| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 英文缩写对照表 | 第8-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-23页 |
| ·概述 | 第12页 |
| ·RNA 干扰机制研究发展及在肿瘤基因治疗中的应用 | 第12-15页 |
| ·RNAi 作用机制 | 第12-14页 |
| ·RNAi 的特征 | 第14页 |
| ·RNAi 在肿瘤基因治疗中的运用 | 第14-15页 |
| ·SATB1 的特性 | 第15-18页 |
| ·SATB1 的主要生物学功能 | 第16-17页 |
| ·SATB1 基因重排促进乳腺癌的生长和转移 | 第17-18页 |
| ·腺相关病毒载体介导的基因治疗研究现状 | 第18-21页 |
| ·基因治疗研究概况 | 第18-19页 |
| ·腺相关病毒载体 | 第19-21页 |
| ·本论文的研究目的和意义 | 第21-22页 |
| ·本论文的技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章以 SATB1 为靶标的小分子 RNA 抑制效果的评估 | 第23-44页 |
| ·实验材料 | 第23-31页 |
| ·质粒、菌株与细胞系 | 第23页 |
| ·主要试剂和药品 | 第23-25页 |
| ·主要设备与仪器 | 第25-26页 |
| ·溶液配制 | 第26-31页 |
| ·实验方法 | 第31-37页 |
| ·转染质粒的大量制备 | 第31-32页 |
| ·MDA-MB-231 细胞的培养 | 第32-33页 |
| ·细胞转染（脂质体法） | 第33页 |
| ·转染后细胞总 RNA 的提取（Trizol 抽提法） | 第33-34页 |
| ·Real Time-PCR 试验(SYBR Green Assay)检测siRNA 抑制效果 | 第34-36页 |
| ·Western Blot 实验检测siRNA 抑制效果 | 第36-37页 |
| ·实验结果与讨论 | 第37-42页 |
| ·质粒大量提取的电泳鉴定 | 第37-38页 |
| ·MDA-MB-231 细胞培养结果 | 第38页 |
| ·Real Time-PCR 在mRNA 水平检测satb1 基因表达量抑制效果 | 第38-41页 |
| ·Western Blot 在蛋白质水平检测satb1 基因表达量抑制效果 | 第41-42页 |
| ·小结 | 第42-44页 |
| 第三章 靶向 SATB1 和 VEGF的双重 siRNA重组腺相关病毒载体的构建 | 第44-59页 |
| ·实验材料 | 第44-48页 |
| ·质粒和菌株 | 第44页 |
| ·主要药品与试剂 | 第44-45页 |
| ·主要设备与仪器 | 第45-46页 |
| ·溶液配制 | 第46-48页 |
| ·实验方法 | 第48-56页 |
| ·目的片段的 T 载体克隆 | 第50-53页 |
| ·重组 T 载体的转化 | 第53-54页 |
| ·重组 T 载体的鉴定 | 第54页 |
| ·pAAV-VESR 的构建 | 第54-56页 |
| ·结果与讨论 | 第56-58页 |
| ·PCR 产物回收后鉴定 | 第56页 |
| ·pAAV-VESR 的酶切鉴定 | 第56-58页 |
| ·重组腺相关病毒载体pAAV-VESR 的测序结果 | 第58页 |
| ·小结 | 第58-59页 |
| 第四章 重组腺相关病毒的组装及病毒介导的外源基因表达 | 第59-70页 |
| ·实验材料 | 第59-60页 |
| ·质粒与细胞 | 第59页 |
| ·主要药品与耗材 | 第59页 |
| ·主要设备与仪器 | 第59-60页 |
| ·溶液配制 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-63页 |
| ·质粒的大量制备 | 第60-61页 |
| ·AAV-293 细胞的培养 | 第61-62页 |
| ·重组病毒的组装 | 第62页 |
| ·重组病毒的收集 | 第62-63页 |
| ·Real Time-PCR 方法检测重组病毒介导的外源基因表达 | 第63页 |
| ·结果与讨论 | 第63-68页 |
| ·质粒大量提取的电泳鉴定 | 第63-64页 |
| ·AAV-293 细胞培养结果 | 第64页 |
| ·重组病毒组装结果 | 第64-65页 |
| ·Real Time-PCR 检测外源基因表达 | 第65-68页 |
| ·小结 | 第68-70页 |
| 结论与展望 | 第70-72页 |
| 结论 | 第70页 |
| 本论文的创新性 | 第70-71页 |
| 展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-76页 |
| 附录 | 第76-77页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
