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解淀粉芽孢杆菌HAB-2抑菌化合物分离鉴定及关键基因调控机制研究

摘要第5-8页
Abstract第8-10页
1 引言第15-41页
    1.1 生物防治的研究进展第15页
    1.2 生防菌的研究进展第15-17页
        1.2.1 生防细菌的研究进展第15-16页
        1.2.2 生防真菌的研究进展第16页
        1.2.3 生防放线菌的研究进展第16-17页
    1.3 生防芽孢杆菌的研究进展第17-18页
    1.4 芽孢杆菌生防机制第18-28页
        1.4.1 菌种间的竞争作用第19页
        1.4.2 芽孢杆菌活性物质第19-25页
        1.4.3 诱导植物抗性第25-28页
    1.5 脂肽类物质合成调控基因第28-30页
        1.5.1 脂肽类物质关键合成酶sfp基因第28-29页
        1.5.2 脂肽类物质关键合成酶lpa基因第29-30页
    1.6 解淀粉芽孢杆菌研究进展第30页
    1.7 天然产物研究进展第30-36页
        1.7.1 常规的分离方法第31-32页
        1.7.2 常规的鉴定方法第32-33页
        1.7.3 芽孢杆菌抗菌脂肽的检测鉴定第33-36页
    1.8 生物技术研究进展第36-40页
        1.8.1 分子鉴定技术第36-37页
        1.8.2 显微技术第37-38页
        1.8.3 芽孢杆菌转化方法第38-39页
        1.8.4 基因定点敲除第39-40页
        1.8.5 芽孢杆菌基因敲除第40页
    1.9 研究目的及意义第40-41页
2 材料方法第41-67页
    2.1 供试菌株第41-42页
    2.2 主要仪器和试剂第42-43页
    2.3 培养基第43-46页
    2.4 HAB-2菌株菌种鉴定第46-49页
        2.4.1 形态学观察第46页
        2.4.2 分子生物学鉴定第46-49页
    2.5 抑菌作用测定第49-50页
    2.6 HAB-2菌株活性物质粗提第50页
        2.6.1 硫酸铵饱和沉淀法第50页
        2.6.2 酸沉淀法第50页
        2.6.3 有机溶剂萃取法第50页
        2.6.4 各类提取物活性测试第50页
    2.7 HAB-2菌株正丁醇提取物稳定性测定第50-51页
        2.7.1 紫外线稳定性第50-51页
        2.7.2 pH稳定性第51页
        2.7.3 热稳定性第51页
    2.8 脂肽类化合物分离纯化和鉴定第51-52页
        2.8.1 HAB-2菌株的发酵第51页
        2.8.2 飞行时间质谱MALDI-TOF -MS质谱鉴定第51页
        2.8.3 活性粗提物分离纯化第51-52页
    2.9 脂肽类化合物相关研究第52-59页
        2.9.1 脂肽类化合物合成基因扩增第52-53页
        2.9.2 脂肽类物质合成酶基因扩增第53-54页
        2.9.3 Southern杂交第54-56页
        2.9.4 基因定点敲除和回补第56-59页
    2.10 抑菌物质活性测定第59-65页
        2.10.1 芒果叶片离体试验第59-60页
        2.10.2 芒果果实保护试验第60页
        2.10.3 咪酰胺抑制芒果炭疽活性试验第60页
        2.10.4 番茄果实抑菌试验第60页
        2.10.5 番茄幼苗抑菌试验第60-61页
        2.10.6 抑菌活性物质对橡胶树白粉病的防治第61页
        2.10.7 抑藻活性检测试验第61-62页
        2.10.8 显微结构和超显微结构观察化合物H2对芒果炭疽病菌的影响第62页
        2.10.9 烟草过敏性反应第62页
        2.10.10 诱导烟草防卫反应第62-65页
    2.11 活性物质促生试验第65-66页
        2.11.1 番茄幼苗促生盆栽试验第65页
        2.11.2 对烟草种子促生影响第65-66页
        2.11.3 HAB-2菌株定殖研究第66页
