| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 第1章 前言 | 第9-19页 |
| 1.1 核糖体 | 第9页 |
| 1.2 核糖体生物合成与细胞生长 | 第9-11页 |
| 1.3 核糖体蛋白 | 第11-12页 |
| 1.4 核糖体蛋白功能 | 第12-13页 |
| 1.5 酵母细胞的衰老与寿命 | 第13-14页 |
| 1.6 营养胁迫与抗逆性 | 第14-16页 |
| 1.7 TOR信号通路 | 第16-17页 |
| 1.8 未折叠蛋白与细胞寿命 | 第17-18页 |
| 1.9 本课题研究的目标及意义 | 第18-19页 |
| 第2章 材料与方法 | 第19-57页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-34页 |
| 2.1.1 质粒 | 第19-21页 |
| 2.1.2 菌种 | 第21页 |
| 2.1.3 酶及化学试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.1.5 培养基的配制 | 第23-30页 |
| 2.1.6 试剂的配制 | 第30-34页 |
| 2.1.7 抗体 | 第34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-57页 |
| 2.2.1 引物设计与PCR扩增 | 第34-35页 |
| 2.2.2 DNA产物纯化回收(天根超薄DNA产物纯化试剂盒) | 第35-36页 |
| 2.2.3 质粒DNA纯化回收(天根质粒小提试剂盒) | 第36页 |
| 2.2.4 酶切体系(NEB) | 第36-37页 |
| 2.2.5 酶连体系(TaKaRa) | 第37页 |
| 2.2.6 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备与转化 | 第37页 |
| 2.2.7 大肠杆菌落PCR | 第37-38页 |
| 2.2.8 酵母菌电转化 | 第38-39页 |
| 2.2.9 酵母菌落PCR | 第39-40页 |
| 2.2.10 酵母总RNA的抽提 | 第40-41页 |
| 2.2.11 RNA变性电泳 | 第41-42页 |
| 2.2.12 RT-PCR | 第42-43页 |
| 2.2.13 Spottingassay | 第43-44页 |
| 2.2.14 酵母菌在YEPD培养基中的生长曲线测量 | 第44页 |
| 2.2.15 酵母细胞用4%多聚甲醛固定 | 第44-45页 |
| 2.2.16 酵母细胞内氧自由基染色 | 第45页 |
| 2.2.17 更换培养基实验 | 第45-46页 |
| 2.2.18 Westernblot | 第46-50页 |
| 2.2.19 Polysome分析 | 第50-52页 |
| 2.2.19.1 酵母Polysomal和Non-polysomalRNA抽提 | 第51-52页 |
| 2.2.20 β-半乳糖苷酶活性检测 | 第52-53页 |
| 2.2.21 Isolationofaggregatedprotein | 第53-54页 |
| 2.2.22 银染方案 | 第54-55页 |
| 2.2.23 酵母菌周质蛋白的提取 | 第55-57页 |
| 第3章 结果与分析 | 第57-83页 |
| 3.1 课题前期工作介绍 | 第57页 |
| 3.2 实验结果 | 第57-83页 |
| 3.2.1 H_2O_2、NAC及低浓度rapamycin均可缓解Δ36B的生长缺陷 | 第57-60页 |
| 3.2.2 液体长期培养检测不同核糖体突变对其生长影响 | 第60-61页 |
| 3.2.3 FY251及核糖蛋白突变菌Δ36B,2A,2B,Δ36A在不同时间段的一些核糖蛋白表达量 | 第61-63页 |
| 3.2.4 FY251,Δ36B,2A,2B,Δ36A的氧自由基的含量 | 第63-64页 |
| 3.2.5 敲除酵母其他核糖体大亚基RPL7A,RPL7B,RPL11A,RPL11B的生长情况 | 第64-65页 |
| 3.2.6 敲除RPL36B后对RPL36A做一些改变的菌的生长情况 | 第65-67页 |
| 3.2.7 FY251,Δ36B,ADH1p-36AΔ36B,Δ36AintronΔ36B,36A+3flagΔ36B的核糖体组装情况 | 第67-70页 |
| 3.2.8 FY251,Δ36B,ADH1p-36AΔ36B,Δ36AintronΔ36B,36A+3flagΔ36B在36h时的氧自由基含量的检测 | 第70-72页 |
| 3.2.9 FY251,Δ36B,ADH1p-36AΔ36B,Δ36AintronΔ36B,36A+3flagΔ36B在36h时核糖蛋白的表达情况 | 第72-73页 |
| 3.2.10 FY251,Δ36B,ADH1p-36AΔ36B,Δ36AintronΔ36B,36A+3flagΔ36B在不同时期的lacZ活性 | 第73-75页 |
| 3.2.11 FY251,Δ36B,ADH1p-36AΔ36B,Δ36AintronΔ36B,36A+3flagΔ36B在不同的营养胁迫条件下的生长情况 | 第75-78页 |
| 3.2.12 FY251,Δ36B,ADH1p-36AΔ36B,Δ36AintronΔ36B,36A+3flagΔ36B的蛋白聚集情况 | 第78-80页 |
| 3.2.13 FY251,Δ36B的基因芯片数据分析 | 第80-83页 |
| 第4章 讨论与展望 | 第83-86页 |
| 4.1 讨论 | 第83-85页 |
| 4.2 展望 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-95页 |
