| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 主要符号对照表 | 第12-14页 |
| 第1章 引言 | 第14-28页 |
| 1.1 基因治疗与免疫反应 | 第15-22页 |
| 1.1.1 基因治疗载体引起的免疫反应 | 第15-19页 |
| 1.1.2 转基因产物引起的免疫反应 | 第19-20页 |
| 1.1.3 克服免疫反应的策略 | 第20-22页 |
| 1.2 miRNA 与免疫系统 | 第22-25页 |
| 1.2.1 miRNA 作用机理 | 第22-24页 |
| 1.2.2 miR155 在免疫系统中的作用 | 第24-25页 |
| 1.3 本文研究思路 | 第25-28页 |
| 1.3.1 DC 的制备与鉴定 | 第26页 |
| 1.3.2 mDC 中内源性 miR155 特异性高表达验证 | 第26页 |
| 1.3.3 新型非病毒载体的构建 | 第26页 |
| 1.3.4 新型重组慢病毒载体的制备 | 第26页 |
| 1.3.5 新型基因治疗载体的转基因表达 | 第26页 |
| 1.3.6 新型慢病毒载体在 DC 中的抗原呈递 | 第26页 |
| 1.3.7 新型慢病毒载体转导的 DC 对 T 细胞的激活作用 | 第26-28页 |
| 第2章 DC 的制备与鉴定 | 第28-36页 |
| 2.1 实验材料、试剂与仪器 | 第28-30页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第29页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-31页 |
| 2.2.1 主要试剂的配制 | 第30页 |
| 2.2.2 DC 的制备 | 第30-31页 |
| 2.2.3 DC 的鉴定 | 第31页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第31-34页 |
| 2.3.1 倒置显微镜观察结果 | 第31-32页 |
| 2.3.2 透射电镜观察结果 | 第32-33页 |
| 2.3.3 DC 表面分子检测结果 | 第33-34页 |
| 2.4 小结 | 第34-36页 |
| 第3章 mDC 中内源性 miR155 特异性高表达验证 | 第36-46页 |
| 3.1 实验材料、试剂与仪器 | 第36-37页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第36页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第36-37页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-42页 |
| 3.2.1 主要试剂的配制 | 第37-38页 |
| 3.2.2 细胞复苏、培养、传代及冻存 | 第38-39页 |
| 3.2.3 TRIzol 法提取细胞总 RNA | 第39页 |
| 3.2.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第39-40页 |
| 3.2.5 实时荧光定量 PCR 分析（qReal-time PCR） | 第40-41页 |
| 3.2.6 统计学处理 | 第41-42页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第42-44页 |
| 3.3.1 RNA 质量检查 | 第42页 |
| 3.3.2 不同成熟度 DC 中内源性 miR155 的相对表达量 | 第42-43页 |
| 3.3.3 不同细胞中内源性 miR155 的相对表达量 | 第43-44页 |
| 3.4 小结 | 第44-46页 |
| 第4章 新型非病毒载体的构建 | 第46-60页 |
| 4.1 实验材料、试剂和仪器 | 第47-48页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第48页 |
| 4.1.3 实验主要仪器 | 第48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48-56页 |
| 4.2.1 主要试剂的配制 | 第48-49页 |
| 4.2.2 重组质粒 pFluc-Gluc 的构建 | 第49-52页 |
| 4.2.3 重组质粒的提取及鉴定 | 第52-53页 |
| 4.2.4 pFluc-Gluc-miR155T 质粒构建 | 第53-55页 |
| 4.2.5 miRNA mimic 合成、配制与存储 | 第55页 |
