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内生荧光假单胞菌增加茅苍术倍半萜积累和多样性的机制研究

摘要第4-8页
Abstract第8-13页
缩略语表第14-22页
第1章 绪论第22-38页
    1.1 茅苍术第22-24页
        1.1.1 茅苍术生物学特性第22页
        1.1.2 茅苍术资源现状第22-23页
        1.1.3 茅苍术活性成分及药用价值第23-24页
    1.2 植物内生菌第24-25页
        1.2.1 内生菌的特性第24页
        1.2.2 内生菌与植物的互作第24-25页
    1.3 内生菌对植物生长和代谢的影响第25-36页
        1.3.1 内生菌促进植物的生长第25-26页
        1.3.2 内生菌促进植物次级代谢物的积累第26-27页
        1.3.3 内生菌诱导子促进植物次级代谢物的积累第27-28页
        1.3.4 共生微生物对植物激素信号转导的影响第28-33页
            1.3.4.1 植物和微生物互作中的植物激素平衡第28-29页
            1.3.4.2 微生物分泌激素对植物生长和代谢的影响第29-30页
            1.3.4.3 微生物对植物激素信号转导途径的干预第30-33页
            1.3.4.4 内生菌经激素信号促进植物次级代谢物的积累第33页
        1.3.5 共生微生物诱导植物活性氧的迸发第33-34页
        1.3.6 内生菌对植物生长和代谢的间接影响第34-36页
        1.3.7 内生菌提高中药材品质的开发与利用第36页
    1.4 本论文的研究内容和意义第36-38页
第2章 茅苍术内生细菌的分离及促挥发油积累菌株的筛选第38-62页
    2.1 材料与方法第38-43页
        2.1.1 茅苍术无菌组培苗系的建立和生长条件第38-39页
        2.1.2 内生细菌的分离第39页
        2.1.3 内生细菌的多样性分析第39-40页
        2.1.4 内生细菌的植物促生活性分析第40-41页
            2.1.4.1 固氮活性的分析第40页
            2.1.4.2 解磷活性的分析第40页
            2.1.4.3 解钾活性的分析第40页
            2.1.4.4 吲哚乙酸合成能力的分析第40-41页
        2.1.5 内生菌的接种和化学药品的处理第41页
        2.1.6 茅苍术挥发油的提取和气相色谱分析第41-42页
        2.1.7 茅苍术内源吲哚乙酸含量的测定第42页
        2.1.8 内生细菌ALEB7B的分子鉴定第42-43页
        2.1.9 内生细菌ALEB7B吲哚乙酸合成途径的分析第43页
        2.1.10 数据统计与分析第43页
    2.2 结果第43-58页
        2.2.1 茅苍术内生细菌的分离第43页
        2.2.2 茅苍术内生细菌的多样性分析第43-46页
            2.2.2.1 内生细菌的ARDRA分析第43-46页
            2.2.2.2 ARDRA聚类簇内菌株的BOX-PCR分析第46页
        2.2.3 茅苍术内生细菌植物促生活性的筛选第46-48页
        2.2.4 茅苍术内生固氮细菌nifH基因的扩增与16S rRNA序列的测定第48-50页
            2.2.4.1 nifH基因的扩增第48-49页
            2.2.4.2 16S rRNA序列的测定和系统发育树的构建第49-50页
        2.2.5 茅苍术内生细菌溶磷和发酵液pH值的测定第50-52页
            2.2.5.1 无机磷溶解量的测定第50-51页
            2.2.5.2 有机磷溶解量的测定第51-52页
        2.2.6 内生细菌ALEB7B显著促进茅苍术挥发油的积累第52-53页
        2.2.7 内生细菌ALEB7B的鉴定第53-55页
        2.2.8 荧光假单胞菌增加茅苍术中吲哚乙酸的含量第55页
        2.2.9 荧光假单胞菌经吲哚-3-乙酰胺途径合成吲哚乙酸第55-57页
        2.2.10 外源吲哚乙酸促进茅苍术挥发油的积累第57-58页
        2.2.11 1-萘氧乙酸部分逆转荧光假单胞菌对茅苍术挥发油积累的促进第58页
    2.3 讨论第58-62页
第3章 荧光假单胞菌拮抗茅苍术病原真菌罗耳阿太菌的作用机制第62-84页
