| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-15页 |
| 目录 | 第15-20页 |
| 第一章 前言 | 第20-46页 |
| 1. 人巨细胞病毒简介 | 第20页 |
| 2. 人巨细胞病毒结构 | 第20-23页 |
| 3. 人巨细胞病毒基因组 | 第23-25页 |
| 4. 人巨细胞病毒临床分离株与实验病毒株 | 第25-26页 |
| 5. 人巨细胞病毒生活周期及其基因表达 | 第26-42页 |
| ·人巨细胞病毒容许细胞及其体外生长 | 第26页 |
| ·人巨细胞病毒与宿主细胞连接及其穿入 | 第26-28页 |
| ·人巨细胞病毒包膜化、膜的融合 | 第28-33页 |
| ·人巨细胞病毒源基因表达的调节 | 第29页 |
| ·即刻早期基因表达蛋白的特征与功能 | 第29-31页 |
| ·早期基因表达蛋白的特征与功能 | 第31-33页 |
| ·人巨细胞病毒DNA复制 | 第33-34页 |
| ·人巨细胞病毒核衣壳形成 | 第34-39页 |
| ·皮层化与包膜化 | 第39-40页 |
| ·HCMV的DNA复制 | 第40-42页 |
| ·病毒的组装成数和释放 | 第42页 |
| 6. 人巨细胞病毒的UL49基因简介与研究现状 | 第42-44页 |
| 7. 人巨细胞病毒UL49基因功能研究设想 | 第44-45页 |
| 8. 课题研究总体思路图 | 第45-46页 |
| 第二章 实验材料、主要仪器与试剂或试剂配制 | 第46-57页 |
| 1. 实验材料、主要仪器与试剂 | 第46-51页 |
| ·主要仪器 | 第46-47页 |
| ·菌种、病毒 | 第47-48页 |
| ·细胞 | 第48页 |
| ·质粒载体 | 第48-49页 |
| ·抗体 | 第49页 |
| ·酶 | 第49页 |
| ·试剂盒 | 第49-50页 |
| ·抗生素 | 第50页 |
| ·常用试剂 | 第50-51页 |
| 2. 试剂配制 | 第51-57页 |
| ·培养基 | 第51页 |
| ·酵母双杂交实验所需试剂 | 第51-52页 |
| ·凝胶电泳所需溶液 | 第52-53页 |
| ·Western blotting溶液配制 | 第53-54页 |
| ·免疫荧光实验试剂 | 第54页 |
| ·抗生素的配置 | 第54-55页 |
| ·缓冲液 | 第55页 |
| ·DH5α超级感受态制备试剂 | 第55-56页 |
| ·其他试剂 | 第56-57页 |
| 第三章 UL49 ORF转录图谱及其表达产物功能预测 | 第57-73页 |
| 1. 前言 | 第57-58页 |
| 2. 实验方法 | 第58-65页 |
| ·病毒培养与鉴定 | 第58-59页 |
| ·HCMVA总RNA提取 | 第59页 |
| ·UL49基因的5’末端扩增(BD SMART~(TM) RACE cDNA Amplification Kit) | 第59-63页 |
| ·利用BD SMART~(TM) RACE cDNA Amplification Kit扩增UL49基因3’末端 | 第63-64页 |
| ·U149基因全长cDNA序列扩增、克隆和序列分析 | 第64-65页 |
| 3 结果 | 第65-69页 |
| ·人巨细胞病毒体外感染后出现细胞病变效应、具备病毒基因遗传标志 | 第65-66页 |
| ·UL49基因转录起始序列符合GenBank的UL49 ORF5'端序列 | 第66-67页 |
| ·UL49基因转录终止序列符合GenBank的UL49 ORF3’端序列 | 第67-68页 |
| ·确定人臣细胞病毒UL49基因全长cDNA序列 | 第68-69页 |
| 4 讨论 | 第69-73页 |
| 第四章 人巨细胞病毒UL49 ORF蛋白表达分析 | 第73-95页 |
| 1. 前言 | 第73页 |
| 2. 实验方法 | 第73-85页 |
| ·HCMV UL49编码蛋白的B细胞表位预测 | 第73-74页 |
| ·人巨细胞病毒UL49开放阅读框编码蛋白多克隆抗体制备 | 第74-76页 |
| ·UL49编码蛋白多克隆抗体特异性 | 第76-85页 |
| 3 结果 | 第85-91页 |
| ·制备兔anti-HCMV pUL49多克隆抗体 | 第85-89页 |
| ·兔anti-HCMV pUL49抗血清特异性 | 第89-91页 |
| 4 讨论 | 第91-95页 |
| 第五章 pUL49蛋白分子结构与蛋白特性 | 第95-109页 |
| 1. 前言 | 第95页 |
| 2. 实验方法 | 第95-100页 |
| ·BAC质粒的抽提与纯化 | 第95页 |
| ·pcDNA3.1(+)-UL82的构建 | 第95-96页 |
| ·BAC与pcDNA3.1(+)-UL82共电转细胞 | 第96页 |
| ·病毒培养 | 第96页 |
| ·病毒提取 | 第96页 |
| ·病毒颗粒纯化 | 第96-97页 |
| ·病毒颗粒预处理 | 第97页 |
| ·WB | 第97-100页 |
| 3. 结果 | 第100-106页 |
| ·抽提的Towne-BAC质粒具备Towne-株的遗传基因特征 | 第100-101页 |
| ·构建pcDNA3.1(+)-UL82 | 第101-102页 |
