| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| 第一部分：文献综述 | 第13-49页 |
| 第一章 精原干细胞的研究进展 | 第13-23页 |
| 1.1 精原干细胞与精子发生 | 第13-14页 |
| 1.2 精原干细胞的分离纯化 | 第14-15页 |
| 1.3 精原干细胞的表面分子标记 | 第15-16页 |
| 1.4 精原干细胞的免疫磁珠分选 | 第16-17页 |
| 1.5 小鼠精原干细胞的培养 | 第17-19页 |
| 1.6 小鼠精原干细胞的移植技术 | 第19-20页 |
| 1.7 影响小鼠精原干细胞自我更新及分化的主要因子 | 第20-23页 |
| 第二章 表观遗传学研究进展 | 第23-31页 |
| 2.1 表观遗传学与表观遗传学调控 | 第23-24页 |
| 2.2 DNA 甲基化 | 第24-26页 |
| 2.3 组蛋白修饰 | 第26-27页 |
| 2.4 表观遗传学调控相关研究技术 | 第27-31页 |
| 2.4.1 DNA 甲基化相关分析技术 | 第27-29页 |
| 2.4.2 组蛋白修饰相关分析技术 | 第29-31页 |
| 第三章 H3K9me3 及其甲基化酶 ESET 的研究进展 | 第31-43页 |
| 3.1 组蛋白甲基化修饰研究进展 | 第31-35页 |
| 3.1.1 H3K27 甲基化修饰 | 第31-32页 |
| 3.1.2 H3K4 甲基化修饰 | 第32-33页 |
| 3.1.3 H3K9 甲基化修饰 | 第33-34页 |
| 3.1.4 H4K20 甲基化修饰 | 第34-35页 |
| 3.2 组蛋白甲基化相关酶类研究进展 | 第35-37页 |
| 3.3 H3K9me3 的研究进展 | 第37-39页 |
| 3.4 ESET 的研究进展 | 第39-43页 |
| 第四章 精子发生过程中的表观遗传学调控 | 第43-49页 |
| 4.1 精子发生过程中的 DNA 甲基化修饰 | 第43-44页 |
| 4.2 精子发生过程中的组蛋白修饰 | 第44-46页 |
| 4.3 精原干细胞与表观遗传学调控 | 第46-49页 |
| 第二部分 试验部分 | 第49-105页 |
| 第五章 ESET 在小鼠睾丸组织中的时序表达及定位研究 | 第49-59页 |
| 5.1 材料与方法 | 第49-54页 |
| 5.1.1 主要试剂及溶液配制 | 第49-50页 |
| 5.1.2 仪器设备 | 第50页 |
| 5.1.3 小鼠不同器官及不同发育阶段睾丸组织的 RNA 及蛋白提取 | 第50-51页 |
| 5.1.4 实时定量 PCR 及 Western blot 检测 | 第51-52页 |
| 5.1.5 不同日龄小鼠睾丸组织的石腊包埋及切片 | 第52-53页 |
| 5.1.6 小鼠睾丸组织 ESET 及 H3K9me3 的免疫荧光染色 | 第53-54页 |
| 5.2 结果及分析 | 第54-58页 |
| 5.2.1 ESET 在小鼠不同器官组织中的表达检测 | 第54页 |
| 5.2.2 ESET 在小鼠不同发育阶段睾丸组织中的表达检测 | 第54-55页 |
| 5.2.3 H3K9me3 在小鼠不同发育阶段睾丸组织中的水平检测 | 第55页 |
| 5.2.4 小鼠睾丸组织中 ESET 的定位分析 | 第55-56页 |
| 5.2.5 小鼠睾丸组织中 H3K9me3 的定位分析 | 第56-57页 |
| 5.2.6 ESET 与 H3K9me3 在小鼠精原干细胞中的定位 | 第57-58页 |
| 5.3 讨论 | 第58-59页 |
| 第六章 Eset-shRNA 干扰序列的筛选及其干扰慢病毒的制备 | 第59-71页 |
| 6.1 材料与方法 | 第59-65页 |
| 6.1.1 试验材料及试剂 | 第59-60页 |
| 6.1.2 主要仪器设备 | 第60页 |
| 6.1.3 Eset-shRNA 序列的设计及合成 | 第60页 |
| 6.1.4 CD513B-U6-Eset-shRNA 载体的构建 | 第60-62页 |
| 6.1.5 CD513B-U6-Eset-shRNA 干扰序列的筛选 | 第62-64页 |
| 6.1.6 Eset 干扰慢病毒的包装及滴度测定 | 第64页 |
| 6.1.7 Eset 干扰慢病毒干扰效率测定 | 第64-65页 |
| 6.2 结果与分析 | 第65-69页 |
