| 摘要 | 第2-3页 |
| abstract | 第3-4页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第11-17页 |
| 1.1 内源性逆转录病毒概述 | 第11页 |
| 1.2 内源性绵羊肺腺瘤病毒enJSRV概述 | 第11-12页 |
| 1.3 内源性绵羊肺腺瘤病毒与绵羊绒毛膜滋养层细胞 | 第12-13页 |
| 1.4 内源性绵羊肺腺瘤病毒与囊膜蛋白研究现状 | 第13-14页 |
| 1.5 内源性绵羊肺腺瘤病毒与外源性绵羊肺腺瘤病毒 | 第14-15页 |
| 1.6 绵羊肺腺瘤病毒exJSRV | 第15页 |
| 1.7 exJSRV致瘤机制 | 第15-16页 |
| 1.8 enJSRV对exJSRV的限制 | 第16页 |
| 1.9 研究目的与意义 | 第16-17页 |
| 2 试验一 OPA病羊肺组织基因组BAC文库的筛选 | 第17-30页 |
| 2.1 试验材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 主要材料 | 第17页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第17页 |
| 2.1.3 试验所用溶剂及其配制 | 第17页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第17-18页 |
| 2.2 试验方法 | 第18-22页 |
| 2.2.1 引物设计与合成 | 第18-19页 |
| 2.2.2 质粒的提取 | 第19页 |
| 2.2.3 PCR反应体系及反应条件 | 第19-22页 |
| 2.3 结果 | 第22-28页 |
| 2.3.1 gag基因PCR筛选结果 | 第22-23页 |
| 2.3.2 pol基因PCR筛选结果 | 第23-24页 |
| 2.3.3 env基因PCR筛选结果 | 第24页 |
| 2.3.4 pro基因PCR筛选结果 | 第24-25页 |
| 2.3.5 gag基因测序结果同源性分析 | 第25-26页 |
| 2.3.6 pro基因测序结果同源性分析 | 第26-27页 |
| 2.3.7 pol基因测序结果同源性分析 | 第27页 |
| 2.3.8 env基因测序结果同源性分析 | 第27-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-29页 |
| 2.5 小结 | 第29-30页 |
| 3 试验二 内源性绵羊肺腺瘤病毒全基因组序列测定与生物信息学分析 | 第30-40页 |
| 3.1 试验材料 | 第30页 |
| 3.1.1 主要材料 | 第30页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第30页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第30页 |
| 3.2 试验方法 | 第30-33页 |
| 3.2.1 enJSRV各基因的PCR引物设计与合成 | 第30-31页 |
| 3.2.2 enJSRV各基因的PCR扩增 | 第31页 |
| 3.2.3 enJSRV各基因与载体的连接转化 | 第31-32页 |
| 3.2.4 阳性克隆菌的筛选 | 第32页 |
| 3.2.5 重组质粒DNA的提取 | 第32页 |
| 3.2.6 重组阳性质粒PCR鉴定 | 第32页 |
| 3.2.7 重组阳性质粒双酶切鉴定 | 第32-33页 |
| 3.2.8 重组阳性质粒测序鉴定 | 第33页 |
| 3.2.9 生物信息学分析 | 第33页 |
| 3.3 结果 | 第33-38页 |
| 3.3.1 PCR及酶切鉴定结果 | 第33-34页 |
| 3.3.2 测序结果 | 第34-35页 |
| 3.3.3 enJSRV与exJSRV囊膜蛋白基本信息分析 | 第35页 |
| 3.3.4 enJSRV与exJSRV囊膜蛋白二级结构预测 | 第35页 |
| 3.3.5 enJSRV与exJSRV囊膜蛋白抗原表位参数预测 | 第35-36页 |
| 3.3.6 enJSRV与exJSRV囊膜蛋白信号肽预测 | 第36页 |
| 3.3.7 enJSRV与exJSRV囊膜蛋白跨膜结构预测 | 第36-37页 |
| 3.3.8 enJSRV与exJSRV囊膜蛋白结构域和功能预测 | 第37页 |
| 3.3.9 enJSRV与exJSRV囊膜蛋白亚细胞定位结果 | 第37-38页 |
| 3.4 讨论 | 第38-39页 |
| 3.5 小结 | 第39-40页 |
| 4 试验三 内源性绵羊肺腺瘤病毒env基因的原核表达及鉴定 | 第40-52页 |
| 4.1 试验材料 | 第40-41页 |
| 4.1.1 主要材料 | 第40页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第40页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第40-41页 |
| 4.2 试验方法 | 第41-45页 |
| 4.2.1 引物设计与合成 | 第41页 |
| 4.2.2 内源性Env原核表达载体的构建 | 第41-44页 |
| 4.2.3 重组表达质粒pET32a-env编码蛋白的原核表达 | 第44页 |
| 4.2.4 SDS-PAGE电泳分析 | 第44-45页 |
| 4.2.5 重组Env蛋白的原核诱导表达条件优化 | 第45页 |
| 4.2.6 Env蛋白的纯化 | 第45页 |
| 4.2.7 重组Env蛋白的Western blot鉴定 | 第45页 |
| 4.3 结果 | 第45-50页 |
| 4.3.1 重组表达质粒PCR和双酶切鉴定结果 | 第45-46页 |
| 4.3.2 序列同源性分析 | 第46-48页 |
| 4.3.3 重组Env蛋白SDS-PAGE分析结果 | 第48-49页 |
| 4.3.4 重组Env蛋白的纯化 | 第49页 |
| 4.3.5 重组Env蛋白Western blot鉴定结果 | 第49-50页 |
| 4.4 讨论 | 第50-51页 |
| 4.5 小结 | 第51-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-63页 |
| 作者简介 | 第63页 |
