| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 引言 | 第13-26页 |
| 1 棉纤维生长发育的研究进展 | 第13-16页 |
| ·棉纤维的概述 | 第13-15页 |
| ·棉纤维简介 | 第13页 |
| ·异源四倍体棉的进化 | 第13页 |
| ·影响棉纤维发育的激素 | 第13-14页 |
| ·影响棉纤维发育的基因 | 第14-15页 |
| ·赤霉素在棉纤维生长发育中的重要作用 | 第15-16页 |
| 2 赤霉素的研究进展 | 第16-19页 |
| ·GA的生理效应 | 第16页 |
| ·GA的生物合成途径 | 第16页 |
| ·GA的信号转导通路 | 第16-17页 |
| ·GA的作用机制 | 第17-19页 |
| ·GA生物合成相关的基因 | 第17页 |
| ·GA信号转导通路相关的基因 | 第17-19页 |
| ·GA调控的下游基因 | 第19页 |
| 3 DELLA蛋白及其研究进展 | 第19-26页 |
| ·DELLA蛋白的结构 | 第20页 |
| ·DELLA蛋白的亚细胞定位 | 第20页 |
| ·DELLA蛋白的功能 | 第20-24页 |
| ·DELLA蛋白对茎发育的影响 | 第22-23页 |
| ·DELLA蛋白对下胚轴生长的影响 | 第23页 |
| ·DELLA蛋白对种子萌发的影响 | 第23页 |
| ·DELLA蛋白对花发育的影响 | 第23-24页 |
| ·DELLA蛋白的下游基因 | 第24-25页 |
| ·DELLA蛋白与棉纤维的发育 | 第25-26页 |
| 研究的目的意义 | 第26-27页 |
| 技术路线 | 第27-28页 |
| 材料与方法 | 第28-47页 |
| 1 材料 | 第28-30页 |
| ·植物材料 | 第28页 |
| ·载体 | 第28页 |
| ·菌株 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29页 |
| ·主要缓冲液 | 第29-30页 |
| 2 方法 | 第30-47页 |
| ·GhGAI3与GhGAI4础基因全长的克隆 | 第30-35页 |
| ·EST相关序列的筛选 | 第30页 |
| ·GhGAI3与GhGAI4全长序列的拼接 | 第30页 |
| ·全长序列的分析以及引物设计 | 第30页 |
| ·RNA的提取 | 第30-31页 |
| ·3’RACE扩增全长序列 | 第31-32页 |
| ·扩增产物的回收、克隆和测序 | 第32页 |
| ·GhGAI3a的克隆、回收和测序 | 第32-33页 |
| ·DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·GhGAI3和GhGAI4基因组序列的获得 | 第34页 |
| ·已获得基因的序列分析 | 第34-35页 |
| ·二倍体野生棉中GAI3、GAI4的扩增 | 第35页 |
| ·基因组DNA的提取及序列扩增 | 第35页 |
| ·序列分析 | 第35页 |
| ·GhGAI3和GhGAI4启动子的克隆及分析 | 第35-37页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第35页 |
| ·基因组DNA的酶切及与接头连接 | 第35-36页 |
| ·启动子PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·扩增产物的回收及测序 | 第37页 |
| ·启动子序列的顺式作用元件分析 | 第37页 |
| ·GhGAI3与GhGAI4的表达分析 | 第37-39页 |
| ·RNA的提取 | 第37页 |
| ·RNA的DNaseI消化及反转录 | 第37页 |
| ·引物设计 | 第37-38页 |
| ·扩增效率优化 | 第38页 |
| ·qPCR反应程序 | 第38-39页 |
| ·GhGAIs表达载体的构建及拟南芥的遗传转化 | 第39-43页 |
| ·表达载体构建、鉴定及测序 | 第39-40页 |
| ·农杆菌感受态的制备、转化及鉴定 | 第40-41页 |
| ·拟南芥的遗传转化 | 第41页 |
| ·拟南芥阳性转化植株的筛选以及纯合子鉴定 | 第41页 |
| ·转化植株的PCR鉴定 | 第41-42页 |
| ·GhGAI3a在转基因拟南芥不同株系中的表达分析 | 第42-43页 |
