| 中文摘要 | 第1-13页 |
| 英文摘要 | 第13-15页 |
| 1 引言 | 第15-39页 |
| ·胚胎干细胞概述 | 第15-23页 |
| ·干细胞定义 | 第15-16页 |
| ·畸胎瘤干细胞 | 第16页 |
| ·胚胎干细胞(Embryonic stem cells, ESCs) | 第16-23页 |
| ·胚胎干细胞的生物学特性 | 第23-26页 |
| ·ES 细胞的形态特性 | 第23-24页 |
| ·ES 细胞的分化潜能 | 第24-26页 |
| ·ES 细胞特异分子标记(ESC-Specific Markers) | 第26页 |
| ·胚胎干细胞的来源 | 第26-29页 |
| ·着床前胚胎 | 第27页 |
| ·克隆技术重构胚胎 | 第27页 |
| ·孤雌活化胚胎 | 第27-28页 |
| ·单卵裂球与ES 细胞的建立 | 第28-29页 |
| ·ES 细胞建系培养方法 | 第29-31页 |
| ·共培养体系 | 第29-30页 |
| ·条件培养液 | 第30页 |
| ·生长因子 | 第30-31页 |
| ·胚胎干细胞维持自我更新的分子机制 | 第31-37页 |
| ·LIF-STAT 信号通路 | 第32-33页 |
| ·ES 细胞中的Wnt 信号 | 第33-35页 |
| ·ES 细胞中的BMP 信号 | 第35页 |
| ·FGF 信号通路 | 第35-36页 |
| ·丝裂原蛋白激酶（MAPK） | 第36页 |
| ·核转录因子通路 | 第36-37页 |
| ·ES 干细胞的临床应用和前景 | 第37-38页 |
| ·研究的目的和意义 | 第38-39页 |
| 2 材料与方法 | 第39-58页 |
| ·实验动物 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39-42页 |
| ·饲养层细胞培养主要试剂 | 第39页 |
| ·ES 细胞培养主要试剂 | 第39-40页 |
| ·ES 细胞鉴定主要试剂 | 第40-42页 |
| ·主要试剂配制 | 第42-44页 |
| ·饲养层细胞培养试剂配制 | 第42页 |
| ·ES 细胞培养主要试剂配制 | 第42-43页 |
| ·ES 细胞检测主要试剂配制 | 第43-44页 |
| ·饲养层细胞制备 | 第44-45页 |
| ·小鼠胎儿成纤维细胞的获取 | 第44页 |
| ·MEF 的传代 | 第44页 |
| ·细胞冻存 | 第44页 |
| ·饲养层制备 | 第44-45页 |
| ·MEF 活力测定 | 第45页 |
| ·小鼠早期胚胎的获取和培养 | 第45-46页 |
| ·小鼠早期胚胎的获取 | 第45页 |
| ·卵裂球分离 | 第45-46页 |
| ·单卵裂球培养 | 第46页 |
| ·着床前胚胎的免疫化学 | 第46-47页 |
| ·囊胚细胞计数 | 第47页 |
| ·单卵裂球建立胚胎干细胞 | 第47-48页 |
| ·胚胎全部单个卵裂球ES 细胞的建立 | 第47-48页 |
| ·随机抽取单个胚胎卵裂球ES 细胞的建立 | 第48页 |
| ·ES 细胞的鉴定 | 第48-57页 |
| ·形态观察 | 第48页 |
| ·碱性磷酸酶（AKP）染色 | 第48-49页 |
| ·核型分析 | 第49页 |
| ·免疫荧光法检测 | 第49-50页 |
| ·蛋白表达的Western blot 测定 | 第50-53页 |
| ·PCR 检测 | 第53-55页 |
| ·体外分化能力检测 | 第55-56页 |
| ·嵌合体检测 | 第56-57页 |
| ·数据统计分析 | 第57-58页 |
| 3 结果 | 第58-79页 |
| ·小鼠胚胎成纤维细胞饲养层的活力分析 | 第58-60页 |
| ·MEF 传代次数对其活力的影响 | 第58-59页 |
| ·丝裂霉素C 处理时间对MEF 活力的影响 | 第59-60页 |
| ·小鼠胚胎在KSOM 和mES 培养液中的发育 | 第60-67页 |
| ·KSOM 和mES 培养液对胚胎发育及粘附的影响 | 第60-63页 |
| ·KSOM，mES 和KSOM＋mES 培养液对ICM 形成的影响 | 第63-66页 |
| ·单卵裂球发育的囊胚标志分子的表达 | 第66-67页 |
| ·不同添加物中的胚胎的发育 | 第67-68页 |
| ·不同添加物中培养对的单卵裂球发育的影响 | 第68-74页 |
| ·不同添加物对胚胎发育及胚胎粘附的影响 | 第68-71页 |
| ·不同添加物对胚胎ICM 大小的影响 | 第71-72页 |
| ·不同添加物对ES 细胞样克隆分子表达的影响 | 第72-73页 |
| ·胚胎的所有卵裂球ES 细胞的建立 | 第73-74页 |
| ·胚胎单个卵裂球ES 细胞的建立 | 第74-75页 |
| ·ES 细胞系鉴定 | 第75-79页 |
| ·形态学 | 第75页 |
| ·AKP 染色 | 第75页 |
| ·ES 细胞核型分析 | 第75-76页 |
| ·免疫荧光法检测 | 第76页 |
| ·ES 细胞Oct-4 和Nanog 的表达 | 第76-77页 |
| ·体外分化检测 | 第77页 |
| ·嵌合体检测 | 第77-79页 |
| 4 讨论 | 第79-90页 |
| ·传代次数对MEF 活力的影响 | 第79页 |
| ·丝裂霉素C 处理时间对MEF 活力的影响 | 第79-80页 |
| ·培养体系与单卵裂球分离小鼠ES 细胞 | 第80-83页 |
| ·KSOM 比mES 更适于单卵裂球体外发育 | 第80-81页 |
| ·KSOM 与mES 培养液相结合有利于促进单卵裂球胚胎ICM 的形成 | 第81-82页 |
| ·不同培养液对胚胎细胞标志分子的表达的影响 | 第82-83页 |
| ·LIF 对ES 样细胞系建立的影响 | 第83-84页 |
| ·LIF 和MEK1/2 抑制剂PD98059 协作有利于ES 细胞分离 | 第84-85页 |
| ·LIF 和MEK1/2 抑制剂PD98059 协作维持ES 细胞自我更新的可能机制 | 第85-87页 |
| ·姐妹卵裂球发育能力与胚胎发育阶段 | 第87-88页 |
| ·胚胎单个卵裂球建立ES 细胞系的可能性 | 第88-90页 |
| 5 结论 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-108页 |
| 图版 Ⅰ | 第108-109页 |
| 图版 Ⅱ | 第109-110页 |
| 图版 Ⅲ | 第110-111页 |
| 图版 Ⅳ | 第111-112页 |
| 图版Ⅴ | 第112-113页 |
| 图版Ⅵ | 第113-114页 |
| 图版说明 | 第114-116页 |
| 缩略词表 | 第116-118页 |
| 博士期间发表的文章 | 第118页 |
