| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 综述 | 第12-20页 |
| 1.1 鱼类低氧研究进展 | 第12-16页 |
| 1.2 HO1的保护作用 | 第16-17页 |
| 1.3 HO1与低氧的关系 | 第17-19页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第19-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第20页 |
| 2.2 主要仪器设备 | 第20-21页 |
| 2.3 引物序列 | 第21页 |
| 2.4 试剂盒和主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.4.1 试剂盒 | 第21-22页 |
| 2.4.2 主要试剂 | 第22页 |
| 2.4.3 载体 | 第22页 |
| 2.5 实验方法 | 第22-34页 |
| 2.5.1 细胞培养 | 第22-23页 |
| 2.5.2 药物配制 | 第23页 |
| 2.5.3 低氧处理 | 第23页 |
| 2.5.4 细胞总RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.5.5 反转录 | 第24页 |
| 2.5.6 荧光定量PCR | 第24-25页 |
| 2.5.7 Hochest染色 | 第25页 |
| 2.5.8 DNA Ladder检测 | 第25-26页 |
| 2.5.9 Caspase 3活性检测 | 第26-27页 |
| 2.5.10 基因组DNA的提取 | 第27页 |
| 2.5.11 基因克隆 | 第27-29页 |
| 2.5.12 PCR产物回收 | 第29页 |
| 2.5.13 载体构建 | 第29-30页 |
| 2.5.14 质粒小量提取 | 第30-31页 |
| 2.5.15 无内毒素质粒的提取 | 第31-32页 |
| 2.5.16 mRNA的体外转录 | 第32-33页 |
| 2.5.17 显微注射 | 第33-34页 |
| 第三章 结果与分析 | 第34-48页 |
| 3.1 低氧对斑马鱼ZF4细胞ho1基因表达的影响 | 第34页 |
| 3.2 低氧条件下Ho1对斑马鱼ZF4细胞生存力的影响 | 第34-37页 |
| 3.2.1 低氧条件下抑制Ho1.表达对斑马鱼ZF4细胞活力的影响 | 第34-36页 |
| 3.2.2 低氧条件下抑制Ho1表达对斑马鱼ZF4细胞形态的影响 | 第36-37页 |
| 3.3 低氧条件下Ho1对斑马鱼ZF4细胞凋亡的影响 | 第37-40页 |
| 3.3.1 Hochest染色法检测 | 第37-38页 |
| 3.3.2 DNA Ladder法检测 | 第38-39页 |
| 3.3.3 Caspase 3活性检测 | 第39-40页 |
| 3.4 转基因斑马鱼载体的构建 | 第40-48页 |
| 3.4.1 Drho1启动子的克隆和pDrho1-Pro-GFP表达载体的构建 | 第40-42页 |
| 3.4.2 鲫鱼Caho1 ORF和斑马鱼hsp70启动子的克隆及表达载体的构建 | 第42-45页 |
| 3.4.3 斑马鱼ho1启动子和hsp70启动子的暂时性表达分析 | 第45-47页 |
| 3.4.4 转基因斑马鱼的构建和鉴定 | 第47-48页 |
| 第四章 讨论 | 第48-51页 |
| 4.1 Ho1对鱼类的低氧保护作用 | 第48-49页 |
| 4.2 转基因斑马鱼的构建 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 攻读学位期间论文发表情况 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
