| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-19页 |
| 1.1 弓形虫及弓形虫病简述 | 第12-14页 |
| 1.1.1 病原体 | 第12-13页 |
| 1.1.2 生活史及传播 | 第13页 |
| 1.1.3 弓形虫病及流行 | 第13-14页 |
| 1.2 CRISPR-Cas9介导的弓形虫基因编辑技术 | 第14-15页 |
| 1.2.1 CRISPR/Cas9系统简介 | 第14页 |
| 1.2.2 应用于弓形虫的基因筛选标记 | 第14-15页 |
| 1.2.3 CRISPR/Cas9技术在弓形虫中的应用 | 第15页 |
| 1.3 弓形虫疫苗的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.3.1 传统疫苗研究 | 第16页 |
| 1.3.2 基于毒力基因敲除的弱毒疫苗 | 第16-17页 |
| 1.4 弓形虫MORN基因的研究进展 | 第17页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第17-19页 |
| 第二章 弓形虫MORN2基因缺失株的构建及表型研究 | 第19-31页 |
| 2.1 材料方法 | 第19-26页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第19页 |
| 2.1.2 虫株与细胞 | 第19页 |
| 2.1.3 试剂与仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.4 主要溶液的配置 | 第20页 |
| 2.1.5 MORN2基因的CRISPR/Cas9质粒构建 | 第20-23页 |
| 2.1.6 MORN2基因同源臂的构建 | 第23-24页 |
| 2.1.7 电转染弓形虫速殖子 | 第24-25页 |
| 2.1.8 阳性单克隆的筛选 | 第25-26页 |
| 2.1.9 噬斑试验 | 第26页 |
| 2.1.10 小鼠体内毒力试验 | 第26页 |
| 2.2 结果 | 第26-29页 |
| 2.2.1 MORN2靶向的CRISPR/Cas9质粒 | 第26-27页 |
| 2.2.2 DHFR抗性的MORN2同源片段 | 第27-28页 |
| 2.2.3 阳性单克隆株的筛选 | 第28页 |
| 2.2.4 噬斑试验 | 第28-29页 |
| 2.2.5 小鼠毒力试验 | 第29页 |
| 2.3 讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 弓形虫MORN1基因缺失株的构建及免疫保护力评价 | 第31-47页 |
| 3.1 材料方法 | 第31-36页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第31页 |
| 3.1.2 虫株与细胞 | 第31页 |
| 3.1.3 主要溶液的配制 | 第31页 |
| 3.1.4 MORN1基因的CRISPR/Cas9质粒构建 | 第31页 |
| 3.1.5 MORN1同源臂的构建 | 第31-32页 |
| 3.1.6 电转染弓形虫速殖子 | 第32页 |
| 3.1.7 阳性克隆的筛选 | 第32页 |
| 3.1.8 单克隆株的免疫荧光鉴定 | 第32-33页 |
| 3.1.9 免疫效果评价 | 第33-36页 |
| 3.1.10 统计学分析 | 第36页 |
| 3.2 结果 | 第36-44页 |
| 3.2.1 MORN1靶向的CRISPR/Cas9质粒 | 第36-37页 |
| 3.2.2 DHFR抗性的MORN1同源片段 | 第37-38页 |
| 3.2.3 阳性克隆的筛选 | 第38页 |
| 3.2.4 单克隆株的免疫荧光鉴定 | 第38-39页 |
| 3.2.5 ΔMORN1缺失株毒力检测 | 第39页 |
| 3.2.6 免疫鼠Ig G、Ig G1及Ig G2a抗体水平 | 第39-40页 |
| 3.2.7 免疫鼠淋巴细胞增殖能力 | 第40页 |
| 3.2.8 免疫鼠细胞因子水平 | 第40-41页 |
| 3.2.9 RH、PYS、Tg C7株的急性感染 | 第41页 |
| 3.2.10 Ⅱ型PRU株的慢性感染 | 第41-42页 |
| 3.2.11 先天性感染试验 | 第42-44页 |
| 3.3 讨论 | 第44-47页 |
| 第四章 全文结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 作者简介 | 第54页 |