| ·BAC与pcDNA3.1(+)-UL82共电转细胞出现病变效应 | 第102页 |
| ·重组Towne病毒具备Towne-株的遗传基因特征 | 第102-104页 |
| ·人巨细胞病毒UL49基因表达蛋白是一个早期β2亚型蛋白 | 第104页 |
| ·人巨细胞病毒UL49基因表达蛋白是一个病毒颗粒结构蛋白 | 第104-106页 |
| 4 讨论 | 第106-109页 |
| 第六章 UL49基因表达产物在病毒感染复制中的生物学功能 | 第109-126页 |
| 1. 前言 | 第109页 |
| 2. 实验方法 | 第109-114页 |
| ·BAC质粒的抽提与纯化(低拷贝大量抽提) | 第109-110页 |
| ·Towne-BAC、delUL49-Towne-BAC的质粒DNA鉴定 | 第110-111页 |
| ·Towne-BAC、delUL49-Towne-BAC的质粒DNA与pcDNA3.1(+)-UL82-myc质粒共转染 | 第111-112页 |
| ·病毒空斑形成试验 | 第112页 |
| ·病毒的培养 | 第112页 |
| ·pcDNA3.1(+)-UL49-myc的真核细胞定位 | 第112-113页 |
| ·用anti-pUL49预处理的RV-Towne感染HFF | 第113页 |
| ·用anti-pUL49预处理的RV-Towne感染HFF | 第113页 |
| ·RV侵入实验 | 第113-114页 |
| 3. 结果 | 第114-121页 |
| ·Towne-BAC、delUL49-Towne-BAC的质粒DNA具备相应遗传基因特征 | 第114-116页 |
| ·delUL49Towne BAC病毒无法包装成功 | 第116页 |
| ·delUL49Towne BAC病毒在HFF[pUL49]中的转染获得部分包装 | 第116-117页 |
| ·UL49基因表达产物在病毒感染过程中的亚细胞定位 | 第117-118页 |
| ·pUL49与其他HCMV典型结构蛋白在HFF[RV-Towne]细胞中共定位 | 第118-120页 |
| ·用anti-pUL49预处理的RV-Towne在HFF中的生长 | 第120页 |
| ·anti-pUL49预处理的RV-Towne感染HFF初期侵入效应 | 第120-121页 |
| 4. 讨论 | 第121-126页 |
| 第七章 与pUL49互作蛋白的筛选及机制的研究 | 第126-146页 |
| 1. 前言 | 第126页 |
| 2. 实验方法 | 第126-132页 |
| ·诱饵质粒pGBKT7-UL49构建 | 第126-127页 |
| ·pGBKT7-UL49转化酵母AH109 | 第127页 |
| ·酵母质粒抽提 | 第127-128页 |
| ·酵母质粒电转至AH109 | 第128页 |
| ·转化细胞AH109[pGBKT7-UL49]的毒性与自激活 | 第128页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性filter-assay实验 | 第128-129页 |
| ·蛋白印迹(Wstern Blotting)分析AH109[pGBKT7-UL49]的pUL49蛋白表达 | 第129页 |
| ·双杂交阳性克隆的PCR鉴定 | 第129页 |
| ·酶切去除重复片断 | 第129-130页 |
| ·GST-PULLDOWN | 第130-131页 |
| ·HFF[pCDNA3.1(+)-COL3A1/pCDNA3.1(+)-C11ORF17]感染RV-Towne效应 | 第131-132页 |
| 3. 结果 | 第132-141页 |
| ·构建诱饵质粒pGBKT7-UL49 | 第132-133页 |
| ·pGBKT7-UL49转化AH109 | 第133-134页 |
| ·诱饵蛋白对AH109无毒性、自激活 | 第134页 |
| ·pGBKT7-UL49融合蛋白的表达 | 第134-135页 |
| ·人胚肾细胞cDNA文库扩增与鉴定(Li) | 第135页 |
| ·用pGBKT7-UL49从人胚肾细胞cDNA文库中筛选与UL49相互作用的分子 | 第135-136页 |
| ·PCR鉴定SD/-Trp-Leu-His-Ade阳性酵母克隆 | 第136页 |
| ·HaeⅢ酶切鉴定SD/-Trp-Leu-His-Ade阳性酵母克隆细菌质粒 | 第136-137页 |
| ·SD/-Trp-Leu-His-Ade阳性酵母克隆的分析 | 第137页 |
| ·再验证pUL49与筛选阳性蛋白的相互作用 | 第137-138页 |
| ·体外确证筛选的基因编码物与pUL49相互作用 | 第138-140页 |
| ·重组病毒RV-Towne在HFF[pCDNA3.1(+)-COL3A1/pCDNA3.1(+)-C11ORF17]中的生长 | 第140-141页 |
| 4. 讨论 | 第141-146页 |
| 第八章 全文小结与研究展望 | 第146-148页 |
| 参考文献 | 第148-168页 |
| 附录 | 第168-179页 |
| 缩写词中英文对照 | 第179-180页 |
| 在学期间发表论文清单 | 第180-181页 |
| 致谢 | 第181页 |
