| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 一、研究背景 | 第9-12页 |
| 1 DENV研究现状 | 第9-10页 |
| 1.1 DENV生物学特征 | 第9页 |
| 1.2 DENV流行病学特征 | 第9页 |
| 1.3 DENV的传播途径 | 第9页 |
| 1.4 DENV的治疗现状 | 第9-10页 |
| 2 干扰素信号通路与USP18 | 第10-11页 |
| 2.1 干扰素信号通路 | 第10页 |
| 2.2 USP18 | 第10-11页 |
| 3 DENV与宿主固有免疫研究现状 | 第11页 |
| 4 研究目的及意义 | 第11-12页 |
| 4.1 研究目的 | 第11页 |
| 4.2 研究意义 | 第11-12页 |
| 5 研究技术路线 | 第12页 |
| 二、研究材料 | 第12-20页 |
| 1 实验仪器 | 第12-13页 |
| 2 实验耗材 | 第13-14页 |
| 3 实验试剂 | 第14-15页 |
| 4 实验试剂盒 | 第15-16页 |
| 5 菌株及培养基 | 第16页 |
| 6 细胞及培养基 | 第16页 |
| 7 转染质粒及载体 | 第16-17页 |
| 8 引物 | 第17页 |
| 9 实验试剂配制方法 | 第17-20页 |
| 三、研究方法 | 第20-41页 |
| 1 细胞培养 | 第20-21页 |
| 2 DENV-2病毒扩增 | 第21页 |
| 3 DENV-2滴度测定 | 第21-22页 |
| 4 DENV-2感染实验 | 第22页 |
| 5 细胞转染 | 第22-24页 |
| 6 α-干扰素(IFNα)刺激实验 | 第24页 |
| 7 总RNA提取 | 第24-25页 |
| 8 逆转录PCR | 第25页 |
| 9 荧光定量PCR | 第25-26页 |
| 10 双荧光报告基因实验 | 第26-27页 |
| 11 病毒基因的克隆和重组质粒的构建 | 第27-36页 |
| 12 细胞总蛋白质的提取 | 第36页 |
| 13 BCA法测蛋白质浓度 | 第36-37页 |
| 14 Western Blot | 第37-40页 |
| 15 免疫共沉淀(Co-IP)筛选与USP18相互作用的登革病毒蛋白 | 第40-41页 |
| 16 统计学分析 | 第41页 |
| 四、研究结果 | 第41-58页 |
| 1 DENV-2的制备、滴度的测定及细胞感染 | 第41-43页 |
| 1.1 DENV-2的制备 | 第41页 |
| 1.2 DENV-2滴度的测定 | 第41-42页 |
| 1.3 DENV-2能感染多种细胞 | 第42-43页 |
| 2 DENV-2感染后细胞中USP18的表达显著上升 | 第43-44页 |
| 3 USP18高表达促进DENV-2复制 | 第44-45页 |
| 4 敲低USP18的表达抑制DENV-2复制 | 第45-47页 |
| 4.1 筛选出抑制USP18表达效率最高的siRNA | 第45-46页 |
| 4.2 敲低USP18的表达抑制DENV-2复制 | 第46-47页 |
| 5 敲低USP18表达可以营救α-干扰素抗DENV-2的活性 | 第47-50页 |
| 6 敲低USP18的表达激活I型干扰素介导的Jak/STAT信号通路 | 第50-52页 |
| 6.1 敲低USP18的表达可以促进STAT1的磷酸化 | 第50-51页 |
| 6.2 敲低USP18的表达可以增强ISRE的活性 | 第51页 |
| 6.3 敲低USP18的表达可以促进其他ISGs的表达 | 第51-52页 |
| 7 DENV-2基因表达载体的成功构建,鉴定及表达验证 | 第52-56页 |
| 7.1 DENY-2各个基因片段成功连接到表达载体上 | 第52-54页 |
| 7.2 重组表达质粒的鉴定 | 第54-56页 |
| 7.3 重组表达质粒在蛋白水平表达验证 | 第56页 |
| 8 免疫共沉淀筛选出USP18可以和E, NS1和NS3蛋白发生相互作用 | 第56-58页 |
| 8.1 E,NS1和NS3蛋白可以与内源性USP18发生相互作用 | 第57-58页 |
| 8.2 E,NS1和NS3蛋白可以与过表达USP18发生相互作用 | 第58页 |
| 五、讨论 | 第58-60页 |
| 六、结论 | 第60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 英文缩略词 | 第65-67页 |
| 文献综述 | 第67-75页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 个人简历 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
