| 摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-14页 |
| 第一章 综述 | 第14-27页 |
| ·乙醛酸的性质及用途 | 第14页 |
| ·乙醛酸的化学合成进展 | 第14-16页 |
| ·乙二醛氧化法 | 第14-15页 |
| ·顺酐臭氧氧化法 | 第15页 |
| ·草酸电解还原法 | 第15-16页 |
| ·乙醇酸无机物催化氧化法 | 第16页 |
| ·乙醛酸的生物法合成进展 | 第16-20页 |
| ·乙醇酸氧化酶的性质 | 第16-18页 |
| ·乙醇酸氧化酶催化作用机理 | 第18页 |
| ·酶法生产乙醛酸 | 第18-19页 |
| ·微生物法生产乙醛酸 | 第19-20页 |
| ·乙醇酸氧化酶的克隆表达 | 第20-22页 |
| ·用Escherichia.coli表达乙醇酸氧化酶 | 第20页 |
| ·用Saccharomyces cerevisiae表达乙醇酸氧化酶 | 第20-21页 |
| ·用Asperigillus nidulans表达乙醇酸氧化酶 | 第21页 |
| ·用Hansenula polymorpha表达乙醇酸氧化酶 | 第21页 |
| ·用Pichia pastoris表达乙醇酸氧化酶 | 第21-22页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第22-25页 |
| ·毕赤酵母表达外源蛋白的优点 | 第22页 |
| ·毕赤酵母生物学特性 | 第22-23页 |
| ·毕赤酵母表达体系的载体类型 | 第23页 |
| ·外源基因的整合方式 | 第23-24页 |
| ·影响外源蛋白高效表达的因素 | 第24-25页 |
| ·毕赤酵母碳源控制策略 | 第25-26页 |
| ·本课题的研究思路和目的 | 第26-27页 |
| 第二章 乙醇酸氧化酶表达载体的构建与鉴定 | 第27-45页 |
| ·前言 | 第27页 |
| ·实验材料与仪器 | 第27-30页 |
| ·主要仪器 | 第27-28页 |
| ·主要试剂 | 第28-29页 |
| ·菌株和质粒 | 第29页 |
| ·培养基和常用溶液 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-37页 |
| ·总RNA的提取 | 第30页 |
| ·RT-PCR反应 | 第30-32页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第32-33页 |
| ·琼脂糖凝胶中DNA片段的回收 | 第33页 |
| ·酶切反应 | 第33-34页 |
| ·酶切产物的回收 | 第34-35页 |
| ·目的片断和pA0815载体的连接反应 | 第35页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| ·细菌的转化 | 第36页 |
| ·菌落PCR | 第36-37页 |
| ·重组质粒的提取 | 第37页 |
| ·结果与讨论 | 第37-44页 |
| ·重组质粒构建示意图 | 第38页 |
| ·目的基因的RT-PCR扩增及鉴定 | 第38-39页 |
| ·RT-PCR产物回收 | 第39页 |
| ·重组质粒PCR鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·序列测定及同源性分析 | 第41-44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 第三章 乙醇酸氧化酶在毕赤酵母中的表达 | 第45-58页 |
| ·前言 | 第45页 |
| ·实验材料与仪器 | 第45-47页 |
| ·主要仪器 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45-46页 |
| ·常用培养基和溶液 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-51页 |
| ·重组质粒的线性化 | 第47-48页 |
| ·感受态毕赤酵母的制备 | 第48页 |
| ·毕赤酵母的电转化 | 第48页 |
| ·转化子的表型鉴定 | 第48-49页 |
| ·重组毕赤酵母的培养表达 | 第49页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第49-50页 |
| ·发酵条件的优化 | 第50-51页 |
| ·生物量测定 | 第51页 |
| ·酶活测定 | 第51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-57页 |
| ·电转化 | 第51-52页 |
| ·转化子的显型鉴定 | 第52页 |
| ·乙醇酸氧化酶的表达 | 第52-53页 |
| ·发酵条件的优化 | 第53-57页 |
| ·小结 | 第57-58页 |
| 第四章 重组毕赤酵母合成乙醛酸的研究 | 第58-67页 |
| ·前言 | 第58页 |
| ·实验材料与仪器 | 第58-59页 |
| ·主要仪器 | 第58页 |
| ·主要试剂 | 第58-59页 |
| ·实验方法 | 第59-61页 |
| ·重组酵母菌的渗透处理 | 第59页 |
| ·反应条件的优化 | 第59-60页 |
| ·产品分析 | 第60-61页 |
| ·结果与讨论 | 第61-66页 |
| ·乙醇酸、乙醛酸色谱分离分析 | 第61-62页 |
| ·反应条件对乙醛酸合成的影响 | 第62-66页 |
| ·小结 | 第66-67页 |
| 第五章 结论与展望 | 第67-69页 |
| 1.结论 | 第67页 |
| 2.展望 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 研究生期间已发表和待发表的学术论文 | 第74页 |