| ·GhGAI3a转基因拟南芥的表型分析 | 第43-44页 |
| ·拟南芥植株的生长条件 | 第43页 |
| ·拟南芥植株莲座半径的检测 | 第43页 |
| ·拟南芥植株高度的检测 | 第43页 |
| ·拟南芥植株花的发育与果荚发育的检测 | 第43页 |
| ·拟南芥植株开花时间的检测 | 第43页 |
| ·拟南芥植株下胚轴的测量 | 第43-44页 |
| ·GhGAI3a的原核表达及抗体的制备 | 第44-47页 |
| ·载体构建 | 第44-45页 |
| ·GhGAI3a的小量表达 | 第45页 |
| ·GhGAI3a的大量表达 | 第45-46页 |
| ·GhGAI3a蛋白的纯化 | 第46页 |
| ·抗体制备 | 第46-47页 |
| 结果与分析 | 第47-80页 |
| 1 GhGAIs基因全长序列的获得 | 第47-53页 |
| ·GhGAIs cDNA全长序列的获得 | 第47页 |
| ·GhGAIs的电子克隆 | 第47页 |
| ·GhGAI3与GhGAI4基因的克隆与测序结果 | 第47页 |
| ·GhGAI3a cDNA全长序列的获得 | 第47-48页 |
| ·GhGAIs基因组序列的获得 | 第48-49页 |
| ·GhGAIs基因序列的分析与系统发育树的构建l.mjgvfjedz+ | 第49-53页 |
| ·GhGAIs的基因序列分析 | 第49页 |
| ·GhGAIs与其他物种中DELLA蛋白的序列比对 | 第49页 |
| ·GhGAIs功能域的分析 | 第49-53页 |
| ·GhGAIs系统发育树的构建 | 第53页 |
| 2 二倍体野生棉中GAIs基因序列的获得 | 第53-56页 |
| ·二倍体野生棉中GAIs基因组全长序列的获得 | 第53-54页 |
| ·GhGAIs基因的来源分析 | 第54-56页 |
| 3 GhGAI3和GhGAI4动子序列的获得及序列分析 | 第56-60页 |
| ·GhGAI3GhGAI4启动子序列的获得 | 第56-57页 |
| ·基因组酶切 | 第56-57页 |
| ·启动子的扩增及测序 | 第57页 |
| ·GhGAI3和GhGAI4启动子序列的分析 | 第57-60页 |
| 4 GhGAI3与GhGAI4的表达分析 | 第60-63页 |
| ·棉花开花前不同天数花苞大小的统计 | 第60-61页 |
| ·GhGAI3和GhGAI4在棉花不同组织及纤维不同发育时期纤维和胚珠中的表达分析 | 第61-63页 |
| 5 GhGAIs表达载体的构建及GhGAI3a拟南芥遗传转化纯合子的筛选和鉴定 | 第63-64页 |
| ·GhGAIs表达载体的构建 | 第63-64页 |
| ·GhGAI3a拟南芥阳性植株的PCR鉴定 | 第64页 |
| ·拟南芥遗传转化纯合子的筛选 | 第64页 |
| 6 GhGAI3a转基因拟南芥纯合子的表型分析及GhGAI3a相应的表达量检测 | 第64-77页 |
| ·莲座半径的检测 | 第64-66页 |
| ·开花时间的检测 | 第66页 |
| ·植株高度、花的发育以及果荚的发育的检测 | 第66-71页 |
| ·下胚轴表型的观察 | 第71-77页 |
| ·黑暗条件下检测转基因拟南芥下胚轴的生长 | 第71-74页 |
| ·光照条件下检测转基因拟南芥下胚轴的生长 | 第74-77页 |
| 7 GhGAI3a的原核表达及抗体的制备 | 第77-80页 |
| ·GhGAI3a原核表达载体构建 | 第77-78页 |
| ·GhGAI3a小量表达 | 第78-79页 |
| ·GhGAI3a大量表达以及纯化 | 第79页 |
| ·GhGAI3a的抗体制备 | 第79-80页 |
| 讨论 | 第80-85页 |
| 1 GhGAIs的基因的克隆以及序列分析 | 第80页 |
| 2 GhGAIs的亚基因组归属问题 | 第80-81页 |
| 3 棉花DELLA蛋白功能的保守性 | 第81页 |
| 4 棉花不同DELLA蛋白之间功能的冗余性以及差异性 | 第81-82页 |
| 5 GhGAI3a在下胚轴伸长过程中的作用 | 第82-83页 |
| 6 GhGAI3a对GA的响应 | 第83页 |
| 7 GhGAI3a过量表达株系后代表型分离的原因 | 第83页 |
| 8 关于GhGAI3在棉花中的表达谱 | 第83-85页 |
| 结论 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
