| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 英文缩略词表 | 第8-10页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| 1 前言 | 第13-26页 |
| 1.1 细胞衰老 | 第13-19页 |
| 1.1.1 衰老细胞的特点 | 第13-15页 |
| 1.1.2 导致细胞衰老的因素及细胞衰老的分类 | 第15-18页 |
| 1.1.3 细胞衰老与组织老化的关系 | 第18-19页 |
| 1.2 自噬与细胞衰老 | 第19-21页 |
| 1.2.1 自噬的概述及其生理功能 | 第19-20页 |
| 1.2.2 自噬与衰老的关系 | 第20-21页 |
| 1.3 SIRT3 | 第21-23页 |
| 1.3.1 SIRT3 的概述 | 第21页 |
| 1.3.2 SIRT3 与衰老的关系 | 第21-22页 |
| 1.3.3 SIRT3 与自噬的关系 | 第22-23页 |
| 1.4 Caffeine | 第23-24页 |
| 1.4.1 Caffeine 的生理作用 | 第23-24页 |
| 1.4.2 Caffeine 与衰老的关系 | 第24页 |
| 1.4.3 Caffeine 与自噬的关系 | 第24页 |
| 1.5 立体依据 | 第24-26页 |
| 2 Caffeine 缓解 AAPH 诱导的 A375 细胞衰老 | 第26-42页 |
| 2.1 材料与方法 | 第26-33页 |
| 2.1.1 主要试剂与材料 | 第26-29页 |
| 2.1.2 细胞培养 | 第29页 |
| 2.1.3 MTT 法测定细胞增殖抑制率 | 第29-30页 |
| 2.1.4 ROS 生成量的检测 | 第30页 |
| 2.1.5 线粒体膜电位的检测 | 第30-31页 |
| 2.1.6 衰老相关的β‐半乳糖苷酶染色 | 第31页 |
| 2.1.7 Western blotting 检测蛋白表达 | 第31-32页 |
| 2.1.8 激光共聚焦显微镜检测衰老相关异染色质位点及相关蛋白共定位 | 第32页 |
| 2.1.9 数据统计与分析 | 第32-33页 |
| 2.2 实验结果 | 第33-40页 |
| 2.2.1 AAPH 抑制 A375 细胞增殖 | 第33页 |
| 2.2.2 AAPH 对细胞内 ROS 生成的影响 | 第33-34页 |
| 2.2.3 AAPH 对细胞线粒体膜电位的影响 | 第34页 |
| 2.2.4 衰老相关的β‐半乳糖苷酶染色法检测衰老细胞 | 第34-35页 |
| 2.2.5 AAPH 对 A375 细胞内 p53、p‐p53 和 p21 蛋白表达的影响 | 第35-36页 |
| 2.2.6 AAPH 诱导了衰老相关异染色质位点的形成 | 第36-38页 |
| 2.2.7 Caffeine 缓解 AAPH 对 A375 细胞的增殖抑制作用 | 第38页 |
| 2.2.8 Caffeine 减少 AAPH 所致细胞衰老 | 第38-39页 |
| 2.2.9 Caffeine 减少 AAPH 处理的细胞中的 p53 蛋白磷酸化和 p21 蛋白表达 | 第39-40页 |
| 2.3 小结与讨论 | 第40-42页 |
| 3 Caffeine 通过诱导自噬缓解氧化应激导致的细胞衰老 | 第42-55页 |
| 3.1 材料与方法 | 第42-48页 |
| 3.1.1 主要试剂与材料 | 第42-45页 |
| 3.1.2 细胞培养 | 第45页 |
| 3.1.3 激光共聚焦显微镜检测自噬小体及相关蛋白共定位 | 第45-46页 |
| 3.1.4 Western blotting 检测蛋白表达 | 第46-47页 |
| 3.1.5 透射电子显微镜观察细胞的自噬结构 | 第47页 |
| 3.1.6 线粒体膜电位的检测 | 第47-48页 |
| 3.1.7 数据统计与分析 | 第48页 |
| 3.2 实验结果 | 第48-53页 |
| 3.2.1 Caffeine 增加细胞内的自噬小体 | 第48-50页 |
| 3.2.2 Caffeine 增加了 AAPH 处理的细胞的自噬相关蛋白表达 | 第50-51页 |
| 3.2.3 透射电子显微镜观察 Caffeine 诱导自噬的情况 | 第51页 |
| 3.2.4 自噬水平提高对 AAPH 处理的细胞中的 p53 磷酸化和 p21 表达的影响 | 第51-52页 |
| 3.2.5 自噬水平提高对 AAPH 处理的细胞中的线粒体膜电位的影响 | 第52-53页 |
| 3.3 小结与讨论 | 第53-55页 |
| 4 Caffeine 通过拮抗 A2A 受体而激活 SIRT3/AMPK 信号通路进而诱导自噬 | 第55-72页 |
| 4.1 材料与方法 | 第55-61页 |
| 4.1.1 主要试剂与材料 | 第55-58页 |
| 4.1.2 细胞培养 | 第58-59页 |
| 4.1.3 Western blotting 检测蛋白表达 | 第59页 |
| 4.1.4 激光共聚焦显微镜检测衰老相关异染色质位点及相关蛋白共定位 | 第59-60页 |
| 4.1.5 siRNA 转染实验 | 第60-61页 |
| 4.1.6 数据统计与分析 | 第61页 |
| 4.2 实验结果 | 第61-70页 |
| 4.2.1 Caffeine 及 A2A 腺苷受体对 AAPH 处理的细胞中 SIRT3 蛋白表达和 AMPK 蛋白磷酸化的影响 | 第61-62页 |
| 4.2.2 A2A 腺苷受体对 AAPH 处理的细胞中自噬相关蛋白表达的影响 | 第62-63页 |
| 4.2.3 A2A 受体对 AAPH 处理的细胞中 p53 蛋白磷酸化和 p21 蛋白表达的影响 | 第63-64页 |
| 4.2.4 Caffeine 及 A2A 受体对 AAPH 处理的细胞中衰老相关异染色质位点形成的影响 | 第64-66页 |
| 4.2.5 SIRT3 siRNA 转染效率及 SIRT3 沉默对 AMPK 磷酸化的影响 | 第66-68页 |
| 4.2.6 SIRT3 沉默对自噬相关蛋白表达的影响 | 第68-69页 |
| 4.2.7 SIRT3 沉默对 p53 磷酸化和 p21 表达的影响 | 第69-70页 |
| 4.3 小结与讨论 | 第70-72页 |
| 5 结论和展望 | 第72-75页 |
| 5.1 结论 | 第72-73页 |
| 5.2 创新和突破 | 第73页 |
| 5.3 展望 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-87页 |
| 致谢 | 第87-89页 |
| 在学期间发表论文 | 第89页 |
