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研究中枢神经系统损伤后轴突再生和功能恢复的治疗策略

缩略语表第8-12页
中文摘要第12-16页
ABSTRACT第16-19页
前言第20-22页
文献回顾第22-34页
第一部分 OPN/IGF1在PY模型中的作用研究第34-48页
    引言第34-35页
    1 材料第35-36页
        1.1 实验动物第35页
        1.2 所用试剂第35页
        1.3 抗体第35-36页
        1.4 病毒载体第36页
        1.5 实验仪器第36页
    2 方法第36-40页
        2.1 皮层AAV病毒的注射第36-37页
        2.2 PY手术步骤第37页
        2.3 Irregular ladder walking的训练、录像和分析第37页
        2.4 Sticker removed的训练和检测第37-38页
        2.5 Pasta handling的训练、录像和分析第38页
        2.6 Single-pellet retrieval的训练、检测第38页
        2.7 动物的灌注、取材第38-39页
        2.8 免疫组织化学染色第39页
        2.9 轴突发芽的统计学计数第39页
        2.10 pS6表达荧光强度分析第39-40页
        2.11 统计分析方法第40页
    3 结果第40-46页
        3.1 皮层注射AAV-OPN/IGF1后神经元pS6表达升高第40-42页
        3.2 OPN/IGF1促进脊髓轴突的发芽第42-43页
        3.3 行为学统计分析结果无差异第43-46页
    4 讨论第46-48页
实验二 OPN/IGF1在脑卒中动物模型中的作用研究(一)第48-58页
    引言第48-49页
    1 材料第49页
        1.1 实验动物第49页
        1.2 所用试剂第49页
        1.3 实验抗体第49页
        1.4 实验用病毒载体第49页
        1.5 实验仪器第49页
    2 方法第49-51页
        2.1 脑卒中模型的制作第49-50页
        2.2 病毒注射第50页
        2.3 Irregular ladder walking的训练、录像和分析第50页
        2.4 Sticker removed的训练和检测第50页
        2.5 Single-pellet retrieval的训练、检测第50页
        2.6 TTC染色步骤第50页
        2.7 Nissl染色步骤第50-51页
        2.9 磁共振成像(Magnetic Resonance Imaging,MRI)扫描步骤第51页
        2.10 统计分析方法同实验一第51页
    3 结果第51-56页
        3.1 实验和手术模式图第51-52页
        3.2 行为学结果分析实验组Irregular ladder walking恢复好于对照组第52-54页
        3.3 实验组和对照组损伤组织的体积没有明显差异第54-55页
        3.4 OPN/IGF1促进未损伤侧轴突的代偿性发芽第55-56页
    4 讨论第56-58页
实验三 OPN/IGF1在脑卒中动物模型中的作用研究(二)第58-78页
    引言第58-59页
    1 材料第59页
        1.1 实验动物第59页
        1.2 所用试剂第59页
        1.3 实验抗体第59页
        1.4 实验用病毒载体第59页
        1.5 实验仪器第59页
    2 方法第59-61页
        2.1 脑卒中模型的制作第59-60页
        2.2 皮层病毒注射第60页
        2.3 Irregular ladder walking的训练、录像和分析第60页
        2.4 Single-pellet retrieval的训练、检测第60页
        2.5 Ground walking的录像和结果分析第60页
        2.6 腹腔注射 4-AP3MeOH腹腔注射后行为学检测第60页
        2.7 TTC染色步骤第60页
        2.8 Nissl染色步骤和损伤体积的计算第60页
        2.9 发芽至损伤侧神经元ablation手术第60-61页
        2.10 脑部sprouting强度的统计学分析第61页
        2.11 统计分析第61页
    3 结果第61-75页
        3.1 脑卒中模型引起运动行为学障碍第61-63页
        3.2 OPN/IGF1促进脑卒中动物运动行为学的恢复第63-65页
        3.3 腹腔注射 4-AP3MeOH进一步促进小鼠运动功能的恢复第65-66页
        3.4 OPN/IGF1促进皮层和脊髓的轴突向损伤侧发芽第66-70页
        3.5 消除(ablation)实验组发芽的神经元后行为学恢复也减少第70-73页
        3.6 消除发芽神经元后,脊髓发芽轴突数量减少第73-74页
        3.7 OPN/IGF1通过激活mTOR促进轴突发芽第74-75页
    4 讨论第75-78页
实验四 PD-1/PD-L1调节小胶质/巨噬细胞极化的分子机制研究第78-108页
    引言第78-79页
    1 材料第79-82页
        1.1 实验动物第79页
        1.2 实验用细胞系第79页
        1.3 所用试剂第79-80页
        1.4 实验用抗体第80-81页
        1.5 引物第81-82页
        1.6 实验仪器第82页
    2 方法第82-90页
        2.0 腹腔巨噬细胞的收集和培养第82-83页
        2.1 流式细胞检测第83页
        2.2 小胶质细胞的原代培养第83-84页
        2.3 骨髓细胞诱导巨噬细胞的培养第84-85页
        2.4 Raw 264.7 巨噬细胞系的复苏、培养和冻存第85页
        2.5 RNA的提取,反转录和实时定量PCR第85-86页
        2.6 免疫组织化学染色第86-87页
        2.7 Western blot蛋白液的制备第87页
        2.8 Western blot蛋白印迹的电泳,转膜和成像第87-88页
        2.10 PD-1 的PCR扩增和鉴定第88页
        2.11 用胶回收试剂盒进行胶回收第88页
        2.12 链接T载体和转化第88-89页
        2.13 质粒提取试剂盒提取质粒第89页
        2.14 酶切后连接目的载体第89-90页
        2.15 转染第90页
        2.16 统计学分析第90页
    3 结果第90-105页
        3.1 腹腔巨噬细胞在LPS+IFN-γ 作用下表达PD-1第90-94页
        3.2 巨噬细胞系Raw 264.7 在LPS+IFN-γ 的作用下表达PD-1 及其受体PD-L1第94-95页
        3.3 骨髓干细胞诱导的巨噬细胞和皮层来源的小胶质细胞在LPS+IFN-γ 的作用下表达PD-1第95-96页
        3.4 PD-1 或者PD-L1敲除的巨噬细胞在LPS+IFN-γ 作用下,表达iNOS增多第96-98页
        3.5 LPS+IFN-γ 作用 24h后,PD-1 或者PD-L1敲除的巨噬细胞分泌TNF-α 增多第98-99页
        3.6 PD-1 敲除或者PD-L1敲除后,Stat1,p-Stat1,p-NF-κB表达升高第99-100页
        3.7 PD-1 敲除或者PD-L1敲除通过AKT信号通路调节巨噬细胞极化第100-101页
        3.8 巨噬细胞高表达PD-1 以后,影响Akt,Stat1和NF-κB的表达,但和WT相比,没有明显差别第101-102页
        3.9 PD-1 可能通过mTOR信号通路调节巨噬细胞极化第102-103页
        3.10 PD-1 通过mTOR调节巨噬细胞极化,抑制mTOR以后,iNOS表达下降第103页
        3.11 构建表达His标签的PD-1 质粒第103-104页
        3.12 质粒转染细胞后目的蛋白的表达第104-105页
    4 讨论第105-107页
    下步实验计划第107-108页
小结第108-110页
参考文献第110-124页
附录第124-125页
个人简历和研究成果第125-126页
致谢第126-127页

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