重组人心肌肌钙蛋白I构建、表达及纯化
| 内容提要 | 第1-6页 |
| 英文缩略词 | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第7-15页 |
| 一 cTnI的结构及特性 | 第8-9页 |
| 二cTnI的临床应用 | 第9-15页 |
| 第2章 重组人心肌肌钙蛋白Ⅰ构建、表达及纯化 | 第15-17页 |
| 第3章 材料与方法 | 第17-30页 |
| ·主要材料和试剂 | 第17-18页 |
| ·主要仪器 | 第18页 |
| ·方法 | 第18-30页 |
| 第4章 实验结果 | 第30-36页 |
| ·RT-PCR获得目的基因 | 第30页 |
| ·重组克隆质粒的双酶切及PCR鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组克隆质粒的测序鉴定 | 第31页 |
| ·重组原核表达质粒的鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组菌的表达筛选 | 第32页 |
| ·最适IPTG浓度的优化 | 第32页 |
| ·重组菌的表达时间动力学分析 | 第32-33页 |
| ·重组蛋白的可溶性检查 | 第33页 |
| ·镍凝胶亲和层析纯化目的蛋白 | 第33-34页 |
| ·Western blotting分析 | 第34页 |
| ·二喹啉甲酸(BCA)法测定蛋白含量 | 第34-36页 |
| 第5章 讨论 | 第36-42页 |
| ·原核表达系统中获得高效表达的人重组蛋白 | 第36页 |
| ·目的基因cTnI的获得 | 第36-37页 |
| ·准备表达载体 | 第37页 |
| ·重组表达载体的构建和鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第38页 |
| ·包涵体的提取 | 第38-39页 |
| ·蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| ·Western blotting鉴定 | 第40页 |
| ·包涵体的复性 | 第40-42页 |
| 第6章 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 中文摘要 | 第49-52页 |
| ABSTRACT | 第52-54页 |
