| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略语 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-24页 |
| 1.1 新生隐球菌 | 第14-17页 |
| 1.1.1 新生隐球菌生活史 | 第14页 |
| 1.1.2 新生隐球菌的分类 | 第14-15页 |
| 1.1.3 隐球菌毒力因子 | 第15-16页 |
| 1.1.4 毒力相关基因研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2 隐球菌病 | 第17-18页 |
| 1.2.1 隐球菌病的发生 | 第17页 |
| 1.2.2 隐球菌病检测与治疗 | 第17-18页 |
| 1.3 细胞自噬概述 | 第18-24页 |
| 1.3.1 自噬的类型 | 第18-19页 |
| 1.3.2 自噬相关基因(ATG)的研究 | 第19-21页 |
| 1.3.3 自噬的研究方法 | 第21-22页 |
| 1.3.4 自噬与病理学 | 第22-24页 |
| 第二章 引言 | 第24-28页 |
| 2.1 研究背景 | 第24页 |
| 2.2 研究目的及意义 | 第24-25页 |
| 2.3 研究内容 | 第25-26页 |
| 2.3.1 隐球菌自噬相关基因ATG5、ATG8和ATG12的鉴定及其敲除 | 第25页 |
| 2.3.2 隐球菌自噬相关基因ATG5、ATG8和ATG12的功能分析 | 第25-26页 |
| 2.4 技术路线 | 第26-28页 |
| 第三章 自噬基因ATG5、ATG8和ATG12的鉴定与分析 | 第28-40页 |
| 3.1 实验材料 | 第28-30页 |
| 3.1.1 实验菌株 | 第28页 |
| 3.1.2 质粒载体 | 第28页 |
| 3.1.3 仪器 | 第28页 |
| 3.1.4 主要试剂 | 第28-29页 |
| 3.1.5 溶液及缓冲液 | 第29页 |
| 3.1.6 培养基 | 第29-30页 |
| 3.2 实验方法 | 第30-35页 |
| 3.2.1 ATG5、ATG8和ATG12基因序列分析 | 第30页 |
| 3.2.2 EGFP-Atg5(Atg8、Atg12)荧光菌株的构建 | 第30-35页 |
| 3.3 结果与分析 | 第35-39页 |
| 3.3.1 ATG5、ATG8和ATG12基因序列分析 | 第35-36页 |
| 3.3.2 EGFP-Atg5(Atg8/Atg12)荧光菌株的构建 | 第36-37页 |
| 3.3.3 Atg5、Atg8和Atg12荧光融合蛋白在隐球菌中的细胞定位观察 | 第37-39页 |
| 3.4 结论与讨论 | 第39-40页 |
| 第四章 自噬基因缺失突变体获得及其应激表型分析 | 第40-60页 |
| 4.1 实验材料 | 第40-43页 |
| 4.1.1 实验菌株 | 第40页 |
| 4.1.2 质粒载体 | 第40页 |
| 4.1.3 仪器 | 第40页 |
| 4.1.4 主要试剂的配置 | 第40页 |
| 4.1.5 溶液及缓冲液 | 第40-41页 |
| 4.1.6 培养基 | 第41-43页 |
| 4.2 实验方法 | 第43-51页 |
| 4.2.1 细胞培养和大批量基因组提取(CTAB法) | 第43页 |
| 4.2.2 基因敲除 | 第43-44页 |
| 4.2.3 突变体菌株PCR筛选验证 | 第44-45页 |
| 4.2.4 隐球菌基因组DNA Southern杂交(DIG) | 第45-48页 |
| 4.2.5 交配实验以及a交配型突变株的获得 | 第48-49页 |
| 4.2.6 a交配型突变体鉴定 | 第49页 |
| 4.2.7 产黑色素 | 第49页 |
| 4.2.8 荚膜产生实验 | 第49页 |
| 4.2.9 应激表型实验 | 第49-50页 |
| 4.2.10 自噬观察实 | 第50页 |
| 4.2.11 自噬细胞生存率实验 | 第50页 |
| 4.2.12 氮饥饿spot assay筛选实验 | 第50-51页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第51-59页 |
| 4.3.1 △atg5、△atg8和△atg12自噬基因突变体及互补菌株的获得 | 第51-53页 |
| 4.3.2 △atg5、△atg8和△atg12突变株应激表型鉴定与分析 | 第53-59页 |
| 4.4 结论与讨论 | 第59-60页 |
| 第五章 自噬基因缺失突变体致病性分析以及不产孢机理 | 第60-70页 |
| 5.1 实验材料 | 第60页 |
| 5.1.1 实验菌株 | 第60页 |
| 5.1.2 质粒载体 | 第60页 |
| 5.1.3 实验器材 | 第60页 |
| 5.1.4 主要试剂的配置 | 第60页 |
| 5.1.5 溶液及缓冲液 | 第60页 |
| 5.2 实验方法 | 第60-62页 |
| 5.2.1 自噬突变体不产孢机理分析 | 第60页 |
| 5.2.2 DAPI染色 | 第60-61页 |
| 5.2.3 老鼠滴鼻感染 | 第61页 |
| 5.2.4 组织载菌量统计 | 第61-62页 |
| 5.2.5 病理组织切片观察 | 第62页 |
| 5.3 实验结果与分析 | 第62-67页 |
| 5.3.1 △atg5、△atg8和△atg12自噬突变株不产孢机理研究 | 第62页 |
| 5.3.2 绿色荧光核定位载体构建 | 第62页 |
| 5.3.3 核定位绿色荧光菌株获得 | 第62-63页 |
| 5.3.4 绿色荧光核定位菌株交配后核定位观察 | 第63-64页 |
| 5.3.5 红色荧光Nop1- mCherry突变体菌株的获得以及与DAPI核共定位 | 第64-65页 |
| 5.3.6 红色荧光Nop1-mCherry突变体菌株交配后核定位观察 | 第65-66页 |
| 5.3.7 △atg5、△atg8和△atg12自噬突变株致病性分析 | 第66-67页 |
| 5.4 结论与讨论 | 第67-70页 |
| 第六章 总结与展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-82页 |
| 附录 | 第82-86页 |
| 在校期间参加的研究课题 | 第86-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
