| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-19页 |
| 1 绪论 | 第19-47页 |
| ·引言 | 第19-20页 |
| ·蛋白质分离与纯化技术 | 第20-22页 |
| ·蛋白质的常规分离 | 第20页 |
| ·色谱技术在蛋白质纯化中的应用 | 第20-21页 |
| ·膜分离技术在蛋白质纯化中的应用 | 第21-22页 |
| ·亲和膜色谱 | 第22-24页 |
| ·亲和膜色谱原理 | 第22-23页 |
| ·亲和膜色谱分类 | 第23页 |
| ·亲和膜色谱的制备基础 | 第23-24页 |
| ·糖与蛋白质的相互作用 | 第24-25页 |
| ·糖的功能与作用 | 第24-25页 |
| ·糖苷集簇效应 | 第25页 |
| ·高分子膜表面的糖基化方法 | 第25-34页 |
| ·物理吸附 | 第25-26页 |
| ·糖烯单体的接枝聚合 | 第26-28页 |
| ·酶催化法 | 第28-29页 |
| ·光化学方法 | 第29-30页 |
| ·糖衍生物与接枝链侧基反应 | 第30-34页 |
| ·点击化学 | 第34-42页 |
| ·点击化学概述 | 第34-35页 |
| ·1,3-偶极环加成反应 | 第35-37页 |
| ·巯/烯点击化学 | 第37-40页 |
| ·巯/炔点击化学 | 第40-42页 |
| ·糖基化材料在蛋白质分离中的应用 | 第42-43页 |
| ·糖基化亲和色谱 | 第42页 |
| ·糖基化亲和膜色谱 | 第42-43页 |
| ·课题提出 | 第43-44页 |
| ·研究内容及方案 | 第44-47页 |
| ·丙烯酸接枝聚丙烯微孔膜及其糖基化 | 第44页 |
| ·叠氮/炔点击化学构建高密度糖基化聚丙烯微孔亲和膜 | 第44页 |
| ·巯/炔点击化学构建糖基化聚丙烯微孔亲和膜 | 第44-45页 |
| ·糖基化聚丙烯微孔膜在蛋白质分离中的应用 | 第45-47页 |
| 2 实验部分 | 第47-71页 |
| ·实验材料与仪器 | 第47-49页 |
| ·实验仪器 | 第47页 |
| ·实验材料 | 第47-49页 |
| ·原料纯化与预处理 | 第49-50页 |
| ·乙酰化糖化合物的合成 | 第50-52页 |
| ·1,2,3,4,6-五-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖的合成 | 第50页 |
| ·2,3,4,6-四-O-乙酰-α-D-溴代吡喃葡萄糖的合成 | 第50-51页 |
| ·2-S-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-2-异硫脲氢溴酸盐的合成 | 第51页 |
| ·2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-巯基-吡喃葡萄糖的合成 | 第51-52页 |
| ·烯炔单体的合成 | 第52-53页 |
| ·1-三甲基硅基丙炔醇的合成 | 第52页 |
| ·甲基丙烯酸(1-三甲基硅基)丙炔醇酯(TMSPMA)的合成 | 第52-53页 |
| ·糖化合物及单体的表征 | 第53页 |
| ·FT-IR分析 | 第53页 |
| ·NMR分析 | 第53页 |
| ·ESI质谱分析 | 第53页 |
| ·聚丙烯微孔膜表面糖基化方法的建立 | 第53-59页 |
| ·基于羧基/氨基偶联反应构建糖基化聚丙烯微孔亲和膜 | 第53-56页 |
| ·基于叠氮/炔点击化学反应构建糖基化表面 | 第56-57页 |
| ·基于巯基/炔点击反应构建糖基化表面 | 第57-59页 |
| ·化学脱糖显色法计算膜表面糖基密度 | 第59-61页 |
| ·糖标准曲线的测定 | 第59-61页 |
| ·表面糖基的脱除及定量测定 | 第61页 |
| ·改性膜表面结构与性能表征 | 第61-62页 |
| ·ATR/FT-IR分析 | 第61页 |
| ·X-射线光电子能谱(XPS)分析 | 第61-62页 |
| ·扫描电子显微镜(SEM)分析 | 第62页 |
| ·膜表面水接触角(WCA)测定 | 第62页 |
| ·糖基化亲和膜的生物相容性研究 | 第62-63页 |
| ·磷酸盐(PBS)缓冲溶液的配制 | 第62-63页 |
| ·血小板粘附 | 第63页 |
| ·蛋白质特异性识别分析 | 第63-65页 |
| ·特异性识别与吸附能力分析 | 第63-64页 |
