| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-20页 |
| 第一章 背景 | 第20-26页 |
| ·DNA甲基化与白血病 | 第20-23页 |
| ·MDS | 第23-24页 |
| ·AML | 第24页 |
| ·CML | 第24-26页 |
| 第二章 本论文研究的目的、方法及实验方案的设计、意义 | 第26-32页 |
| ·研究目的 | 第26-28页 |
| ·研究方法及技术 | 第28-30页 |
| ·甲基化特异性PCR (MSP) | 第28-29页 |
| ·MSP的引物设计注意要点 | 第29-30页 |
| ·实验方案的设计 | 第30页 |
| ·本研究的意义 | 第30-32页 |
| 第三章 GRAF基因启动子甲基化特异性PCR的建立和应用 | 第32-42页 |
| ·材料 | 第32-33页 |
| ·研究对象 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32-33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-38页 |
| ·骨髓单个核细胞分离和DNA制备 | 第33页 |
| ·DNA修饰 | 第33-34页 |
| ·GRAF基因启动子甲基化检测 | 第34-35页 |
| ·PCR产物回收与纯化 | 第35页 |
| ·重组载体构建 | 第35-36页 |
| ·重组质粒转化 | 第36页 |
| ·重组质拉提取 | 第36-37页 |
| ·质粒鉴定、测序 | 第37页 |
| ·质粒鉴定 | 第37页 |
| ·测序 | 第37页 |
| ·MSP的特异性检测 | 第37页 |
| ·MSP的重复性检测 | 第37页 |
| ·MSP的敏感性检测 | 第37页 |
| ·标本MSP检测 | 第37-38页 |
| ·结果 | 第38-40页 |
| ·MSP的特异性 | 第38页 |
| ·重复性 | 第38页 |
| ·敏感性 | 第38-39页 |
| ·测序结果 | 第39-40页 |
| ·标本的MSP检测结果 | 第40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| 第四章 MDS患者中CRAF基因甲基化检测及临床相关性分析 | 第42-48页 |
| ·材料和仪器 | 第42页 |
| ·病例资料 | 第42页 |
| ·试剂 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-43页 |
| ·骨髓单个核细胞分离和DNA制备 | 第42页 |
| ·DNA提取与修饰 | 第42页 |
| ·GRAF基因甲基化检测 | 第42页 |
| ·PCR产物回收与纯化 | 第42-43页 |
| ·重组载体构建 | 第43页 |
| ·重组质粒转化 | 第43页 |
| ·重组质拉提取 | 第43页 |
| ·质粒鉴定、测序 | 第43页 |
| ·细胞遗传学检查 | 第43页 |
| ·统计 | 第43页 |
| ·结果 | 第43-46页 |
| ·MDS患者中GRAF基因甲基化频率 | 第43-44页 |
| ·GRAF基因甲基化频率与MDS亚型的关系 | 第44页 |
| ·GRAF基因甲基化频率与MDS预后的关系 | 第44-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| 第五章 AML患者中GRAF基因甲基化检测及临床相关性分析 | 第48-54页 |
| ·材料和仪器 | 第48页 |
| ·病例资料 | 第48页 |
| ·试剂 | 第48页 |
| ·主要仪器 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-49页 |
| ·骨髓单个核细胞分离和DNA制备 | 第48页 |
| ·DNA提取与修饰 | 第48页 |
| ·GRAF基因甲基化检测 | 第48页 |
| ·PCR产物回收与纯化 | 第48页 |
| ·重组载体构建 | 第48页 |
| ·重组质粒转化 | 第48页 |
| ·重组质拉的提取 | 第48页 |
| ·质粒鉴定、测序 | 第48-49页 |
| ·细胞遗传学检查 | 第49页 |
| ·统计 | 第49页 |
| ·结果 | 第49-51页 |
| ·AML患者中GRAF基因甲基化频率 | 第49页 |
| ·GRAF基因甲基化频率与AML亚型的关系 | 第49-51页 |
| ·讨论 | 第51-54页 |
| 第六章 CML患者中GRAF基因甲基化改变及临床相关性分析 | 第54-60页 |
| ·材料和仪器 | 第54页 |
| ·病例资料 | 第54页 |
| ·试剂 | 第54页 |
| ·主要仪器 | 第54页 |
| ·方法 | 第54-55页 |
| ·骨髓单个核细胞分离和DNA制备 | 第54页 |
| ·DNA提取与修饰 | 第54页 |
| ·GRAF基因甲基化检测 | 第54页 |
| ·PCR产物回收与纯化 | 第54页 |
| ·重组载体的构建 | 第54页 |
| ·重组质粒转化 | 第54页 |
| ·重组质拉提取 | 第54页 |
| ·质粒鉴定、测序 | 第54页 |
| ·细胞遗传学检查 | 第54-55页 |
| ·统计 | 第55页 |
| ·结果 | 第55-58页 |
| ·CML患者中GRAF基因甲基化频率 | 第55页 |
| ·GRAF基因甲基化频率与CML分期的关系 | 第55-58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 第七章 EvaGreen实时定量PCR法检测急性髓系白血病GRAF基因表达 | 第60-66页 |
| ·材料和仪器 | 第60-61页 |
| ·病例资料 | 第60-61页 |
| ·试剂 | 第61页 |
| ·主要仪器 | 第61页 |
| ·方法 | 第61-62页 |
| ·细胞分离和RNA提取 | 第61页 |
| ·逆转录 | 第61页 |
| ·定性PCR扩增 | 第61页 |
| ·RQ-PCR阳性模板的构建 | 第61页 |
| ·RQ-PCR检测GRAF基因的表达 | 第61-62页 |
| ·统计方法 | 第62页 |
| ·结果 | 第62-64页 |
| ·RQ-PCR方法的敏感性、重复性、特异性 | 第62-63页 |
| ·GRAF基因在AML患者和对照组的表达 | 第63-64页 |
| ·AML患者GRAF基因表达水平与性别、年龄、血象关系 | 第64页 |
| ·AML患者FAB各亚型GRAF基因表达水平 | 第64页 |
| ·AML患者核型分组GRAF基因表达水平 | 第64页 |
| ·AML患者甲基化阳性组与阴性组GRAF基因表达水平 | 第64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| 第八章 结论 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 攻读硕士学位期间发表的文章及获奖 | 第75页 |
