缩略语表 | 第1-7页 |
中文摘要 | 第7-9页 |
Abstract | 第9-11页 |
前言 | 第11-12页 |
文献回顾 | 第12-23页 |
正文 | 第23-51页 |
实验材料 | 第23-26页 |
1 菌种,质粒及细胞株 | 第23页 |
2 主要试剂 | 第23-24页 |
3 主要仪器 | 第24-26页 |
实验一 p53基因突变子在HepG2中与hsp70定位关系的研究 | 第26-32页 |
1 试验方法 | 第26-29页 |
·大肠杆菌感受态DH5α的制备及外源DNA 的转化 | 第26-27页 |
·pEGFP-C3-p53(wt;mt)载体构建 | 第27-28页 |
·细胞培养和转染 | 第28-29页 |
·免疫荧光染色 | 第29页 |
2 结果 | 第29-31页 |
·pEGFP-C3-p53 载体的构建与鉴定 | 第29-30页 |
·内源性hsp70 与外源性p53 在HepG2 细胞内的定位 | 第30-31页 |
3 讨论 | 第31-32页 |
实验二 hsp70重组腺病毒载体构建与包装 | 第32-44页 |
1 试验方法 | 第32-39页 |
·感受态BJ5183(已转入pAdeasy 质粒)的制备 | 第32页 |
·pShuttle-CMV-DsRed/hsp70 载体的构建 | 第32-34页 |
·AdEasy~(TM)转移载体对感受态BJ5183 的转化 | 第34页 |
·酚-氯仿裂解法提取重组AdEasy~(TM)质粒 | 第34页 |
·重组AdEasy~(TM)质粒的酶切鉴定 | 第34-35页 |
·AdEasy~(TM)重组子转染QBI-293A 细胞 | 第35-36页 |
·病毒的裂解和扩增 | 第36-37页 |
·hsp70 重组腺病毒颗粒对HepG2 细胞的感染及检测 | 第37-39页 |
2 结果 | 第39-42页 |
·pShuttle-CMV-DsRed/hsp70 载体的构建与鉴定 | 第39页 |
·重组AdEasy~(TM)质粒的酶切鉴定 | 第39-40页 |
·细胞病理效应(CPE) | 第40-41页 |
·hsp70 重组腺病毒感染HepG2 细胞后的检测结果 | 第41-42页 |
3 讨论 | 第42-44页 |
实验三 hsp70慢病毒干涉载体的构建 | 第44-51页 |
1 试验方法 | 第44-47页 |
·干涉载体pSilencer 3.1-H1 neo-shhsp70 的构建与鉴定 | 第44-45页 |
·Hela 细胞培养和转染 | 第45-46页 |
·提取细胞RNA | 第46页 |
·pSilencer 3.1-H1 neo-shhsp70 载体干涉效率的检测 | 第46页 |
·重组慢病毒载体FG12-shhsp70 的构建 | 第46-47页 |
2 结果 | 第47-49页 |
·pSilencer 3.1-H1 neo-shhsp70 的构建与鉴定 | 第47-48页 |
·pSilencer 3.1-H1 neo-shhsp70 载体干涉效率的检测 | 第48页 |
·重组慢病毒载体FG12-shhsp70 的构建 | 第48-49页 |
3 讨论 | 第49-51页 |
小结 | 第51-53页 |
参考文献 | 第53-58页 |
个人简历和研究成果 | 第58-59页 |
致谢 | 第59页 |