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羟基化维生素D3的菌种筛选及离子液体双相催化的初步研究

致谢第5-6页
摘要第6-7页
Abstract第7-8页
1 绪论第12-25页
    1.1 维生素D_3与羟基维生素D_3概述第12-14页
        1.1.1 维生素D_3与羟基维生素D_3的结构与性质第12-13页
        1.1.2 羟基维生素D_3的应用第13-14页
    1.2 羟基维生素D_3的生产第14-18页
        1.2.1 羟基维生素D_3的化学合成第14-16页
        1.2.2 羟基维生素D_3的动物细胞生物催化第16页
        1.2.3 羟基维生素D_3的微生物催化第16-17页
        1.2.4 基因工程技术在羟基维生素D_3生物催化中的应用第17页
        1.2.5 羟基维生素D_3的微生物催化的一些问题第17-18页
    1.3 离子液体与生物催化第18-24页
        1.3.1 离子液体的结构和性质第18-19页
        1.3.2 离子液体双相体系的特点第19-20页
        1.3.3 离子液体双相体系在生物催化中的应用第20-23页
        1.3.4 离子液体双相体系在生物催化应用中的问题第23-24页
    1.4 本文的研究设想与意义第24页
    1.5 本文的主要研究内容第24-25页
2 材料与方法第25-32页
    2.1 实验材料第25-27页
        2.1.1 菌株和质粒第25页
        2.1.2 试剂第25-26页
        2.1.3 培养基第26-27页
    2.2 实验仪器第27-28页
    2.3 实验方法第28-29页
        2.3.1 溶解度和分配系数的测定第28页
        2.3.2 菌株的培养及摇瓶转化第28页
        2.3.3 生物相容性的测定第28-29页
        2.3.4 芽孢杆菌生长曲线的测定第29页
    2.4 分析方法第29-32页
        2.4.1 高效液相色谱测定底物与产物浓度第29页
        2.4.2 底物和产物标准曲线的绘制第29-31页
        2.4.3 分配系数的计算第31页
        2.4.4 生物相容性的计算第31-32页
3 羟化维生素D_3菌株的筛选第32-37页
    3.1 引言第32页
    3.2 实验试剂与方法第32-33页
        3.2.1 实验试剂第32-33页
        3.2.3 实验方法第33页
    3.3 结果与讨论第33-36页
        3.3.1 羟化维生素D_3菌株的富集与分离第33-34页
        3.3.2 形态学鉴定第34页
        3.3.3 摇瓶转化第34-36页
    3.4 本章小结第36-37页
4 离子液体双相体系生物催化维生素D_3羟基化第37-45页
    4.1 引言第37页
    4.2 实验材料与方法第37-39页
        4.2.1 实验菌株第37-38页
        4.2.2 实验试剂第38页
        4.2.3 菌株的培养及摇瓶转化第38页
        4.2.4 离子液体的回收第38页
        4.2.5 高效液相色谱测定产率和转化率第38-39页
    4.3 结果与讨论第39-44页
        4.3.1 芽孢杆菌的生长曲线第39页
        4.3.2 离子液体的选择第39-41页
        4.3.3 两相体系相比对转化的影响第41-42页
        4.3.4 水相pH对转化的影响第42-43页
        4.3.5 底物浓度对转化的影响第43页
        4.3.6 离子液体的回收第43-44页
    4.4 本章小结第44-45页
5 维生素D_3羟基化酶的重组表达及催化反应第45-56页
    5.1 引言第45页
    5.2 实验试剂第45-46页
        5.2.1 核酸电泳试剂第45-46页
        5.2.2 0.5 M IPTG第46页
        5.2.3 50 mg/mL硫酸卡那霉素第46页
    5.3 实验方法第46-51页
        5.3.1 链霉菌基因组的制备第46-47页
        5.3.2 引物的设计和合成第47-48页
        5.3.3 重组表达载体的构建第48-50页
        5.3.4 重组菌株的构建与验证第50-51页
        5.3.5 P450001与P450002重组菌的生物转化第51页
    5.4 结果与讨论第51-54页
        5.4.1 P450001与P450002目的基因的获取第51-52页
        5.4.2 重组载体的构建第52-53页
        5.4.3 重组子的筛选和鉴定第53页
        5.4.4 重组子的底物投料转化第53-54页
    5.5 本章小结第54-56页
6 结论与展望第56-58页
    6.1 结论第56-57页
    6.2 展望第57-58页
参考文献第58-62页
作者简历第62页

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