| 6.2.1 CD513B-U6-Eset-shRNA 载体的构建及鉴定 | 第65页 |
| 6.2.2 pDsRed-Mus-Eset 真核表达载体的构建 | 第65-66页 |
| 6.2.3 CD513B-U6-Eset-shRNA 干扰序列的筛选 | 第66-67页 |
| 6.2.4 Eset 干扰慢病毒的包装及滴度测定 | 第67页 |
| 6.2.5 Eset 干扰慢病毒的干扰效率检测 | 第67-69页 |
| 6.3 讨论 | 第69-71页 |
| 第七章 小鼠精原干细胞中 ESET 下游基因的预测及分析 | 第71-83页 |
| 7.1 材料与方法 | 第71-75页 |
| 7.1.1 主要试剂及溶液配制 | 第71页 |
| 7.1.2 试验仪器 | 第71-72页 |
| 7.1.3 小鼠精原干细胞的 MACS 分选及鉴定 | 第72-73页 |
| 7.1.4 Eset 干扰慢病毒感染小鼠精原干细胞 | 第73-74页 |
| 7.1.5 Eset 干扰效率的检测 | 第74页 |
| 7.1.6 病毒感染精原干细胞的芯片分析 | 第74-75页 |
| 7.2 结果与分析 | 第75-80页 |
| 7.2.1 小鼠睾丸组织的消化 | 第75页 |
| 7.2.2 小鼠精原干细胞的分选鉴定 | 第75-76页 |
| 7.2.3 Eset 干扰慢病毒感染小鼠的精原干细胞 | 第76-77页 |
| 7.2.4 芯片分析 | 第77-80页 |
| 7.3 讨论 | 第80-83页 |
| 第八章 小鼠精原干细胞中 ESET 的功能研究 | 第83-93页 |
| 8.1 材料与方法 | 第83-87页 |
| 8.1.1 主要试剂及溶液配制 | 第83页 |
| 8.1.2 试验仪器 | 第83-84页 |
| 8.1.3 小鼠精原干细胞的分选、病毒感染及体外培养 | 第84页 |
| 8.1.4 ESET-KD、NC 及 Mock 组精原干细胞的 RNA 及蛋白分析 | 第84-85页 |
| 8.1.5 小鼠精原干细胞的移植及分析 | 第85-87页 |
| 8.2 结果与分析 | 第87-92页 |
| 8.2.1 ESET 影响小鼠精原干细胞存活的体外研究 | 第87-88页 |
| 8.2.2 凋亡相关基因及蛋白的检测 | 第88页 |
| 8.2.3 慢病毒感染精原干细胞的 TUNEL 检测 | 第88-89页 |
| 8.2.4 精原干细胞的移植 | 第89-90页 |
| 8.2.5 精原干细胞移植后受体小鼠的分析 | 第90-92页 |
| 8.3 讨论 | 第92-93页 |
| 第九章 ESET 影响小鼠精原干细胞存活的表观机制 | 第93-105页 |
| 9.1 材料与方法 | 第93-99页 |
| 9.1.1 主要试剂及细胞系 | 第93页 |
| 9.1.2 试验仪器 | 第93-94页 |
| 9.1.3 C18-4 细胞系的 siRNA 转染 | 第94页 |
| 9.1.4 ESET 下游基因的定量 PCR 检测 | 第94页 |
| 9.1.5 ESET 及 H3K9me3 抗体的 ChIP 试验 | 第94-98页 |
| 9.1.6 ESET 与 DNMT3A 的蛋白质免疫共沉淀试验 | 第98页 |
| 9.1.7 C18-4 细胞的 BSP 分析 | 第98-99页 |
| 9.2 结果与分析 | 第99-103页 |
| 9.2.1 Eset 下游候选基因的鉴定 | 第99-100页 |
| 9.2.2 C18-4 细胞系中 Eset 基因的干扰及其下游基因的表达检测 | 第100页 |
| 9.2.3 Eset 下游基因启动子 H3K9me3 水平的检测 | 第100-101页 |
| 9.2.4 ESET-siRNA 与 Cox4i2-siRNA 的共转染试验 | 第101-102页 |
| 9.2.5 C18-4 细胞中 ESET 与 DNMT3A 的免疫共沉淀分析 | 第102页 |
| 9.2.6 Cox4i2 与 Dazl 基因启动子 DNA 甲基化分析 | 第102-103页 |
| 9.3 讨论 | 第103-105页 |
| 结论 | 第105-107页 |
| 创新点 | 第107页 |
| 下一步研究工作 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-125页 |
| 缩略词表（Abbreviations） | 第125-127页 |
| 致谢 | 第127-129页 |
| 作者简介及博士期间发表及在投的文章如下 | 第129页 |
