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ALV-J和REV的分离及蛋鸡群白血病J亚群病毒的序列分析和致病性试验

中文摘要第1-13页
Abstract第13-15页
引言第15-29页
 1 ALV-J 和 REV 的基本概况第15-16页
 2 ALV-J 和REV 的分子病毒学特性第16-20页
   ·ALV-J 的分子病毒学特性第16-18页
   ·REV 的分子病毒学特性第18-20页
 3 ALV-J 和REV 的致病性第20-22页
   ·ALV-J 的致病性第20-21页
   ·REV 的致病性第21-22页
 4 ALV-J 和 REV 的免疫抑制作用第22-23页
   ·ALV-J 的免疫抑制作用第23页
   ·REV 的免疫抑制作用第23页
 5 ALV-J 和REV 的传播方式第23-24页
   ·ALV-J 的传播方式第23页
   ·REV 的传播方式第23-24页
 6 ALV-J 和REV 的鉴别与诊断第24-26页
   ·ALV-J 的鉴别与诊断第24-25页
   ·REV 的诊断和鉴别第25-26页
 7 ALV-J 和REV 囊膜糖蛋白基因的变异第26-27页
 8 ALV-J 和REV 的预防和控制第27-28页
 9 本研究的目的及意义第28-29页
研究内容第29-70页
 试验一中国蛋鸡群ALV-J 的分离鉴定及分子进化分析第29-57页
  1 材料与方法第29-41页
   ·病料的来源第29页
   ·单克隆抗体第29页
   ·异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗鼠和兔抗鸡二抗第29页
   ·克隆载体和宿主菌第29页
   ·分子生物学试剂第29页
   ·病料的病理切片HE 染色检查和石蜡切片的免疫酶第29-31页
     ·病理切片的制作方法第29-30页
     ·病理切片HE 染色过程第30页
     ·石蜡切片的免疫酶染色程序第30-31页
     ·石蜡切片的免疫酶结果判定第31页
   ·病毒的实验室分离第31-32页
     ·鸡胚成纤维细胞(CEF)的制备第31页
     ·病毒分离第31-32页
   ·病毒的间接免疫荧光试验(IFA)鉴定第32页
   ·病毒的PCR 鉴定第32-33页
   ·env 基因的扩增、克隆与测序第33-38页
     ·病毒模板的制备第33页
     ·env 基因的扩增第33-34页
     ·env 基因PCR 产物DNA 电泳第34页
     ·PCR 产物的回收与定量第34-35页
     ·DNA 的连接反应第35-36页
     ·TG1 大肠杆菌感受态细胞的制备第36页
     ·连接产物的转化第36-37页
     ·质粒DNA 的提取第37-38页
     ·重组质粒DNA 的酶切鉴定第38页
     ·阳性克隆序列测定第38页
   ·分离株gp85 和gp37 的氨基酸序列及3′Ter 核苷酸序列的比较第38-39页
   ·ALV-J SD07LK1 株和NX0101 株对海兰灰蛋鸡的致病性试验第39-41页
     ·病毒第39页
     ·实验动物第39页
     ·免疫动物用疫苗第39页
     ·Reed-Muench 氏法测定病毒的TCID50 方法第39-40页
     ·1 日龄商品代海兰灰蛋鸡的人工感染第40页
     ·ND、AIV 灭活疫苗的免疫及HI 抗体滴度的测定第40-41页
  2 结果第41-54页
   ·病理切片检测结果第41-42页
   ·免疫酶染色结果第42-44页
   ·IFA 检测结果第44页
   ·env 基因PCR 扩增结果第44-45页
   ·env 基因重组质粒的双酶切鉴定结果第45页
   ·SD07LK1 和SD07LK2 株gp85 基因编码的氨基酸同源性比较第45-47页
   ·SD07LK1 和SD07LK2 株gp37 基因编码的氨基酸同源性比较第47-48页
   ·SD07LK1 和SD07LK2 株与其他毒株的3′Ter 序列比较第48-51页
   ·SD07LK1 株和NX0101 株对海兰灰蛋鸡致病性试验结果第51-54页
  3 讨论第54-56页
  4 结论第56-57页
 试验二 间接免疫荧光方法检测肿瘤疑似病料中的ALV-J 和REV第57-63页
  1 材料与方法第57-59页
   ·病料来源第57页
   ·鸡胚成纤维细胞(CEF)的制备第57-58页
   ·单克隆抗体第58页
   ·异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗鼠二抗第58页
   ·病毒分离与复制第58-59页
     ·血液中分离ALV-J 或REV第58页
     ·病料组织中分离ALV-J 或REV第58-59页
   ·间接免疫荧光试验(IFA)第59页
  2 结果第59-61页
   ·用ALV-J 特异性单克隆抗体IFA 检测结果第59-60页
   ·用REV 特异性单克隆抗体IFA 检测结果第60-61页
  3 讨论第61-62页
  4 结论第62-63页
 实验三 从蛋鸡群患有腺胃炎的病鸡中分离出REV第63-70页
  1 材料与方法第63-66页
   ·病料来源第63页
   ·鸡胚成纤维细胞(CEF)的制备第63页
   ·单克隆抗体第63页
   ·异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗鼠二抗第63-64页
   ·引物第64页
   ·病毒分离鉴定第64-66页
     ·病毒分离与复制第64页
     ·间接免疫荧光试验(IFA)第64-65页
     ·细胞DNA 的提取第65页
     ·REV 病毒 env 基因 402bp 片段条带扩增第65-66页
     ·PCR 产物DNA 电泳第66页
  2 结果第66-68页
   ·PCR 扩增结果第66-67页
   ·用REV 特异性单克隆抗体IFA 检测结果第67-68页
  3 讨论第68页
  4 结论第68-70页
参考文献第70-80页
致谢第80-81页
攻读硕士研究生期间的论文情况第81-82页
个人简历第82页

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