| 4.2.6 miRNA mimic 与新型重组质粒共转染 | 第55-56页 |
| 4.2.7 双荧光素酶报告基因检测 | 第56页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第56-58页 |
| 4.3.1 重组质粒 psiCHECK-2、pFluc-Gluc 的酶切鉴定 | 第56-57页 |
| 4.3.2 重组质粒 pFluc-Gluc-miR155T(1-3)的酶切鉴定 | 第57页 |
| 4.3.3 miR155T 串联数量的筛选 | 第57-58页 |
| 4.4 小结 | 第58-60页 |
| 第5章 新型重组慢病毒载体的制备 | 第60-65页 |
| 5.1 实验材料、试剂和仪器 | 第60-61页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第60-61页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第61页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第61页 |
| 5.2 实验方法 | 第61-64页 |
| 5.2.1 主要试剂的配制 | 第61-62页 |
| 5.2.2 重组慢病毒 Lv.Gluc 和 Lv.Gluc-miR155T 的制备 | 第62-64页 |
| 5.3 实验结果与分析 | 第64页 |
| 5.3.1 重组慢病毒 Lv.Gluc 和 Lv.Gluc-miR155T 的滴度测定 | 第64页 |
| 5.4 小结 | 第64-65页 |
| 第6章 新型基因治疗载体的转基因表达 | 第65-70页 |
| 6.1 实验材料、试剂与仪器 | 第65-66页 |
| 6.1.1 实验材料 | 第65页 |
| 6.1.2 实验试剂 | 第65页 |
| 6.1.3 实验仪器 | 第65-66页 |
| 6.2 实验方法 | 第66-67页 |
| 6.2.1 主要试剂的配制 | 第66页 |
| 6.2.2 新型重组质粒转染不同的正常细胞 | 第66页 |
| 6.2.3 新型重组慢病毒感染不同细胞 | 第66-67页 |
| 6.2.4 统计学处理 | 第67页 |
| 6.3 实验结果与分析 | 第67-69页 |
| 6.3.1 miR155 mimic 与新型重组质粒的量效关系 | 第67-68页 |
| 6.3.2 新型重组质粒在不同正常细胞中的表达 | 第68页 |
| 6.3.3 新型重组慢病毒在不同细胞中的表达 | 第68-69页 |
| 6.4 小结 | 第69-70页 |
| 第7章 新型慢病毒载体在 DC 中的抗原呈递 | 第70-74页 |
| 7.1 实验材料、试剂与仪器 | 第70-71页 |
| 7.1.1 实验材料 | 第70-71页 |
| 7.1.2 实验试剂 | 第71页 |
| 7.1.3 实验仪器 | 第71页 |
| 7.2 实验方法 | 第71页 |
| 7.2.1 抗原递呈检测 | 第71页 |
| 7.3 实验结果与分析 | 第71-72页 |
| 7.3.1 Lv.OVA 和 Lv.OVA-miR155T 在 DC 中的抗原呈递 | 第71-72页 |
| 7.4 小结 | 第72-74页 |
| 第8章 新型慢病毒载体转导的 DC 对 T 细胞的激活作用 | 第74-80页 |
| 8.1 实验材料、试剂与仪器 | 第74-75页 |
| 8.1.1 实验材料 | 第74页 |
| 8.1.2 实验试剂 | 第74-75页 |
| 8.1.3 实验仪器 | 第75页 |
| 8.2 实验方法 | 第75-77页 |
| 8.2.1 小鼠 DC 的制备 | 第75页 |
| 8.2.2 小鼠 T 细胞的制备 | 第75页 |
| 8.2.3 慢病毒感染小鼠 DC | 第75-76页 |
| 8.2.4 EdU 染色 | 第76页 |
| 8.2.5 混合淋巴反应 | 第76页 |
| 8.2.6 EdU 染色观察 | 第76-77页 |
| 8.3 实验结果与分析 | 第77-78页 |
| 8.3.1 新型慢病毒载体转导的 DC 对 T 细胞的激活 | 第77-78页 |
| 8.4 小结 | 第78-80页 |
| 总结与展望 | 第80-82页 |
| 创新点 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-92页 |
| 致谢 | 第92-94页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文及研究成果 | 第94页 |