    3.1 材料与方法第63-68页
        3.1.1 茅苍术无菌组培苗系的建立和生长条件第63页
        3.1.2 病原真菌SY4的分离与鉴定第63页
        3.1.3 荧光假单胞菌定殖的扫描电子显微镜观察第63页
        3.1.4 荧光假单胞菌和罗耳阿太菌间的拮抗第63-64页
        3.1.5 荧光假单胞菌和罗耳阿太菌养分利用的比较第64页
        3.1.6 荧光假单胞菌发酵液和挥发物拮抗真菌的效率第64-65页
        3.1.7 荧光假单胞菌挥发物的顶空固相微萃取和气相色谱-质谱联用鉴定第65页
        3.1.8 荧光假单胞菌发酵液二氯甲烷萃取物的拮抗真菌作用和活性物质鉴定第65页
        3.1.9 荧光假单胞菌释放抗生素和胞外水解酶的检测第65-66页
        3.1.10 2-哌啶酮、二甲基二硫醚、1-十一烯的抗真菌能力第66-67页
        3.1.11 内生细菌和病原真菌的挑战性接种第67-68页
        3.1.12 数据统计与分析第68页
    3.2 结果第68-82页
        3.2.1 病原真菌SY4的鉴定第68-70页
        3.2.2 荧光假单胞菌在茅苍术中的定殖第70页
        3.2.3 荧光假单胞菌抑制罗耳阿太菌的生长第70-72页
        3.2.4 荧光假单胞菌挥发物抑制罗耳阿太菌的生长第72-75页
        3.2.5 荧光假单胞菌发酵液二氯甲烷萃取物抑制罗耳阿太菌的生长第75-78页
        3.2.6 荧光假单胞菌产生的抗生素和胞外水解酶第78-80页
        3.2.7 荧光假单胞菌降低茅苍术的白绢病发病率第80-82页
    3.3 讨论第82-84页
第4章 荧光假单胞菌释放挥发性物质对茅苍术生长和挥发油积累的促进第84-98页
    4.1 材料与方法第84-87页
        4.1.1 茅苍术无菌组培苗系的建立和生长条件第84页
        4.1.2 内生细菌的接种第84-85页
        4.1.3 化学药品的处理第85-86页
        4.1.4 荧光假单胞菌在茅苍术中的定殖浓度第86页
        4.1.5 植株生长和光合参数的测定第86页
        4.1.6 茅苍术挥发油的提取和气相色谱分析第86页
        4.1.7 植物防御响应的分析第86页
        4.1.8 荧光假单胞菌挥发性物质的收集与鉴定第86-87页
        4.1.9 数据统计与分析第87页
    4.2 结果第87-95页
        4.2.1 荧光假单胞菌在茅苍术中的定殖第87-88页
        4.2.2 荧光假单胞菌挥发性物质促进茅苍术的生长和挥发油积累第88-89页
        4.2.3 荧光假单胞菌挥发性物质诱导的植物防御响应第89-90页
        4.2.4 荧光假单胞菌挥发性物质的鉴定第90-92页
        4.2.5 荧光假单胞菌含氮挥发物的促生作用和苯甲醛的促挥发油积累作用第92-93页
        4.2.6 苯甲醛诱导的茅苍术防御响应第93-94页
        4.2.7 茅苍术-荧光假单胞菌共生体释放细菌挥发物的检测第94-95页
    4.3 讨论第95-98页
第5章 荧光假单胞菌胞外蛋白和多糖诱导子对茅苍术倍半萜积累的促进第98-112页
    5.1 材料与方法第99-101页
        5.1.1 茅苍术无菌组培苗系的建立和生长条件第99页
        5.1.2 内生细菌的接种和诱导子的处理第99页
        5.1.3 内生细菌胞外蛋白的提取和纯化第99页
        5.1.4 内生细菌胞外多糖的提取和纯化第99页
        5.1.5 茅苍术挥发油的提取和气相色谱分析第99-100页
        5.1.6 植物RNA的提取和荧光定量PCR分析第100页
        5.1.7 内生细菌胞外多糖的组成鉴定第100页
        5.1.8 内生细菌胞外蛋白的分离第100页
        5.1.9 胶内蛋白的酶解第100-101页
        5.1.10 蛋白的MALDI-TOF MS和MS/MS分析第101页
        5.1.11 数据统计与分析第101页
    5.2 结果第101-109页
        5.2.1 荧光假单胞菌胞外蛋白和多糖促进茅苍术倍半萜的积累第101-102页
        5.2.2 荧光假单胞菌胞外蛋白和多糖对茅苍术倍半萜不同组分积累的影响第102-104页
        5.2.3 荧光假单胞菌胞外蛋白和胞外多糖对HMGR和DXR基因表达的影响第104-105页
