| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 英文缩略词 | 第10-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-19页 |
| 第二章 MICRORNA-LET-7A在食管鳞癌组织、细胞中的表达以及对转移的影响 | 第19-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 组织和细胞 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂和材料 | 第19-20页 |
| 2.1.3 主要仪器和设备 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-34页 |
| 2.2.1 食管鳞癌细胞的培养 | 第21-24页 |
| 2.2.2 转染实验 | 第24-25页 |
| 2.2.3 琼脂糖凝胶电泳实验 | 第25页 |
| 2.2.4 提取总RNA | 第25-26页 |
| 2.2.5 逆转录cDNA及荧光定量PCR | 第26-28页 |
| 2.2.5.1 逆转录cDNA | 第26-27页 |
| 2.2.5.2 荧光定量PCR | 第27-28页 |
| 2.2.6 免疫印迹实验(Westernblotting) | 第28-33页 |
| 2.2.6.1 Westernblotting实验所需试剂以及配置方法 | 第28-30页 |
| 2.2.6.2 蛋白质提取和Westernblotting具体步骤 | 第30-33页 |
| 2.2.7 CCK8实验 | 第33页 |
| 2.2.8 划痕实验及Transwell迁移实验 | 第33-34页 |
| 2.2.8.1 划痕实验 | 第33-34页 |
| 2.2.8.2 Transwell迁移实验 | 第34页 |
| 2.2.9 统计分析 | 第34页 |
| 2.3 结果 | 第34-40页 |
| 2.3.1 MicroRNA-let-7a在食管鳞癌组织、细胞中的表达 | 第34-38页 |
| 2.3.2 MicroRNA-let-7a表达变化对食管鳞癌细胞生物学行为影响 | 第38-40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 食管鳞癌细胞中LIN28/MICRORNA-LET-7A对EMT、转移发生的影响 | 第42-53页 |
| 3.1 实验材料 | 第42-43页 |
| 3.1.1 实验所需细胞 | 第42页 |
| 3.1.2 主要实验材料和试剂 | 第42-43页 |
| 3.1.3 主要实验仪器和设备 | 第43页 |
| 3.2 实验主要方法 | 第43-46页 |
| 3.2.1 食管鳞状细胞系的培养 | 第43页 |
| 3.2.2 总RNA的提取 | 第43页 |
| 3.2.3 逆转录cDNA | 第43页 |
| 3.2.4 荧光定量PCR | 第43页 |
| 3.2.5 免疫荧光 | 第43-45页 |
| 3.2.6 ELISA实验 | 第45-46页 |
| 3.2.7 细胞形态学实验 | 第46页 |
| 3.2.8 统计学分析 | 第46页 |
| 3.3 结果 | 第46-50页 |
| 3.3.1 MicroRNA-let-7a对食管鳞癌细胞形态的影响 | 第46-47页 |
| 3.3.2 MicroRNA-let-7a对EMT相关蛋白表达的影响 | 第47-48页 |
| 3.3.3 Lin28调控microRNA-let-7a表达参与EMT相关转录因子的形成 | 第48-49页 |
| 3.3.4 lin28/microRNA-let-7a调控转移相关蛋白的表达 | 第49-50页 |
| 3.3.5 MicroRNA-let-7a上调抑制VEGF-C和MMP-9的外泌 | 第50页 |
| 3.4 讨论 | 第50-53页 |
| 第四章 WNT/LIN28抑制MICRORNA-LET-7A表达促进转移的分子机制 | 第53-61页 |
| 4.1 材料 | 第53页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第53页 |
| 4.1.2 主要仪器与耗材 | 第53页 |
| 4.2 实验方法 | 第53-54页 |
| 4.2.1 荧光定量PCR | 第53-54页 |
| 4.2.2 Western blotting | 第54页 |
| 4.2.3 统计学分析 | 第54页 |
| 4.3 结果 | 第54-58页 |
| 4.3.1 食管鳞癌细胞及正常细胞中Wnt信号活化比较 | 第54-55页 |
| 4.3.2 MicroRNA-let-7a对食管鳞癌细胞中对Wnt信号的影响 | 第55-56页 |
| 4.3.3 Wnt信号对Lin28蛋白表达调控 | 第56-57页 |
| 4.3.4 抑制Wnt信号可促进microRNA-let-7a的表达 | 第57页 |
| 4.3.5 Wnt信号是通过Lin28负调控microRNA-let-7a表达促进迁移发生 | 第57-58页 |
| 4.4 讨论 | 第58-61页 |
| 第五章 结论与展望 | 第61-62页 |
| 5.1 主要结论 | 第61页 |
| 5.2 展望 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