| ·糖基化亲和膜的特异性吸附动力学行为分析 | 第64-65页 |
| ·糖基化亲和膜对蛋白质的动态吸附 | 第65-71页 |
| ·糖基化亲和膜对Con A/BSA动态吸附分析 | 第65-67页 |
| ·改性聚丙烯微孔膜对FL-Con A/FL-PNA的动态吸附分析 | 第67-71页 |
| 3 紫外辐照接枝丙烯酸制备糖基化聚丙烯亲和膜 | 第71-89页 |
| ·引言 | 第71-72页 |
| ·丙烯酸改性聚丙烯微孔膜的接枝条件 | 第72-74页 |
| ·光引发剂浓度对接枝密度的影响 | 第72-73页 |
| ·丙烯酸单体浓度对接枝密度的影响 | 第73页 |
| ·紫外辐照时间对接枝密度的影响 | 第73-74页 |
| ·丙烯酸接枝改性聚丙烯微孔膜的结构 | 第74-80页 |
| ·接枝改性膜表面的ATR/FT-IR | 第74-75页 |
| ·接枝改性膜表面的XPS | 第75-76页 |
| ·接枝改性膜表面形貌 | 第76-77页 |
| ·接枝改性膜表面亲水性 | 第77-78页 |
| ·染色法定量测定表面丙烯酸接枝密度 | 第78-80页 |
| ·氨基葡萄糖键合构建糖基化聚丙烯亲和膜 | 第80-82页 |
| ·丙烯酸接枝密度对糖基化率的影响 | 第80-81页 |
| ·反应活化方法对糖基化率的影响 | 第81-82页 |
| ·反应温度对糖基化率的影响 | 第82页 |
| ·糖基化聚丙烯微孔亲和膜的结构与性能 | 第82-85页 |
| ·糖基化微孔亲和膜表面的ATR/FT-IR | 第82-83页 |
| ·糖基化微孔亲和膜表面的XPS | 第83-84页 |
| ·糖基化聚丙烯亲和膜表面形貌 | 第84页 |
| ·糖基化微孔亲和膜表面亲水性 | 第84-85页 |
| ·糖基化聚丙烯微孔亲和膜对荧光标记蛋白质的识别性能 | 第85-87页 |
| ·糖基化膜对FL-Con A的特异性识别 | 第85-86页 |
| ·糖基化膜对FL-PNA的吸附 | 第86-87页 |
| ·结论 | 第87-89页 |
| 4 叠氮/炔点击化学构建高密度糖基化聚丙烯微孔亲和膜 | 第89-107页 |
| ·引言 | 第89-90页 |
| ·丙烯酸接枝改性聚丙烯微孔膜的炔基化修饰 | 第90-92页 |
| ·炔基的固定化效率 | 第90-91页 |
| ·炔基化聚丙烯微孔膜表面的ATR/FT-IR | 第91-92页 |
| ·炔基化聚丙烯微孔膜表面的XPS | 第92页 |
| ·叠氮/炔点击化学构建糖基化聚丙烯微孔亲和膜 | 第92-96页 |
| ·水相催化法 | 第93页 |
| ·有机相催化法 | 第93-94页 |
| ·点击反应效率的影响因素 | 第94-95页 |
| ·表面糖基密度的定量分析 | 第95-96页 |
| ·糖基化聚丙烯微孔亲和膜的结构与性能 | 第96-101页 |
| ·糖基化微孔亲和膜表面的ATR/FT-IR | 第96-98页 |
| ·糖基化微孔亲和膜表面的XPS | 第98-99页 |
| ·糖基化微孔亲和膜表面形貌 | 第99-100页 |
| ·糖基化微孔亲和膜表面亲水性 | 第100-101页 |
| ·高密度糖基化聚丙烯微孔亲和膜对蛋白质的识别性能 | 第101-103页 |
| ·糖基化亲和膜表面的生物相容性 | 第103-105页 |
| ·结论 | 第105-107页 |
| 5 巯/炔点击化学构建高密度糖基化聚丙烯微孔亲和膜 | 第107-123页 |
| ·引言 | 第107页 |
| ·巯/炔点击化学法构建功能化聚丙烯微孔膜 | 第107-110页 |
| ·巯/炔点击化学法构建氨基化聚丙烯微孔膜 | 第108-109页 |
| ·巯/炔点击化学法构建羧基化聚丙烯微孔膜 | 第109-110页 |
| ·巯/炔点击化学法构建羟基化聚丙烯微孔膜 | 第110页 |
| ·巯/炔点击化学构建糖基化聚丙烯微孔亲和膜 | 第110-114页 |
| ·巯基糖的合成 | 第110-112页 |
| ·巯/炔点击化学构建糖基化聚丙烯微孔膜 | 第112-114页 |
| ·糖基化聚丙烯微孔膜表面的糖基密度 | 第114页 |
| ·糖基化聚丙烯微孔亲和膜的结构与性能 | 第114-118页 |
| ·糖基化微孔亲和膜表面的ATR/FT-IR | 第114-115页 |
| ·糖基化微孔亲和膜表面的XPS | 第115-116页 |
| ·糖基化微孔亲和膜表面形貌 | 第116-117页 |
| ·糖基化微孔亲和膜表面亲水性 | 第117-118页 |
