| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 中英文缩略词一览表 | 第12-14页 |
| 第1章 前言 | 第14-40页 |
| 1.1 肿瘤概述 | 第14-24页 |
| 1.1.1 引言 | 第14页 |
| 1.1.2 肿瘤基本特征与研究进展 | 第14-21页 |
| 1.1.3 结直肠癌的生物学特征及其研究进展 | 第21-24页 |
| 1.2 膜连蛋白A2(Annexin A2,AXNA2) | 第24-29页 |
| 1.2.1 引言 | 第24-26页 |
| 1.2.2 ANXA2与肿瘤 | 第26-29页 |
| 1.3 组织纤溶酶原激活因子(tissue plasminogen activator,tPA) | 第29-32页 |
| 1.3.1 引言 | 第29-30页 |
| 1.3.2 tPA与肿瘤 | 第30-32页 |
| 1.4 基因敲除技术 | 第32-36页 |
| 1.4.1 引言 | 第32-33页 |
| 1.4.2 传统基因敲除 | 第33页 |
| 1.4.3 条件性基因敲除 | 第33-34页 |
| 1.4.4 靶向核酸酶技术 | 第34-36页 |
| 1.4.5 基因敲除技术的应用与前景 | 第36页 |
| 1.5 课题立题依据及其创新性 | 第36-40页 |
| 第2章 ANXA2与结直肠癌细胞行为关系的进一步研究 | 第40-60页 |
| 2.1 引言 | 第40页 |
| 2.2 实验材料、相关试剂及仪器设备 | 第40-46页 |
| 2.2.1 细胞系 | 第40页 |
| 2.2.2 相关试剂和仪器设备 | 第40-42页 |
| 2.2.3 主要试剂及其配制 | 第42-46页 |
| 2.3 实验方法 | 第46-53页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第46-48页 |
| 2.3.2 ANXA2敲除细胞系的建立与鉴定 | 第48-51页 |
| 2.3.3 细胞增殖力检测 | 第51-52页 |
| 2.3.4 细胞运动力检测 | 第52-53页 |
| 2.4 实验结果 | 第53-58页 |
| 2.4.1 总蛋白定量(BCA蛋白定量法) | 第53页 |
| 2.4.2 ANNX2蛋白表达水平检测结果 | 第53-54页 |
| 2.4.3 ANXA2促进caco2细胞增殖 | 第54页 |
| 2.4.4 ANXA2促进caco2细胞迁移 | 第54-57页 |
| 2.4.5 讨论 | 第57-58页 |
| 2.5 小结 | 第58-60页 |
| 第3章 ANXA2基因敲除结直肠癌细胞的蛋白组学初步研究 | 第60-86页 |
| 3.1 引言 | 第60-61页 |
| 3.2 实验材料、相关试剂与仪器设备 | 第61-64页 |
| 3.2.1 细胞系 | 第61页 |
| 3.2.2 相关试剂和仪器设备 | 第61-62页 |
| 3.2.3 主要试剂及其配制 | 第62-64页 |
| 3.3 实验方法 | 第64-69页 |
| 3.3.1 双向电泳 | 第64-68页 |
| 3.3.2 SDS-PHAGE凝胶图谱分析 | 第68页 |
| 3.3.3 AB SCIEX MALDI TOF-TOF 5800质谱系统检测鉴定蛋白质 | 第68页 |
| 3.3.4 生物信息学分析 | 第68-69页 |
| 3.4 实验结果 | 第69-78页 |
| 3.4.1 BCA蛋白含量测定结果 | 第69页 |
| 3.4.2 双向电泳SDS-PAGE凝胶图谱分析结果 | 第69-72页 |
| 3.4.3 质谱检测鉴定结果 | 第72-74页 |
| 3.4.4 生物信息学分析结果 | 第74-78页 |
| 3.5 讨论 | 第78-85页 |
| 3.6 小结 | 第85-86页 |
| 第4章 tPA基因敲除细胞系的试建立 | 第86-106页 |
| 4.1 引言 | 第86-89页 |
| 4.2 实验材料、相关试剂及仪器设备 | 第89页 |
| 4.2.1 细胞系 | 第89页 |
| 4.2.2 相关试剂和仪器设备 | 第89页 |
| 4.2.3 主要试剂及其配制 | 第89页 |
| 4.3 实验方法 | 第89-96页 |
| 4.3.1 TALEN设计方法 | 第89-90页 |
| 4.3.2 TALEN设计原则 | 第90页 |
| 4.3.3 tPA TALEN的设计与构建 | 第90-91页 |
| 4.3.4 tPA TALEN质粒的小量制备及质粒样品的检测 | 第91-93页 |
| 4.3.5 tPA TALEN质粒的鉴定 | 第93页 |
| 4.3.6 细胞转染以及抗性筛选 | 第93-94页 |
| 4.3.7 细胞单克隆化 | 第94-95页 |
| 4.3.8 细胞基因组DNA的小量制备及DNA样品的检测 | 第95-96页 |
| 4.3.9 细胞阳性克隆的初步鉴定 | 第96页 |
| 4.4 实验结果 | 第96-105页 |
| 4.4.1 tPA TALEN的设计 | 第96-99页 |
| 4.4.2 tPA TALEN质粒样品的检测结果 | 第99-100页 |
| 4.4.3 tPA TALEN质粒鉴定的结果 | 第100-103页 |
| 4.4.4 细胞转染结果 | 第103页 |
| 4.4.5 细胞单克隆化结果 | 第103页 |
| 4.4.6 细胞单克隆基因组DNA样品的检测结果 | 第103-104页 |
| 4.4.7 细胞阳性克隆的初步鉴定 | 第104-105页 |
| 4.5 讨论 | 第105页 |
| 4.6 小结 | 第105-106页 |
| 研究总结与展望 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-127页 |
| 附录 | 第127-143页 |
| 致谢 | 第143-144页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第144页 |
