| 缩写词 | 第1-9页 |
| 缩写词（续） | 第9-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-24页 |
| 1 中国水仙概况 | 第12页 |
| 2 中国水仙组织培养研究进展 | 第12-15页 |
| ·直接诱导不定芽发生途径 | 第13-14页 |
| ·愈伤组织间接诱导发生途径 | 第14-15页 |
| 3 农杆菌介导单子叶植物遗传转化的研究 | 第15-16页 |
| 4 中国水仙遗传转化研究进展 | 第16-22页 |
| ·花卉花色基因工程研究进展 | 第16-21页 |
| ·类黄酮色素生物合成相关基因的研究进展 | 第17-18页 |
| ·类胡萝卜素生物合成相关基因的研究进展 | 第18-21页 |
| ·LYCB 基因研究进展 | 第21页 |
| ·中国水仙花色基因工程研究进展 | 第21-22页 |
| 5 本研究意义及内容 | 第22-24页 |
| ·研究意义 | 第22-23页 |
| ·研究内容 | 第23-24页 |
| 第二章 以 hpt 为选择标记基因中国水仙遗传转化体系的建立 | 第24-45页 |
| 1 试验材料 | 第24-27页 |
| ·植物材料 | 第24页 |
| ·中国水仙花葶消毒与接种 | 第24页 |
| ·根癌农杆菌和质粒 | 第24-26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·培养基和培养条件 | 第26-27页 |
| 2 试验方法 | 第27-34页 |
| ·表达载体 pC1301 转化根癌农杆菌 | 第27-29页 |
| ·pC1301 菌液培养及质粒提取 | 第27页 |
| ·根癌农杆菌 EHA105 的培养 | 第27页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞制备与转化 | 第27-28页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第27页 |
| ·转化 | 第27-28页 |
| ·pC1301 质粒导入 EHA105 的鉴定 | 第28-29页 |
| ·PCR 检测鉴定 | 第28页 |
| ·酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·中国水仙花葶的潮霉素敏感性试验 | 第29页 |
| ·以 hpt 为选择标记基因中国水仙遗传转化体系的建立 | 第29-34页 |
| ·E/pC1301 农杆菌侵染液的制备 | 第29页 |
| ·中国水仙花葶转化基本步骤 | 第29-30页 |
| ·中国水仙花葶遗传转化条件的优化 | 第30-31页 |
| ·外植体预培养时间对转化的影响 | 第30页 |
| ·不同 OD600 值对花葶转化的影响 | 第30页 |
| ·不同侵染时间对花葶转化的影响 | 第30页 |
| ·乙酰丁香酮（AS）浓度对转化的影响 | 第30页 |
| ·不同潮霉素（Hyg）浓度对转化的影响 | 第30-31页 |
| ·不同筛选方式对转化的影响 | 第31页 |
| ·筛选培养基中不同激素对转化的影响 | 第31页 |
| ·农杆菌侵染后水仙花葶 GUS 瞬时表达检测 | 第31页 |
| ·抗性植株的培养 | 第31页 |
| ·抗性芽的筛选诱导培养 | 第31页 |
| ·抗性芽的增殖培养 | 第31页 |
| ·壮苗培养和生根培养 | 第31页 |
| ·抗性植株叶片 GUS 组织化学法检测 | 第31-32页 |
| ·抗性植株的 PCR 检测鉴定 | 第32-33页 |
| ·pC1301 质粒提取 | 第32页 |
| ·抗性植株及非转基因植株基因组总 DNA 的提取及纯化 | 第32页 |
| ·GUS 基因的 PCR 检测 | 第32-33页 |
| ·转化的数据统计及处理 | 第33页 |
| ·移栽 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-41页 |
| ·EHA105/pC1301 的鉴定结果 | 第34-35页 |
| ·中国水仙花葶的潮霉素敏感性试验 | 第35页 |
| ·以 hpt 为选择标记基因中国水仙遗传转化体系的优化 | 第35-39页 |
| ·外植体预培养时间对花葶转化的影响 | 第35-36页 |
| ·不同 OD600值对花葶转化的影响 | 第36页 |
