水稻与尖细潜根线虫互作的OsXCP2和OsMLP基因筛选与克隆
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 英文缩略词表 | 第12-13页 |
| 试验流程图 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-24页 |
| 1 水稻内寄生线虫病 | 第14-17页 |
| 1.1 水稻潜根线虫 | 第14-16页 |
| 1.2 水稻根结线虫病 | 第16-17页 |
| 2 水稻与水稻内寄生线虫互作 | 第17-21页 |
| 2.1 水稻内寄生线虫侵染机制 | 第17-18页 |
| 2.1.1 改变水稻根部细胞结构 | 第17-18页 |
| 2.1.2 改变水稻根部细胞功能 | 第18页 |
| 2.2 水稻抗水稻内寄生线虫机制 | 第18-19页 |
| 2.2.1 调节代谢水平和重新配置营养运输 | 第18-19页 |
| 2.2.2 修饰与合成水稻细胞壁 | 第19页 |
| 2.2.3 防卫基因 | 第19页 |
| 2.3 植物激素在水稻与其内寄生线虫互作中的作用 | 第19-21页 |
| 3 相关技术介绍 | 第21-22页 |
| 3.1 Gateway克隆 | 第21页 |
| 3.2 RNAi技术 | 第21-22页 |
| 3.3 植物遗传转化 | 第22页 |
| 4 本研究相关基因研究进展 | 第22-23页 |
| 4.1 木质部半胱氨酸蛋白酶 | 第22-23页 |
| 4.2 类金属结合蛋白 | 第23页 |
| 5 试验目的及内容 | 第23页 |
| 5.1 试验目的 | 第23页 |
| 5.2 试验内容 | 第23页 |
| 6 资助项目 | 第23-24页 |
| 第二章 转录组数据分析 | 第24-38页 |
| 1 引言 | 第24页 |
| 2 方法 | 第24-26页 |
| 2.1 材料准备 | 第24页 |
| 2.2 比对与注释 | 第24页 |
| 2.3 新转录本鉴定与可变剪接分析 | 第24-25页 |
| 2.4 差异性表达分析 | 第25页 |
| 2.5 GO与KEGG分析 | 第25-26页 |
| 2.6 qRT-PCR验证 | 第26页 |
| 3 结果分析 | 第26-36页 |
| 3.1 结果统计与评估 | 第26-27页 |
| 3.2 AS分析 | 第27页 |
| 3.3 新转录本 | 第27-29页 |
| 3.4 基因差异表达分析 | 第29-33页 |
| 3.4.1 聚类分析 | 第30-31页 |
| 3.4.2 GO与KEGG分析 | 第31-33页 |
| 3.5 对线虫侵染的响应 | 第33-36页 |
| 3.5.1 水稻对线虫侵染的响应 | 第33-34页 |
| 3.5.2 感病水稻对线虫侵染的响应 | 第34页 |
| 3.5.3 抗病水稻对线虫侵染的响应 | 第34-35页 |
| 3.5.4 抗感水稻对线虫响应的差异 | 第35-36页 |
| 4 小结与讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 基因克隆及载体构建 | 第38-47页 |
| 1 引言 | 第38页 |
| 2 实验材料 | 第38页 |
| 3 实验方法 | 第38-43页 |
| 3.1 基因克隆 | 第38-40页 |
| 3.1.1 RNA提取 | 第38-39页 |
| 3.1.2 cDNA第一条链合成 | 第39页 |
| 3.1.3 纯化回收 | 第39页 |
| 3.1.4 连接 | 第39页 |
| 3.1.5 转化DH5α | 第39-40页 |
| 3.1.6 菌落PCR鉴定阳性克隆 | 第40页 |
| 3.2 生物信息学分析 | 第40页 |
| 3.3 过表达载体构建 | 第40-42页 |
| 3.3.1 质粒提取 | 第40-41页 |
| 3.3.2 添加酶切位点 | 第41页 |
| 3.3.3 双酶切 | 第41页 |
| 3.3.4 连接 | 第41-42页 |
| 3.3.5 转化与鉴定 | 第42页 |
| 3.3.6 双酶切鉴定 | 第42页 |
| 3.4 植物RNAi载体 | 第42-43页 |
| 3.4.1 入门载体构建 | 第42页 |
| 3.4.2 LR重组反应 | 第42-43页 |
| 4 结果与分析 | 第43-46页 |
| 4.1 orf克隆结果 | 第43页 |
| 4.2 生物信息学分析结果 | 第43-44页 |
| 4.2.1 OsXCP2序列信息 | 第43-44页 |
| 4.2.2 OsMLP序列信息 | 第44页 |
| 4.3 过表达载体构建结果 | 第44-45页 |
| 4.4 植物RNAi载体构建结果 | 第45-46页 |
| 4.4.1 入门载体构建结果 | 第45页 |
| 4.4.2 LR重组结果分析 | 第45-46页 |
| 5 本章小结 | 第46-47页 |
| 第四章 亚细胞定位及转基因植物获取 | 第47-59页 |
| 1 引言 | 第47页 |
| 2 实验材料 | 第47页 |
| 3 实验方法 | 第47-51页 |
| 3.1 工程农杆菌制备 | 第47-48页 |
| 3.1.1 感受态农杆菌制备 | 第47页 |
| 3.1.2 转化农杆菌 | 第47-48页 |
| 3.2 亚细胞定位 | 第48页 |
| 3.3 烟草遗传转化 | 第48-49页 |
| 3.4 水稻遗传转化 | 第49-50页 |
| 3.5 转基因植株鉴定 | 第50页 |
| 3.6 检测拷贝数 | 第50-51页 |
| 3.6.1 标准曲线绘制 | 第50-51页 |
| 3.6.2 拷贝数计算 | 第51页 |
| 3.7 表达量分析 | 第51页 |
| 4 结果分析 | 第51-58页 |
| 4.1转化GV3101 | 第51-52页 |
| 4.2 亚细胞定位结果分析 | 第52页 |
| 4.3 转基因植株鉴定 | 第52-55页 |
| 4.3.1 鉴定转基因烟草 | 第52-53页 |
| 4.3.2 鉴定转基因水稻 | 第53-55页 |
| 4.4 拷贝数 | 第55-57页 |
| 4.4.1 标准曲线 | 第55-56页 |
| 4.4.2 拷贝数计算 | 第56-57页 |
| 4.5 基因表达量 | 第57-58页 |
| 5 本章小结 | 第58-59页 |
| 第五章 总结与展望 | 第59-61页 |
| 1 总结 | 第59-60页 |
| 1.1 转录组测序结果分析 | 第59页 |
| 1.2 基因克隆及载体构建 | 第59页 |
| 1.3 亚细胞定位及转基因植物获取 | 第59-60页 |
| 2 展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 附录 | 第69-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 作者简历 | 第74页 |