        2.11.4 大田实验第66页
    2.12 斑马鱼毒性试验第66-67页
        2.12.1 急性毒性试验第66页
        2.12.2 斑马鱼胚胎发育指标第66-67页
3 结果与分析第67-116页
    3.1 HAB-2菌株的分类地位第67-69页
        3.1.1 形态学特征第67-68页
        3.1.2 HAB-2菌株在不同培养基上的生长形态情况:第68页
        3.1.3 16S rDNA分析第68-69页
        3.1.4 特异性基因序列排列分析第69页
    3.2 HAB-2菌株拮抗作用第69-72页
    3.3 发酵液提取物的抑菌活性第72-75页
        3.3.1 各种提取物的抑菌活性第72-73页
        3.3.2 抑菌活性物质的种类分析第73-75页
    3.4 HAB-2菌株正丁醇提取物的稳定性第75-77页
        3.4.1 紫外线稳定性第75-76页
        3.4.2 正丁醇提取物pH稳定性第76-77页
        3.4.3 热稳定性第77页
    3.5 脂肽类化合物分离纯化和鉴定第77-84页
        3.5.1 抑菌活性粗提物飞行时间质谱MALDI-TOF-MS检测第77-79页
        3.5.2 抑菌活性成分分离第79-82页
        3.5.3 化合物H2活性鉴定第82-84页
    3.6 咪酰胺抑制芒果炭疽病菌第84-85页
    3.7 显微观察化合物H2对芒果炭疽病病原菌孢子的影响第85-88页
    3.8 显微观察化合物H2对水稻白叶枯菌的影响第88-89页
    3.9 显微观察化合物H2对菠萝泛菌的影响第89-91页
    3.10 化合物H2处理水稻白叶枯菌株和菠萝泛菌相关基因表达量变化第91页
    3.11 化合物H2对斑马鱼的急性毒性和发育影响第91-92页
    3.12 抑菌物质活性测定第92-101页
        3.12.1 对芒果炭疽病菌在芒果离体叶片上的抑制作用第92-93页
        3.12.2 对芒果炭疽病菌在芒果果实上的抑制作用第93-94页
        3.12.3 对番茄早疫病在果实上的抑制作用第94-95页
        3.12.4 对番茄幼苗抑菌作用第95页
        3.12.5 对橡胶树白粉病菌分生孢子发育的影响第95-96页
        3.12.6 对橡胶树白粉病防治作用第96-97页
        3.12.7 对铜绿微囊藻的抑制作用第97-98页
        3.12.8 烟草过敏性反应第98-99页
        3.12.9 烟草防卫反应第99-101页
    3.13 对植物促生作用第101-106页
        3.13.1 对番茄幼苗促生作用第101-102页
        3.13.2 对烟草种子促生作用第102-103页
        3.13.3 HAB-2菌株在烟草根部定殖第103-104页
        3.13.4 正丁醇提取物对豇豆生长及病害的影响第104-106页
    3.14 HAB-2菌株基因组中脂肽类物质相关基因第106-116页
        3.14.1 合成脂肽类物质基因检测第106页
        3.14.2 脂肽类物质关键合成酶基因检测第106-107页
        3.14.3 sfp和lpaHAB-2基因Southern杂交第107-108页
        3.14.4 HAB-2菌株和模式菌B.subtilis 168抑菌活性对比第108页
        3.14.5 定点敲除lpaHAB-2基因第108-112页
        3.14.6 回补lpaHAB-2基因转入模式菌株B.subtilis168第112-116页
4 讨论第116-125页
    4.1 HAB-2菌株菌种鉴定和抑菌谱第116-117页
    4.2 活性成分分离鉴定及其抑菌活性第117-119页
    4.3 脂肽物质相关合成基因的研究第119-120页
    4.4 活性成分的作用机理第120-122页
    4.5 活性成分促进植物生长和定殖研究第122-125页
5 结论第125-127页
参考文献第127-142页
附图第142-148页
攻读学位期间发表和待发表学术论文、申请专利、获奖及项目资助情况第148-150页
致谢第150页

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