| ·不同侵染时间对花葶转化的影响 | 第36-37页 |
| ·乙酰丁香酮（AS）浓度对花葶转化的影响 | 第37页 |
| ·不同潮霉素浓度对花葶转化的影响 | 第37-38页 |
| ·不同筛选方式对花葶转化的影响 | 第38页 |
| ·筛选培养基中不同激素对花葶转化的影响 | 第38-39页 |
| ·农杆菌侵染后水仙花葶 GUS 瞬时表达检测 | 第39页 |
| ·抗性植株叶片 GUS 组织化学法检测结果 | 第39页 |
| ·抗性植株的 PCR 检测鉴定 | 第39-40页 |
| ·抗性植株总 DNA 的提取 | 第39-40页 |
| ·抗性植株 PCR 鉴定 | 第40页 |
| ·抗性植株的培养和移栽 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-45页 |
| ·以水仙花葶为受体材料的中国水仙遗传转化体系 | 第41页 |
| ·潮霉素和筛选方式对遗传转化中的作用 | 第41-43页 |
| ·预培养对农杆菌介导的水仙花葶转化中的作用 | 第43页 |
| ·乙酰丁香酮（AS）对植物遗传转化的作用 | 第43-44页 |
| ·转基因植株移栽 | 第44-45页 |
| 第三章 LYCB 植物表达载体的构建及转化中国水仙研究 | 第45-56页 |
| 1 试验材料 | 第45-46页 |
| ·植物材料 | 第45页 |
| ·载体和菌株 | 第45页 |
| ·试剂与仪器 | 第45-46页 |
| ·培养基和培养条件 | 第46页 |
| 2 试验方法 | 第46-50页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第46-49页 |
| ·中国水仙花苞总 RNA 提取 | 第46页 |
| ·引物设计与合成 | 第46页 |
| ·带酶切位点的 LYCB 基因 cDNA 全长序列克隆和目的片段回收 | 第46-47页 |
| ·目的片段与载体连接 | 第47页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备和转化 | 第47-48页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第47页 |
| ·转化 | 第47-48页 |
| ·pCAMBIA1301 质粒提取 | 第48页 |
| ·质粒酶切及目的片段回收 | 第48页 |
| ·质粒连接反应 | 第48-49页 |
| ·连接产物的转化及筛选 | 第49页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第49页 |
| ·LYCB 基因植物表达载体构建路线 | 第49页 |
| ·LYCB 基因转化中国水仙研究 | 第49-50页 |
| ·重组质粒 pC1301-LYCB 转化农杆菌 EHA10538 | 第49页 |
| ·重组质粒 pC1301-LYCB 转化农杆菌 EHA105 的鉴定 | 第49-50页 |
| ·PCR 鉴定 | 第49页 |
| ·酶切鉴定 | 第49-50页 |
| ·转化程序 | 第50页 |
| ·数据统计 | 第50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-54页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第50-53页 |
| ·中国水仙花苞总 RNA 提取结果 | 第50-51页 |
| ·带有 BglⅡ和 Bst EⅡ酶切位点的引物扩增 LYCB 基因全长克隆 | 第51页 |
| ·pCAMBIA1301 质粒和 pMD18-T-LYCB 双酶切结果 | 第51-52页 |
| ·重组表达载体 pC1301-LYCB 的 PCR 和酶切鉴定结果 | 第52-53页 |
| ·LYCB 基因转化中国水仙研究 | 第53-54页 |
| ·EHA105/pC1301-LYCB 工程菌的制备 | 第53-54页 |
| ·EHA105/pC1301-LYCB 转化中国水仙 | 第54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 附录：图版和图版说明 | 第62-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
