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-52页 |
| 2．1 G9启动子的序列分析 | 第47-49页 |
| 2．2 pDGG和pCGG重组载体的获得 | 第49-50页 |
| 2．3 G9-GUS融合基因的瞬时表达 | 第50-51页 |
| 2．4 G9-GUS融合基因的定位表达及转基因烟草的获得 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-56页 |
| 第四章 核糖核酸酶抑制蛋白的表达及其在转基因棉花筛选中的应用 | 第56-81页 |
| 前言 | 第56-68页 |
| 1 重组蛋白的表达系统的选择 | 第56-61页 |
| 1．1 几种蛋白表达系统和表达形式的介绍 | 第56-57页 |
| 1．2 大肠杆菌的表达系统和表达形式 | 第57-61页 |
| 1．2．1 包含体的形成 | 第58-59页 |
| 1．2．2 共表达分子伴侣 | 第59页 |
| 1．2．3 以融合形式表达重组蛋白 | 第59-60页 |
| 1．2．4 寡聚蛋白的重组 | 第60-61页 |
| 2． 利用pET30（A）融合表达体系表达BARSTAR蛋白 | 第61-63页 |
| 2．1 大肠杆菌pET30（a）融合表达体系 | 第61-62页 |
| 2．2 Barstar蛋白的性质和用途 | 第62-63页 |
| 3 重组蛋白的纯化 | 第63-68页 |
| 3．1 细胞的破碎 | 第63页 |
| 3．2 重组蛋白的纯化 | 第63-68页 |
| 3．2．1 能用作纯化依据的蛋白质的性质 | 第63-64页 |
| 3．2．2 分离方法的类型 | 第64页 |
| 3．2．3 柱层析技术 | 第64-68页 |
| 实验部分 | 第68-79页 |
| 1 材料和方法 | 第69-71页 |
| 1．1 质粒和受体菌 | 第69页 |
| 1．2 酶和主要生化试剂 | 第69页 |
| 1．3 Barstar基因的克隆 | 第69页 |
| 1．4 Barstar融合蛋白的表达与纯化 | 第69-70页 |
| 1．5 Barstar多克隆抗体的制备与效价分析 | 第70页 |
| 1．6 转基因植株Barstar蛋白的ELISA检测 | 第70-71页 |
| 1．7 转基因植株Barstar/Barnase蛋白的Western blot检测 | 第71页 |
| 2 结果与讨论 | 第71-79页 |
| 2．1 Barstar的序列分析与克隆鉴定 | 第71-72页 |
| 2．2 Barstar融合蛋白的高效可溶性表达 | 第72-76页 |
| 2．2．1 Barstar蛋白融合表达的优点 | 第72-75页 |
| 2．2．2 包含体向可溶性蛋白表达形式的转变 | 第75-76页 |
| 2．3 Barstar多克隆抗体的鉴定 | 第76页 |
| 2．4 转基因棉花中Barstar蛋白水平检测 | 第76-79页 |
| 2．4．1 ELISA | 第76-77页 |
| 2．4．2 Western blot | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-81页 |
| 第五章 G9-BARNASE引起的隐性核雄性不育及保持系植物表达载体的构建 | 第81-98页 |
| 1 材料与方法 | 第83-90页 |
| 1．1 菌株和载体 | 第83页 |
| 1．2 植物材料 | 第83-84页 |
| 1．3 PCR反应鉴定转基因植株 | 第84页 |
| 1．4 PCR反应克隆三价启动子和共转化植株的鉴定 | 第84页 |
| 1．5 隐性核不育植物表达载体（pCGN）的构建 | 第84-85页 |
| 1．6 三价超启动子恢复基因克隆载体的构建 | 第85-87页 |
| 1．7 保持系植物表达载体的构建 | 第87-88页 |
| 1．8 农杆菌pCGN介导的烟草遗传转化 | 第88-89页 |
| 1．9 农杆菌pCNS和pTN共同介导的烟草遗传转化 | 第89页 |
| 1．10 pCGN转化子的分子生物学鉴定 | 第89页 |
| 1．11 共转化转化子的分子生物学鉴定 | 第89页 |
| 1．12 转基因烟草的生物学鉴定 | 第89-90页 |
| 2 结果与分析 | 第90-95页 |
| 2．1 pCGN重组克隆的获得 | 第90页 |
| 2．2 G9-Barnase融合基因的定位表达及转基因烟草的获得 | 第90-93页 |
| 2．2．1 转基因烟草的筛选和鉴定 | 第90-92页 |
| 2．2．2 G9-Barnase融合基因在花粉中的特异表达 | 第92-93页 |
| 2．3 保持系植物表达载体pCNS的获得及转基因烟草的获得 | 第93-95页 |
| 2．3．1 pCNS重组克隆的酶切鉴定 | 第93-94页 |
| 2．3．2 pTN和pCNS共转化烟草的获得 | 第94-95页 |
| 3 讨论 | 第95-97页 |
| 参 考 文 献 | 第97-98页 |
| 第六章 实验技术和方法汇总 | 第98-122页 |
| 一． 烟草（NICOTIANA TABACCUM）、棉花（GOSSYPIUM SPP）、菌种、质粒、分子标记和试剂 | 第98-99页 |
| 二． 质粒的提取 | 第99-100页 |
| 三． 质粒的酶切和连接方法 | 第100-101页 |
| 四． 核酸的琼脂糖凝胶电泳及DNA片段回收 | 第101-102页 |
| 五． 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第102-105页 |
| 六． 农杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第105-106页 |
| 七． 三亲交配转化农杆菌 | 第106页 |
| 八． 克隆的筛选 | 第106-107页 |
| 九． 植物转化（叶盘法）及转基因植株管理 | 第107页 |
| 十． 植物基因组DNA的提取 | 第107-110页 |
| 十一． SOUTHERN BLOTTING | 第110-111页 |
| 十二． ELISA分析 | 第111-112页 |
| 十三． 超声裂解细胞壁 | 第112-113页 |
| 十四． 亲和层析 | 第113-114页 |
| 十五． SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第114-116页 |
| 十六． WESTERN BLOTTING分析 | 第116-117页 |
| 十七． 动物免疫血清制备 | 第117-118页 |
| 十八． 基因枪转化法 | 第118页 |
| 十九． GUS基因组织化学染色法 | 第118-119页 |
| 二十． ALEXENDER花粉染色法 | 第119-120页 |
| 二十一． 细菌基因组DNA提取 | 第120-121页 |
| 参 考 文 献 | 第121-122页 |
| 结论 | 第122-124页 |
| 创 新 点 | 第124-126页 |
| 致 谢 | 第126-127页 |
