| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 表格目录 | 第11-12页 |
| 图片目录 | 第12-13页 |
| 英文缩略语表 | 第13-14页 |
| 前言 | 第14-16页 |
| 第一章 单基因RNA干扰载体的构建与鉴定 | 第16-37页 |
| ·材料与仪器 | 第16-21页 |
| ·菌株与细胞株 | 第16-17页 |
| ·质粒 | 第17-19页 |
| ·引物 | 第19页 |
| ·主要实验仪器设备 | 第19页 |
| ·实验试剂 | 第19-21页 |
| ·实验方法 | 第21-28页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第21页 |
| ·RNAi载体pRS-EGFR的酶切验证 | 第21-22页 |
| ·CTAB法提取质粒 | 第22页 |
| ·pRS-EGFR转染级质粒的提取 | 第22-23页 |
| ·细胞的复苏、传代与冻存 | 第23页 |
| ·肝癌细胞SMMC-7721瞬时转染 | 第23-24页 |
| ·肝癌细胞SMMC-7721稳定筛选 | 第24-25页 |
| ·稳定表达细胞株的MTT实验 | 第25页 |
| ·细胞RNA的提取(TRizol法) | 第25页 |
| ·RT-PCR步骤 | 第25-26页 |
| ·shRNA的退火 | 第26-27页 |
| ·pDA-EGFP-shRNA-G4/pAD-EGFP-shRNA-G4载体的构建 | 第27-28页 |
| ·实验结果 | 第28-35页 |
| ·hEGFR单基因RNAi载体的酶切验证 | 第28-29页 |
| ·肝癌细胞SMMC-7721的瞬时转染 | 第29-30页 |
| ·单基因RNA干扰载体稳定筛选 | 第30-31页 |
| ·siRNA发卡DNA的退火结果 | 第31-33页 |
| ·肝靶向性pAD-EGFP-shRNA-G4载体的构建 | 第33-34页 |
| ·肝靶向性PDA-EGFP-shRNA-G4载体的构建 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| 第二章 双基因RNA干扰载体的构建 | 第37-50页 |
| ·材料与仪器 | 第37-39页 |
| ·菌株 | 第37页 |
| ·实验仪器 | 第37-38页 |
| ·实验试剂 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-44页 |
| ·实验思路设计 | 第39-40页 |
| ·分别靶向hTERT和hEGFR的RNAi载体的共转染 | 第40页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第40页 |
| ·质粒的转化与提取 | 第40页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测DNA质粒 | 第40页 |
| ·pRS-TERT载体的单酶切 | 第40-41页 |
| ·线状pRS-TERT的去磷酸化 | 第41页 |
| ·pRS-EGFR载体的双酶切 | 第41-42页 |
| ·pRS-EGFR的切胶回收 | 第42页 |
| ·DNA连接反应 | 第42-43页 |
| ·连接产物的转化 | 第43页 |
| ·双基因RNAi载体的酶切验证 | 第43-44页 |
| ·实验结果 | 第44-48页 |
| ·分别靶向hTERT和hEGFR的RNAi载体的共转染 | 第44-45页 |
| ·hTERT单基因RNA干扰载体的酶切验证及说明 | 第45-46页 |
| ·双基因RNA干扰载体的构建 | 第46-48页 |
| ·实验讨论 | 第48-50页 |
| 综述 肿瘤的联合基因治疗 | 第50-64页 |
| ·致癌基因的联合治疗 | 第51-52页 |
| ·抑癌基因的联合治疗 | 第52-53页 |
| ·自杀基因的联合治疗 | 第53-55页 |
| ·自杀基因与抑癌基因的联合治疗 | 第55-56页 |
| ·自杀基因与细胞因子基因的联合治疗 | 第56-58页 |
| ·多耐药基因与自杀基因的联合治疗 | 第58-59页 |
| ·免疫基因的联合治疗 | 第59-60页 |
| ·免疫基因与抑癌基因的联合治疗 | 第60-61页 |
| ·总结 | 第61-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 个人简历 | 第69页 |
| 攻读学位期间发表文章及参与课题研究 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
