| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 绪论 | 第12-25页 |
| 1.1 维生素D_3与羟基维生素D_3概述 | 第12-14页 |
| 1.1.1 维生素D_3与羟基维生素D_3的结构与性质 | 第12-13页 |
| 1.1.2 羟基维生素D_3的应用 | 第13-14页 |
| 1.2 羟基维生素D_3的生产 | 第14-18页 |
| 1.2.1 羟基维生素D_3的化学合成 | 第14-16页 |
| 1.2.2 羟基维生素D_3的动物细胞生物催化 | 第16页 |
| 1.2.3 羟基维生素D_3的微生物催化 | 第16-17页 |
| 1.2.4 基因工程技术在羟基维生素D_3生物催化中的应用 | 第17页 |
| 1.2.5 羟基维生素D_3的微生物催化的一些问题 | 第17-18页 |
| 1.3 离子液体与生物催化 | 第18-24页 |
| 1.3.1 离子液体的结构和性质 | 第18-19页 |
| 1.3.2 离子液体双相体系的特点 | 第19-20页 |
| 1.3.3 离子液体双相体系在生物催化中的应用 | 第20-23页 |
| 1.3.4 离子液体双相体系在生物催化应用中的问题 | 第23-24页 |
| 1.4 本文的研究设想与意义 | 第24页 |
| 1.5 本文的主要研究内容 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第25页 |
| 2.1.2 试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.3 培养基 | 第26-27页 |
| 2.2 实验仪器 | 第27-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-29页 |
| 2.3.1 溶解度和分配系数的测定 | 第28页 |
| 2.3.2 菌株的培养及摇瓶转化 | 第28页 |
| 2.3.3 生物相容性的测定 | 第28-29页 |
| 2.3.4 芽孢杆菌生长曲线的测定 | 第29页 |
| 2.4 分析方法 | 第29-32页 |
| 2.4.1 高效液相色谱测定底物与产物浓度 | 第29页 |
| 2.4.2 底物和产物标准曲线的绘制 | 第29-31页 |
| 2.4.3 分配系数的计算 | 第31页 |
| 2.4.4 生物相容性的计算 | 第31-32页 |
| 3 羟化维生素D_3菌株的筛选 | 第32-37页 |
| 3.1 引言 | 第32页 |
| 3.2 实验试剂与方法 | 第32-33页 |
| 3.2.1 实验试剂 | 第32-33页 |
| 3.2.3 实验方法 | 第33页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第33-36页 |
| 3.3.1 羟化维生素D_3菌株的富集与分离 | 第33-34页 |
| 3.3.2 形态学鉴定 | 第34页 |
| 3.3.3 摇瓶转化 | 第34-36页 |
| 3.4 本章小结 | 第36-37页 |
| 4 离子液体双相体系生物催化维生素D_3羟基化 | 第37-45页 |
| 4.1 引言 | 第37页 |
| 4.2 实验材料与方法 | 第37-39页 |
| 4.2.1 实验菌株 | 第37-38页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第38页 |
| 4.2.3 菌株的培养及摇瓶转化 | 第38页 |
| 4.2.4 离子液体的回收 | 第38页 |
| 4.2.5 高效液相色谱测定产率和转化率 | 第38-39页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第39-44页 |
| 4.3.1 芽孢杆菌的生长曲线 | 第39页 |
| 4.3.2 离子液体的选择 | 第39-41页 |
| 4.3.3 两相体系相比对转化的影响 | 第41-42页 |
| 4.3.4 水相pH对转化的影响 | 第42-43页 |
| 4.3.5 底物浓度对转化的影响 | 第43页 |
| 4.3.6 离子液体的回收 | 第43-44页 |
| 4.4 本章小结 | 第44-45页 |
| 5 维生素D_3羟基化酶的重组表达及催化反应 | 第45-56页 |
| 5.1 引言 | 第45页 |
| 5.2 实验试剂 | 第45-46页 |
| 5.2.1 核酸电泳试剂 | 第45-46页 |
| 5.2.2 0.5 M IPTG | 第46页 |
| 5.2.3 50 mg/mL硫酸卡那霉素 | 第46页 |
| 5.3 实验方法 | 第46-51页 |
| 5.3.1 链霉菌基因组的制备 | 第46-47页 |
| 5.3.2 引物的设计和合成 | 第47-48页 |
| 5.3.3 重组表达载体的构建 | 第48-50页 |
| 5.3.4 重组菌株的构建与验证 | 第50-51页 |
| 5.3.5 P450001与P450002重组菌的生物转化 | 第51页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第51-54页 |
| 5.4.1 P450001与P450002目的基因的获取 | 第51-52页 |
| 5.4.2 重组载体的构建 | 第52-53页 |
| 5.4.3 重组子的筛选和鉴定 | 第53页 |
| 5.4.4 重组子的底物投料转化 | 第53-54页 |
| 5.5 本章小结 | 第54-56页 |
| 6 结论与展望 | 第56-58页 |
| 6.1 结论 | 第56-57页 |
| 6.2 展望 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 作者简历 | 第62页 |
