| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-36页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的生物学特性 | 第14-15页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白 | 第15-26页 |
| ·杀虫晶体蛋白基因 | 第15-16页 |
| ·杀虫晶体蛋白的命名与分类研究 | 第16-19页 |
| ·杀虫晶体蛋白的结构和功能 | 第19-26页 |
| ·定点突变技术及其发展 | 第26-27页 |
| ·杀虫晶体蛋白定点突变的研究进展 | 第27-35页 |
| ·结构域Ⅰ的突变 | 第27-29页 |
| ·结构域Ⅱ的突变 | 第29-31页 |
| ·结构域Ⅲ的突变 | 第31-32页 |
| ·定点突变增强 Bt 蛋白毒力的进展 | 第32-35页 |
| ·立题依据和意义 | 第35-36页 |
| 第二章 Bt cry1Ac 基因的克隆和表达 | 第36-56页 |
| ·材料和方法 | 第36-46页 |
| ·材料 | 第36-39页 |
| ·试验方法 | 第39-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-54页 |
| ·Bt4.0178菌株质粒的提取及 cry1Ac 基因的鉴定 | 第46-47页 |
| ·全长序列的 cry1Ac 基因的 PCR 扩增 | 第47页 |
| ·中间重组质粒 pUAc19的构建 | 第47-50页 |
| ·表达载体 pHTAc35的构建 | 第50-52页 |
| ·表达载体 pHTAc35电转化无晶体突变株 cry~-B 和鉴定 | 第52-53页 |
| ·Cry1Ac 的表达 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 第三章 Cry1Ac5蛋白的分析和突变位点确定 | 第56-69页 |
| ·材料和方法 | 第56-58页 |
| ·目标蛋白序列 | 第56页 |
| ·软件和数据库 | 第56-57页 |
| ·方法 | 第57-58页 |
| ·结果与分析 | 第58-66页 |
| ·Cry1Ac5与其它 Cry1A 蛋白的比较 | 第58-62页 |
| ·Cry1Ac5蛋白的结构域Ⅲ的特点 | 第62-64页 |
| ·β18-β19 loop 在 Cry1Ac5蛋白三维结构中的位置 | 第64-65页 |
| ·β18-β19 loop 的特点 | 第65页 |
| ·Cry1Ac5与其它 Cry 蛋白的β18-β19 loop 比较 | 第65-66页 |
| ·讨论 | 第66-68页 |
| ·小结 | 第68-69页 |
| 第四章 Cry1Ac5蛋白β18-β19 loop 丙氨酸扫描突变 | 第69-88页 |
| ·材料与方法 | 第69-73页 |
| ·材料 | 第69-71页 |
| ·方法 | 第71-73页 |
| ·结果与分析 | 第73-82页 |
| ·Cry1Ac 蛋白的丙氨酸扫描突变 | 第73-76页 |
| ·突变子表达载体的构建 | 第76-77页 |
| ·突变子在 cry~-B 宿主菌中的表达 | 第77-79页 |
| ·突变株生物活性测定分析 | 第79-80页 |
| ·软件分析 | 第80-82页 |
| ·讨论 | 第82-86页 |
| ·环形突变法定点突变的原理和关键点 | 第82-84页 |
| ·模板选择和突变效果 | 第84-85页 |
| ·突变前后的变化 | 第85-86页 |
| ·小结 | 第86-88页 |
| 第五章 N546的定点突变及其功能分析 | 第88-117页 |
| ·材料与方法 | 第88-96页 |
| ·材料 | 第88-91页 |
| ·方法 | 第91-96页 |
| ·结果与分析 | 第96-113页 |
| ·突变子的测序结果分析 | 第96-100页 |
| ·突变子 SDS-PAGE 分析 | 第100页 |
| ·生测分析 | 第100-102页 |
| ·毒素蛋白的纯化 | 第102-105页 |
| ·N546在 Cry1Ac5蛋白活性发挥中的作用 | 第105-110页 |
| ·突变前后三维结构的变化 | 第110-113页 |
| ·讨论 | 第113-115页 |
| ·N546在 Cry1Ac5蛋白中的作用 | 第113-114页 |
| ·N546A 突变子增强蛋白活性的机理 | 第114页 |
| ·N546突变影响蛋白功能变化的机理 | 第114-115页 |
| ·小结 | 第115-117页 |
| 第六章 W544的定点突变及其功能分析 | 第117-132页 |
| ·材料和方法 | 第117-119页 |
| ·材料 | 第117-118页 |
| ·方法 | 第118-119页 |
| ·结果与分析 | 第119-128页 |
| ·W544在 Cry1Ac 三维结构中的作用 | 第119-120页 |
| ·W544突变子的测序结果 | 第120-121页 |
| ·W544突变子的镜检和 SDS-PAGE 分析 | 第121-122页 |
| ·毒力生测 | 第122-123页 |
| ·稳定性分析 | 第123-126页 |
| ·突变前后结构变化比较 | 第126-127页 |
| ·W544F 与野生 Cry1Ac 晶体的形态比较 | 第127-128页 |
| ·W544F 紫外线处理后的生测分析 | 第128页 |
| ·讨论 | 第128-131页 |
| ·W544在 Cry1Ac 蛋白中作用 | 第128-129页 |
| ·W544突变蛋白稳定性与杀虫活性之间的联系 | 第129-130页 |
| ·W544F 增强蛋白稳定性的意义 | 第130-131页 |
| ·小结 | 第131-132页 |
| 第七章 主要结论和今后的研究设想 | 第132-136页 |
| ·本研究的主要结论 | 第132-133页 |
| ·本研究的创新点和科学意义 | 第133页 |
| ·今后的研究设想 | 第133-136页 |
| 参考文献 | 第136-156页 |
| 攻读博士学位期间撰写和发表的论文 | 第156-158页 |
| 致谢 | 第158-160页 |
