| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-27页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征概况 | 第14页 |
| ·PRRSV 分子生物学 | 第14-25页 |
| ·病毒的分类 | 第14-15页 |
| ·病毒的体外生长特征 | 第15页 |
| ·基因组结构 | 第15-17页 |
| ·基因组的转录与复制 | 第17-18页 |
| ·结构蛋白 | 第18-19页 |
| ·非结构蛋白 | 第19-24页 |
| ·PRRSV 的遗传变异 | 第24-25页 |
| ·预防与控制 | 第25-26页 |
| ·以3CLpro 为靶点的抗病毒药物研究 | 第26页 |
| ·研究目的与意义 | 第26-27页 |
| 第二章 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 Nsp4 的表达及其抗血清的制备 | 第27-39页 |
| 摘要 | 第27页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·毒株、血清、菌株与载体 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27页 |
| ·实验动物 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-34页 |
| ·引物设计与合成 | 第27-28页 |
| ·病毒 RNA 的提取 | 第28页 |
| ·RT-PCR | 第28-29页 |
| ·PCR 产物的回收和纯化 | 第29页 |
| ·大肠埃希氏菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·重组表达质粒的构建及鉴定 | 第29-31页 |
| ·重组蛋白的表达与纯化 | 第31-32页 |
| ·表达产物的 SDS–PAGE 分析及 Western-blot 检测 | 第32-33页 |
| ·Nsp4 抗血清的制备 | 第33-34页 |
| ·病毒感染细胞后 Nsp4 的动态表达情况 | 第34页 |
| ·结果 | 第34-38页 |
| ·Nsp4 基因的获得 | 第34页 |
| ·重组质粒pET30a-Nsp4 的鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白的表达与纯化 | 第35页 |
| ·重组蛋白 Nsp4 的反应原性 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白 Nsp4 抗血清的ELISA 效价测定 | 第36页 |
| ·Nsp4 抗血清与PRRSV 表达产物的反应性 | 第36-37页 |
| ·Nsp4 的动态表达情况 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| 第三章 Nsp4 的3C 样蛋白酶特性分析及活性中心的鉴定 | 第39-56页 |
| 摘要 | 第39页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·毒株、血清、菌株与载体 | 第39页 |
| ·试剂 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-45页 |
| ·引物设计与合成 | 第39-40页 |
| ·病毒 RNA 的提取 | 第40页 |
| ·RT-PCR | 第40-41页 |
| ·重组表达质粒的构建及鉴定 | 第41-44页 |
| ·阳性重组质粒转化 BL21 感受态细胞 | 第44页 |
| ·重组蛋白的表达与纯化 | 第44页 |
| ·酶活性分析 | 第44页 |
| ·Nsp4 活性中心的定点突变分析 | 第44-45页 |
| ·结果 | 第45-54页 |
| ·表达质粒的构建 | 第45-47页 |
| ·重组蛋白的表达与纯化 | 第47-49页 |
| ·反应时间对酶活性的影响 | 第49-50页 |
| ·反应温度对酶活性的影响 | 第50页 |
| ·反应pH 对酶活性的影响 | 第50-51页 |
| ·鉴定切割反应是由 Nsp4 介导 | 第51-52页 |
| ·金属离子对酶活性的影响 | 第52-53页 |
| ·蛋白酶抑制剂对酶活性的影响 | 第53页 |
| ·Nsp4 活性中心的鉴定 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 Nsp9、Nsp10、Nsp11及 Nsp12 的表达与抗血清的制备 | 第56-64页 |
| 摘要 | 第56页 |
| ·材料 | 第56页 |
| ·毒株、血清、菌株与载体 | 第56页 |
| ·试剂 | 第56页 |
| ·Nsp9、Nsp10、Nsp11 B 细胞表位分析 | 第56页 |
| ·方法 | 第56-58页 |
| ·引物设计与合成 | 第56-57页 |
| ·病毒 RNA 的提取 | 第57页 |
| ·RT-PCR | 第57-58页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第58页 |
| ·Nsp9、 Nsp10、 Nsp11 和 Nsp12 的表达与纯化 | 第58页 |
| ·Nsp9、 Nsp10、 Nsp11 和 Nsp12 抗血清的制备 | 第58页 |
| ·Nsp9、 Nsp10、 Nsp11 和 Nsp12 抗血清的 Western- blot 分析 | 第58页 |
| ·结果 | 第58-62页 |
| ·Nsp9、 Nsp10、 Nsp11 和 Nsp12 基因的获得 | 第58-59页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第59页 |
| ·重组蛋白的表达与纯化 | 第59-62页 |
| ·重组蛋白抗血清的 ELISA 效价 | 第62页 |
| ·重组蛋白抗血清与 PRRSV 表达产物的反应性 | 第62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| 第五章 全文结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简历 | 第78页 |
