| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 HER2的概述 | 第12-15页 |
| 1.1.1 HER2的发现 | 第13页 |
| 1.1.2 HER2的结构 | 第13页 |
| 1.1.3 HER2信号通路及致癌机制 | 第13-14页 |
| 1.1.4 靶向HER2的小分子药物 | 第14-15页 |
| 1.2 BiTE的概述 | 第15-17页 |
| 1.2.1 BiTE的结构 | 第15-16页 |
| 1.2.2 BiTE抗肿瘤机制 | 第16页 |
| 1.2.3 BiTE的临床应用 | 第16-17页 |
| 1.2.4 BiTE的前景 | 第17页 |
| 1.3 Engager T细胞的概述 | 第17-19页 |
| 1.3.1 常见基因工程化细胞 | 第17-18页 |
| 1.3.2 Engager T的进展 | 第18页 |
| 1.3.3 Engager T的优势 | 第18-19页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第19-20页 |
| 1.5 研究内容与技术路线 | 第20-22页 |
| 1.5.1 研究内容 | 第20-21页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 构建双特性抗体慢病毒重组质粒 | 第22-34页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第22-24页 |
| 2.1.1 质粒与菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 酶与相关试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.3 溶液配制 | 第23-24页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第24页 |
| 2.1.5 实验耗材 | 第24页 |
| 2.1.6 引物序列 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-30页 |
| 2.2.1 载体的线性化 | 第24-25页 |
| 2.2.2 载体酶切产物的割胶回收 | 第25页 |
| 2.2.3 PCR扩增anti-HER2-anti-CD3 BiTE基因 | 第25-26页 |
| 2.2.4 PCR产物纯化 | 第26页 |
| 2.2.5 目的基因与载体的连接 | 第26-27页 |
| 2.2.6 Stb13感受态细胞的制备 | 第27页 |
| 2.2.7 重组质粒转入感受态细胞 | 第27-28页 |
| 2.2.8 菌落PCR验证 | 第28页 |
| 2.2.9 重组质粒抽提 | 第28-29页 |
| 2.2.10 酶切验证重组质粒 | 第29页 |
| 2.2.11 制备无内毒素转染级质粒 | 第29-30页 |
| 2.3 结果 | 第30-33页 |
| 2.3.1 重组病毒LV-anti-HER2-anti-CD3构建图 | 第30页 |
| 2.3.2 载体构建与目的基因的扩增 | 第30-31页 |
| 2.3.3 验证重组质粒 | 第31-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-34页 |
| 第三章 HER2-ENG T细胞的制备 | 第34-47页 |
| 3.1 实验材料与仪器 | 第34-36页 |
| 3.1.1 细胞株 | 第34页 |
| 3.1.2 试剂 | 第34-35页 |
| 3.1.3 溶液配制 | 第35页 |
| 3.1.4 仪器与耗材 | 第35-36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-40页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第36-37页 |
| 3.2.2 制备重组慢病毒 | 第37-38页 |
| 3.2.3 HER2-ENG T细胞的制备 | 第38-39页 |
| 3.2.4 检验HER2-ENGT细胞中BiTE的表达 | 第39-40页 |
| 3.3 结果与分析 | 第40-46页 |
| 3.3.1 成功制备重组慢病毒 | 第40-42页 |
| 3.3.2 基因改造后的HER2-ENGT细胞生长状态良好 | 第42-44页 |
| 3.3.3 HER2-ENG T细胞表达外源基因 | 第44-46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-47页 |
| 第四章 体外检测HER2-ENG T细胞抗肿瘤活性 | 第47-56页 |
| 4.1 实验材料与仪器 | 第47-48页 |
| 4.1.1 细胞株 | 第47页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第47-48页 |
| 4.1.3 实验仪器与耗材 | 第48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48-50页 |
| 4.2.1 流式细胞术检测细胞HER2的表达 | 第48页 |
| 4.2.2 HER2-ENG T细胞的体外生物功能检测 | 第48-50页 |
| 4.3 结果 | 第50-55页 |
| 4.3.1 所测靶细胞株的HER2表达量差异显著 | 第50-51页 |
| 4.3.2 HER2-ENG T细胞具有裂解MCF-7的能力 | 第51-52页 |
| 4.3.3 HER2抗原刺激HER2-ENG T细胞分泌IL-2、IFN-γ | 第52-53页 |
| 4.3.4 HER2-ENG T靶向肿瘤细胞依赖于HER2抗原 | 第53-54页 |
| 4.3.5 HER2-ENG T细胞上清介导PBMC杀伤肿瘤 | 第54-55页 |
| 4.4 讨论 | 第55-56页 |
| 第五章 体内检测HER2-ENG T细胞抗肿瘤功能 | 第56-60页 |
| 5.1 实验材料与仪器 | 第56页 |
| 5.1.1 实验动物 | 第56页 |
| 5.1.2 仪器与试剂 | 第56页 |
| 5.2 实验方法 | 第56-57页 |
| 5.2.1 裸鼠的MCF-7移植瘤模型建立 | 第56页 |
| 5.2.2 HER2-ENG T细胞体内抗肿瘤功能验证 | 第56-57页 |
| 5.3 结果与分析 | 第57-58页 |
| 5.3.1 裸鼠异种移植瘤模型建立 | 第57页 |
| 5.3.2 HER2-ENG T细胞在小鼠的体内具有抑瘤效果 | 第57-58页 |
| 5.4 讨论 | 第58-60页 |
| 第六章 结论与展望 | 第60-63页 |
| 6.1 结论 | 第60-61页 |
| 6.2 展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
