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热休克蛋白70与p53相关载体构建及其在HepG2细胞系中共定位关系的研究

缩略语表第1-7页
中文摘要第7-9页
Abstract第9-11页
前言第11-12页
文献回顾第12-23页
正文第23-51页
 实验材料第23-26页
  1 菌种,质粒及细胞株第23页
  2 主要试剂第23-24页
  3 主要仪器第24-26页
 实验一 p53基因突变子在HepG2中与hsp70定位关系的研究第26-32页
  1 试验方法第26-29页
   ·大肠杆菌感受态DH5α的制备及外源DNA 的转化第26-27页
   ·pEGFP-C3-p53(wt;mt)载体构建第27-28页
   ·细胞培养和转染第28-29页
   ·免疫荧光染色第29页
  2 结果第29-31页
   ·pEGFP-C3-p53 载体的构建与鉴定第29-30页
   ·内源性hsp70 与外源性p53 在HepG2 细胞内的定位第30-31页
  3 讨论第31-32页
 实验二 hsp70重组腺病毒载体构建与包装第32-44页
  1 试验方法第32-39页
   ·感受态BJ5183(已转入pAdeasy 质粒)的制备第32页
   ·pShuttle-CMV-DsRed/hsp70 载体的构建第32-34页
   ·AdEasy~(TM)转移载体对感受态BJ5183 的转化第34页
   ·酚-氯仿裂解法提取重组AdEasy~(TM)质粒第34页
   ·重组AdEasy~(TM)质粒的酶切鉴定第34-35页
   ·AdEasy~(TM)重组子转染QBI-293A 细胞第35-36页
   ·病毒的裂解和扩增第36-37页
   ·hsp70 重组腺病毒颗粒对HepG2 细胞的感染及检测第37-39页
  2 结果第39-42页
   ·pShuttle-CMV-DsRed/hsp70 载体的构建与鉴定第39页
   ·重组AdEasy~(TM)质粒的酶切鉴定第39-40页
   ·细胞病理效应(CPE)第40-41页
   ·hsp70 重组腺病毒感染HepG2 细胞后的检测结果第41-42页
  3 讨论第42-44页
 实验三 hsp70慢病毒干涉载体的构建第44-51页
  1 试验方法第44-47页
   ·干涉载体pSilencer 3.1-H1 neo-shhsp70 的构建与鉴定第44-45页
   ·Hela 细胞培养和转染第45-46页
   ·提取细胞RNA第46页
   ·pSilencer 3.1-H1 neo-shhsp70 载体干涉效率的检测第46页
   ·重组慢病毒载体FG12-shhsp70 的构建第46-47页
  2 结果第47-49页
   ·pSilencer 3.1-H1 neo-shhsp70 的构建与鉴定第47-48页
   ·pSilencer 3.1-H1 neo-shhsp70 载体干涉效率的检测第48页
   ·重组慢病毒载体FG12-shhsp70 的构建第48-49页
  3 讨论第49-51页
小结第51-53页
参考文献第53-58页
个人简历和研究成果第58-59页
致谢第59页

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