        5.2.4 荧光假单胞菌胞外蛋白主成分的鉴定及其对茅苍术倍半萜积累的影响第105-106页
        5.2.5 荧光假单胞菌胞外多糖的组分鉴定第106-107页
        5.2.6 荧光假单胞菌胞外多糖水解单糖对茅苍术倍半萜积累的影响第107-108页
        5.2.7 荧光假单胞菌胞外蛋白和多糖诱导茅苍术过氧化氢的积累第108-109页
    5.3 讨论第109-112页
第6章 荧光假单胞菌诱导的活性氧直接增加茅苍术含氧倍半萜的含量和多样性第112-129页
    6.1 材料与方法第113-116页
        6.1.1 茅苍术无菌组培苗系的建立和生长条件第113页
        6.1.2 内生细菌的接种第113页
        6.1.3 荧光假单胞菌在茅苍术中的定殖浓度第113页
        6.1.4 化学药品的处理第113-115页
        6.1.5 光合作用的测定第115页
        6.1.6 植株可溶性糖、乙酰辅酶A、丙酮酸、丙二醛含量的测定第115页
        6.1.7 内源活性氧的检测和组织化学染色第115页
        6.1.8 茅苍术挥发油的提取和气相色谱分析第115页
        6.1.9 倍半萜体外氧化产物的鉴定第115页
        6.1.10 数据统计与分析第115-116页
    6.2 结果第116-126页
        6.2.1 荧光假单胞菌在茅苍术中的定殖动态第116页
        6.2.2 荧光假单胞菌诱导茅苍术活性氧的迸发和含氧倍半萜的积累第116-119页
        6.2.3 外源过氧化氢和单线态氧增加茅苍术中含氧倍半萜的积累第119-121页
        6.2.4 抗坏血酸逆转荧光假单胞菌引起的含氧倍半萜积累第121-122页
        6.2.5 过氧化氢和单线态氧化倍半萜的体外实验第122-124页
        6.2.6 倍半萜在茅苍术与荧光假单胞菌拮抗平衡互作中的功能第124-126页
    6.3 讨论第126-129页
第7章 荧光假单胞菌诱导茅苍术挥发油积累的活性氧和激素信号级联第129-144页
    7.1 材料与方法第129-131页
        7.1.1 茅苍术无菌组培苗系的建立和生长条件第129页
        7.1.2 内生细菌的接种第129页
        7.1.3 化学药品的处理第129-130页
        7.1.4 茅苍术挥发油的提取和气相色谱分析第130页
        7.1.5 植物内源过氧化氢含量的测定第130页
        7.1.6 植物内源赤霉素含量的测定第130页
        7.1.7 植物内源乙烯含量的测定第130页
        7.1.8 植物内源脱落酸含量的测定第130-131页
        7.1.9 植物RNA的提取及qPCR分析第131页
        7.1.10 HMGR和DXR活性测定第131页
        7.1.11 数据统计与分析第131页
    7.2 结果第131-140页
        7.2.1 荧光假单胞菌促进茅苍术挥发油的积累第131-132页
        7.2.2 内源过氧化氢参与荧光假单胞菌诱导的茅苍术挥发油积累第132-133页
        7.2.3 内源赤霉素参与荧光假单胞菌诱导的茅苍术挥发油积累第133-134页
        7.2.4 内源乙烯参与荧光假单胞菌诱导的茅苍术挥发油积累第134-135页
        7.2.5 内源脱落酸参与荧光假单胞菌诱导的茅苍术挥发油积累第135-136页
        7.2.6 赤霉素、乙烯、脱落酸是过氧化氢的下游信号第136-139页
        7.2.7 脱落酸是乙烯的下游信号第139页
        7.2.8 赤霉素和脱落酸增加HMGR和DXR的基因表达和酶活性第139-140页
    7.3 讨论第140-144页
第8章 全文总结与展望第144-147页
    8.1 主要结论第144-145页
    8.2 创新点第145页
    8.3 研究展望第145-147页
附录A 茅苍术挥发油的总离子流图第147-148页
附录B 茅苍术挥发油主成分的质谱图第148-149页
附录C 茅苍术挥发油组分气相检测的线性范围和最低检测限第149-150页
附录D 茅苍术挥发油组分气相检测的可靠性第150-151页
附录E 脱落酸标品的高效液相图谱第151-152页
参考文献第152-183页
在读期间发表的学术论文及研究成果第183-185页
在读期间所获荣誉第185-186页
致谢第186-187页

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