| ·糖基化聚丙烯微孔亲和膜对荧光标记蛋白质的识别性能 | 第118-119页 |
| ·糖基化聚丙烯微孔亲和膜特异性吸附蛋白质的动力学 | 第119-121页 |
| ·BSA的静态吸附动力学 | 第120页 |
| ·Con A的静态吸附动力学 | 第120-121页 |
| ·结论 | 第121-123页 |
| 6 烯炔单体接枝改性聚丙烯微孔膜的高密度糖基化 | 第123-143页 |
| ·引言 | 第123-124页 |
| ·TMSPA的合成与表征 | 第124-125页 |
| ·三甲基硅基丙炔醇的合成与表征 | 第124页 |
| ·甲基丙烯酸(三甲基硅基)丙炔醇酯(TMSPA)的合成与表征 | 第124-125页 |
| ·TMSPA接枝改性聚丙烯微孔膜 | 第125-130页 |
| ·紫外光接枝法接枝TMSPA | 第125-127页 |
| ·等离子体预处理法接枝TMSPA | 第127-130页 |
| ·TMSPA接枝改性膜表面脱除三甲基硅保护基 | 第130页 |
| ·巯/炔点击化学构建高密度糖基化聚丙烯微孔亲和膜 | 第130-132页 |
| ·接枝密度对巯/炔点击反应效率的影响 | 第131页 |
| ·反应时间对巯/炔点击反应效率的影响 | 第131-132页 |
| ·分子体积对巯/炔点击反应效率的影响 | 第132页 |
| ·糖基化聚丙烯微孔亲和膜的结构与性能 | 第132-137页 |
| ·糖基化微孔亲和膜表面的ATR/FT-IR | 第132-133页 |
| ·糖基化微孔亲和膜表面的XPS | 第133-135页 |
| ·糖基化微孔亲和膜表面形貌 | 第135-136页 |
| ·糖基化微孔亲和膜表面亲水性 | 第136-137页 |
| ·高密度糖基化亲和膜对荧光标记蛋白质的识别性能 | 第137-138页 |
| ·高密度糖基化亲和膜对荧光标记蛋白质的动态吸附 | 第138-140页 |
| ·结论 | 第140-143页 |
| 7 糖基化聚丙烯微孔亲和膜动态吸附蛋白质 | 第143-155页 |
| ·引言 | 第143-144页 |
| ·糖基化亲和膜选择性吸附Con A/BSA | 第144-151页 |
| ·动态吸附系统的组建 | 第144页 |
| ·聚丙烯微孔膜对BSA的动态吸附 | 第144-145页 |
| ·葡萄糖糖基化聚丙烯微孔膜对BSA的动态吸附 | 第145-147页 |
| ·葡萄糖糖基化聚丙烯微孔膜对Con A的动态吸附 | 第147-151页 |
| ·糖基化聚丙烯亲和膜过滤FL-Con A的荧光形态 | 第151-153页 |
| ·结论 | 第153-155页 |
| 全文总结 | 第155-159页 |
| 论文创新点 | 第159-161页 |
| 不足与展望 | 第161-163页 |
| 参考文献 | 第163-183页 |
| 附录Ⅰ:高密度糖基化聚丙烯微孔亲和膜表面的肝细胞培养 | 第183-203页 |
| 1. 引言 | 第183-185页 |
| 2. 实验方法 | 第185-187页 |
| ·细胞来源 | 第185页 |
| ·实验仪器 | 第185-186页 |
| ·实验材料 | 第186页 |
| ·主要试剂的配制 | 第186-187页 |
| ·PBS溶液 | 第186-187页 |
| ·细胞培养液 | 第187页 |
| ·FDA溶液 | 第187页 |
| ·BSA溶液 | 第187页 |
| 3. 膜材料的处理和细胞接种 | 第187页 |
| 4. 膜材料的细胞毒性检测 | 第187-188页 |
| ·Qblue检测 | 第187-188页 |
| ·LDH检测 | 第188页 |
| 5. 细胞生长情况观察 | 第188页 |
| 6. 细胞免疫染色观察生长形态 | 第188-189页 |
| 7. 统计学处理 | 第189-190页 |
| 8. 结果与讨论 | 第190-199页 |
| ·糖基化亲和膜表面肝细胞形貌 | 第190-194页 |
| ·氨基葡萄糖修饰表面的肝细胞形貌 | 第190-192页 |
| ·点击化学修饰糖基化表面的肝细胞形貌 | 第192-194页 |
| ·肝细胞毒性 | 第194-197页 |
| ·糖基化亲和膜表面肝细胞的CLSM | 第197-199页 |
| 9. 结论 | 第199-200页 |
| 参考文献 | 第200-203页 |
| 附录Ⅱ | 第203-209页 |
| 附录Ⅲ | 第209-211页 |
| 作者简介及博士期间相关科研成果 | 第211-212页 |
